本发明专利技术涉及文物检测技术领域，公开了一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，包括：A)阳性对照I、阴性对照II和检测组III的制备；B)向I，II，III的硝酸纤维素膜（NC膜）滴加牛血清蛋白溶液；C)向I，III的NC膜滴加兔抗羊毛角蛋白抗体溶液；向II的NC膜滴加磷酸盐缓冲溶液；D)向I，III的NC膜滴加磷酸盐缓冲溶液进行洗涤；E)向I，II，III的NC膜滴加荧光标记山羊抗兔抗体溶液；F)向I，II，III的NC膜滴加磷酸盐缓冲溶液进行洗涤；G)紫外灯照射检测。本发明专利技术采用斑点荧光免疫渗滤的方法来检测古代羊毛织品，操作简单，成本低，灵敏度更高，反应时间短，检测精确性好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及文物检测
，尤其涉及一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法。
技术介绍
羊毛织品由羊毛编织而成，由于其优良的保暖性能，自古以来便广泛应用于北方地区。出土的羊毛织品是我国的宝贵遗产，但是羊毛作为一种蛋白质材料，在墓葬环境的酸、碱、盐、氧化剂、还原剂、卤素等条件下，具有一定的不稳定性而发生降解，以至于外观严重受到破坏而腐朽，肉眼根本无法识别。在检测文物样品时，文物样品是否完整以及成分是否复杂对常规检测方法的结果影响较大，给研究工作者带来了一定的困难。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法。本专利技术方法本采用斑点荧光免疫渗滤的方法来检测古代羊毛织品，操作简单，成本低，灵敏度更高，反应时间短，检测精确性好。本专利技术的具体技术方案为：一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，步骤如下：A)取三个塑料盒，分别在塑料盒盖子的中央打一个孔；在盖底填充两层吸水垫；在吸水垫上面放置一片硝酸纤维素膜；然后在其中两个塑料盒的硝酸纤维素膜上点加1-2mL浓度为0.5-3mg/L的羊毛角蛋白溶液，室温下晾干，将上述两个塑料盒标记为I和II，其中I为阳性对照，II为阴性对照；取文物样并将其在90-110倍质量的磷酸盐缓冲溶液中溶解1.5-2.5h，取80-100μL的上清液，将其点加在剩余的塑料盒的硝酸纤维素膜上，室温下晾干，标记为III。B)向I，II，III的孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL浓度为0.5-1.5wt%的牛血清蛋白溶液。C)向I，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL稀释后的兔抗羊毛角蛋白抗体溶液；向II孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL磷酸盐缓冲溶液。D)向I，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL磷酸盐缓冲溶液进行洗涤，共滴加三次。E)向I，II，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL的已稀释100-400倍的荧光标记山羊抗兔抗体溶液。F)向I，II，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL磷酸盐缓冲溶液进行洗涤；共滴加三次。G)将I，II，III放置于波长为365nm的紫外灯下观察结果，I的硝酸纤维素膜上有荧光斑点出现，II的硝酸纤维素膜上没有荧光斑点出现；若III的硝酸纤维素膜上有荧光斑点出现，则说明检测的文物样是羊毛织品。本专利技术可根据硝酸纤维素膜上是否出现荧光半点来对文物样是否含有羊毛角蛋白成分进行定性分析。本专利技术方法的检测步骤简单，检测时间短，检测结果快速，直观。作为优选，所述塑料盒的规格为4×3×0.6cm，所述孔的直径为0.3-0.8cm。作为优选，所述磷酸盐缓冲溶液的pH为7.4。作为优选，所述稀释后的兔抗羊毛角蛋白抗体溶液的浓度为0.01-0.02mg/mL。作为优选，所述荧光标记山羊抗兔抗体溶液的制备方法如下：向每2.5-3.5mLpH为5.5的PBS缓冲液中依次加入0.14-0.16mg的荧光微球、2.6-2.8μL的现配的浓度为4-6mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液和8-12μL的浓度为1mg/mL的山羊抗兔抗体溶液，得到混合液，将所述混合液在室温下搅拌1.5-2.5h，用1wt%的牛血清蛋白溶液封闭25-35min后在8000-10000r/min、4℃条件下离心处理8-12min，移除上清液，将沉淀加入到体积为山羊抗兔抗体溶液1倍pH为5.5的PBS缓冲液中复溶、混匀，制得荧光标记山羊抗兔抗体溶液。上述方法制备的荧光标记山羊抗兔抗体溶液反应灵敏度高，反应时间短，检测精确性好。作为优选，所述荧光微球为聚苯乙烯荧光微球，粒径为100-110nm，激发波长为365nm，发射波长为610nm。作为优选，所述牛血清蛋白溶液的用量为混合液体积的1-1.2倍。与现有技术对比，本专利技术的有益效果是：采用斑点荧光免疫渗滤的方法来检测古代羊毛织品，操作简单，成本低，灵敏度更高，反应时间短，检测精确性好。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述。实施例1一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，步骤如下：A)取三个规格为4×3×0.6cm的塑料盒，分别在塑料盒盖子的中央打一个直径为0.55cm孔；在盖底填充两层吸水垫；在吸水垫上面放置一片硝酸纤维素膜；然后在其中两个塑料盒的硝酸纤维素膜上点加1.5mL浓度为1.75mg/L的羊毛角蛋白溶液，室温下晾干，将上述两个塑料盒标记为I和II，其中I为阳性对照，II为阴性对照；取文物样并将其在100倍质量的pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中溶解2h，取90μL的上清液，将其点加在剩余的塑料盒的硝酸纤维素膜上，室温下晾干，标记为III。B)向I，II，III的孔下面的硝酸纤维素膜上滴加90μL浓度为1wt%的牛血清蛋白溶液。C)向I，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加90μL稀释后的浓度为0.015mg/mL的兔抗羊毛角蛋白抗体溶液；向II孔下面的硝酸纤维素膜上滴加90μLpH为7.4的磷酸盐缓冲溶液。D)向I，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加90μLpH为7.4的磷酸盐缓冲溶液进行洗涤，共滴加三次；E)向I，II，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加90μL的已稀释250倍的荧光标记山羊抗兔抗体溶液。上述荧光标记山羊抗兔抗体溶液的制备方法如下：向3mLpH为5.5的PBS缓冲液中依次加入0.15mg的聚苯乙烯荧光微球（粒径为105nm，激发波长为365nm，发射波长为610nm）、2.7μL的现配的浓度为5mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液和10μL的浓度为1mg/mL的山羊抗兔抗体溶液，得到混合液，将所述混合液在室温下搅拌2h，用体积为混合液体积的1.1倍的1wt%的牛血清蛋白溶液封闭30min后在9000r/min、4℃条件下离心处理10min，移除上清液，将沉淀加入到体积为山羊抗兔抗体溶液1倍pH为5.5的PBS缓冲液中复溶、混匀，制得荧光标记山羊抗兔抗体溶液。F)向I，II，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加90μL的pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液进行洗涤；共滴加三次。G)将I，II，III放置于波长为365nm的紫外灯下观察结果，I的硝酸纤维素膜上有荧光斑点出现，II的硝酸纤维素膜上没有荧光斑点出现；检测结果为III的硝酸纤维素膜上有荧光斑点出现，则说明检测的文物样是羊毛织品。实施例2一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，步骤如下：A)取三个规格为4×3×0.6cm的塑料盒，分别在塑料盒盖子的中央打一个直径为0.3cm孔；在盖底填充两层吸水垫；在吸水垫上面放置一片硝酸纤维素膜；然后在其中两个塑料盒的硝酸纤维素膜上点加1mL浓度为3mg/L的羊毛角蛋白溶液，室温下晾干，将上述两个塑料盒标记为I和II，其中I为阳性对照，II为阴性对照；取文物本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，其特征在于步骤如下：A)取三个塑料盒，分别在塑料盒盖子的中央打一个孔；在盖底填充两层吸水垫；在吸水垫上面放置一片硝酸纤维素膜；然后在其中两个塑料盒的硝酸纤维素膜上点加1‑2mL浓度为0.5‑3mg/L的羊毛角蛋白溶液，室温下晾干，将上述两个塑料盒标记为I和II，其中I为阳性对照，II 为阴性对照；取文物样并将其在90‑110倍质量的磷酸盐缓冲溶液中溶解1.5‑2.5h，取80‑100μL的上清液，将其点加在剩余的塑料盒的硝酸纤维素膜上，室温下晾干，标记为III；B)向I，II，III的孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80‑100μL浓度为0.5‑1.5wt%的牛血清蛋白溶液；C)向I，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80‑100μL稀释后的兔抗羊毛角蛋白抗体溶液；向II孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80‑100μL磷酸盐缓冲溶液；D)向I，III 孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80‑100μL磷酸盐缓冲溶液进行洗涤，共滴加三次；E) 向I，II，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80‑100μL的已稀释100‑400倍的荧光标记山羊抗兔抗体溶液；F) 向I，II，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80‑100μL磷酸盐缓冲溶液进行洗涤；共滴加三次；G) 将I，II，III放置于波长为365nm的紫外灯下观察结果，I的硝酸纤维素膜上有荧光斑点出现，II的硝酸纤维素膜上没有荧光斑点出现；若III的硝酸纤维素膜上有荧光斑点出现，则说明检测的文物样是羊毛织品。...
【技术特征摘要】
1.一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊毛织品的检测方法，其特征在于步骤如下：
A)取三个塑料盒，分别在塑料盒盖子的中央打一个孔；在盖底填充两层吸水垫；在吸水垫上面放置一片硝酸纤维素膜；然后在其中两个塑料盒的硝酸纤维素膜上点加1-2mL浓度为0.5-3mg/L的羊毛角蛋白溶液，室温下晾干，将上述两个塑料盒标记为I和II，其中I为阳性对照，II为阴性对照；取文物样并将其在90-110倍质量的磷酸盐缓冲溶液中溶解1.5-2.5h，取80-100μL的上清液，将其点加在剩余的塑料盒的硝酸纤维素膜上，室温下晾干，标记为III；
B)向I，II，III的孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL浓度为0.5-1.5wt%的牛血清蛋白溶液；
C)向I，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL稀释后的兔抗羊毛角蛋白抗体溶液；向II孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL磷酸盐缓冲溶液；
D)向I，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL磷酸盐缓冲溶液进行洗涤，共滴加三次；
E)向I，II，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL的已稀释100-400倍的荧光标记山羊抗兔抗体溶液；
F)向I，II，III孔下面的硝酸纤维素膜上滴加80-100μL磷酸盐缓冲溶液进行洗涤；共滴加三次；
G)将I，II，III放置于波长为365nm的紫外灯下观察结果，I的硝酸纤维素膜上有荧光斑点出现，II的硝酸纤维素膜上没有荧光斑点出现；若III的硝酸纤维素膜上有荧光斑点出现，则说明检测的文物样是羊毛织品。
2.如权利要求1所述的一种斑点荧光免疫渗滤测定古代羊...
【专利技术属性】
技术研发人员：周旸，郑海玲，赵丰，汪自强，刘剑，王淑娟，龙博，杨海亮，
申请(专利权)人：中国丝绸博物馆，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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