【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肿瘤免疫治疗
,具体涉及一种抗CD33嵌合抗原受体、编码基因、重组表达载体(尤其是一种基于复制缺陷性重组慢病毒的CAR-T转基因载体)及其构建方法和应用。
技术介绍
肿瘤免疫治疗的理论基础是免疫系统具有识别肿瘤相关抗原、调控机体攻击肿瘤细胞(高度特异性的细胞溶解)的能力。这个生物过程十分复杂,目前仍处于研究之中。上世纪90年代,多个科研小组已经发现了肿瘤抗原(tμmorantigens),T淋巴细胞可以通过主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex,MHC)依赖性方式识别这些肿瘤抗原。肿瘤免疫治疗通常分为两类,非特异性免疫和特异性免疫。非特异性免疫治疗主要包括白细胞介素-2(interleμkin-2,IL-2),干扰素α(interferonα,IFN-α),肿瘤坏死因子(tμmornecrosisfactor,TNF-α),卡介苗等细胞因子和毒素,过继性细胞免疫治疗等。特异性免疫治疗主要是肿瘤疫苗。1.1肿瘤非特异性免疫治疗非特异性免疫应答是与生俱来的,它的形成并不需要抗原刺激,能广泛地针对多种抗原,是免疫应答的基础,但特异性不强,对某种特定抗原物质往往不能产生足够强度的反应非特异性的免疫治疗。在进入临床试验的多种细胞因子中,白细胞介素-2和干扰素应用最为广泛[RosenbergSA,LotzeMT,MμμlLM,etal.Aprogressrepo ...
【技术保护点】
一种抗CD33嵌合抗原受体,包括依次串联的CD8leader嵌合受体信号肽、CD33单链抗体重链VL、Optimal Linker C、CD33单链抗体轻链VH、CD8Hinge嵌合受体铰链、CD8Transmembrane嵌合受体跨膜区、CD137嵌合受体共刺激因子,以及TCR嵌合受体T细胞激活域。
【技术特征摘要】
1.一种抗CD33嵌合抗原受体,包括依次串联的CD8leader嵌合受体信号肽、CD33单链抗
体重链VL、OptimalLinkerC、CD33单链抗体轻链VH、CD8Hinge嵌合受体铰链、
CD8Transmembrane嵌合受体跨膜区、CD137嵌合受体共刺激因子,以及TCR嵌合受体T细胞激
活域。
2.根据权利要求1所述的抗CD33嵌合抗原受体,其特征在于:所述嵌合抗原受体的氨基
酸序列如SEQIDNO.50所示。
3.一种抗CD33嵌合抗原受体,包括依次串联的CD8leader嵌合受体信号肽、CD33单链抗
体重链VL、OptimalLinkerC、CD33单链抗体轻链VH、CD8Hinge嵌合受体铰链、
CD8Transmembrane嵌合受体跨膜区、CD28嵌合受体共刺激因子、CD137嵌合受体共刺激因
子、以及TCR嵌合受体T细胞激活域。
4.根据权利要求3所述的抗CD33嵌合抗原受体,其特征在于:所述嵌合抗原受体的氨基
酸序列如SEQIDNO.51所示。
5.编码权利要求1-4任一项所述的抗CD33嵌合抗原受体的基因。
6.根据权利要求5所述的基因,其特征在于:所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.52或
SEQIDNO.53所示。
7.含有权利要求5或6所述的基因的重组表达载体。
8.根据权利要求7所述的重组表达载体,其特征在于:所述表达载体为慢病毒表达载
体、逆转录病毒表达载体、腺病毒表达载体、腺相关病毒表达载体或质粒。
9.根据权利要求8所述的重组表达载体,其特征在于:所述的慢病毒表达载体包含权利
要求5所述的基因。
10.根据权利要求9所述的重组表达载体,其特征在于:所述的慢病毒表达载体包括:用
于质粒复制的原核复制子pUCOri序列;用于目的菌株大量扩增的含氨苄青霉素抗性基因
AmpR序列;用于增强真核细胞内的复制的病毒复制子SV40Ori序列;用于慢病毒包装的慢病
毒包装顺式元件;用于真核细胞表达绿色荧光的ZsGreen1绿色荧光蛋白;用于共同转录表
达蛋白质的IRES核糖体结合序列;用于嵌合抗原受体基因的真核转录的人EF1α启动子;用
于组成集识别、传递、启动于一体的二代CAR或三代CAR的嵌合抗原受体的编码基因;用于增
强转基因的表达效率的eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件。
11.根据权利要求9所述的重组表达载体,其特征在于,所述慢病毒包装顺式元件采用
第二代慢病毒载体包括:慢病毒5terminalLTR、慢病毒3terminalSelf-...
【专利技术属性】
技术研发人员:祁伟,俞磊,欧黄思,
申请(专利权)人:上海优卡迪生物医药科技有限公司,
类型:发明
国别省市:上海;31
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