一种利用气相二氧化硅从人血浆中提取载脂蛋白A-1的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用气相二氧化硅从人血浆中提取载脂蛋白A-1的方法，具体步骤为：（1）在血浆中加入气相二氧化硅并混合均匀，混合物常温静置5-100分钟；（2）将得到的混合物离心处理收集固体沉淀物备用；（3）将得到的固体沉淀物用摩尔浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液进行洗涤，洗涤后离心处理收集固体沉淀物备用；（4）将得到的固体沉淀物用apoA1洗脱液进行洗涤，洗涤后离心处理得到的液体即为载脂蛋白A-1溶液。本发明专利技术通过简单快速的分离过程得到人血浆中的apoA1成分，分离过程仅使用离心机即可完成，因此是一种快速且具有选择性的固液分离方法。相较于硅藻土对apoA1的吸附，所添加的气相二氧化硅成份单一，对目的产物吸附的选择性较好，产物更加可控。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蛋白质提取
，具体涉及一种利用气相二氧化硅从人血浆中提取载脂蛋白A-1的方法。
技术介绍
载脂蛋白A1（apoA1）在血浆中含量介于1.06-1.21g/L之间。ApoA1与人体胆固醇代谢密切相关，人血浆中的apoA1含量越高，罹患心脑血管疾病的风险越低。目前制药工业中从人血浆制备蛋白质的主要方法为cohn法，又称为冷乙醇沉淀法，在传统cohn法中载脂蛋白A-1主要被硅藻土吸附而难以回收利用。现有从人血浆中制备载脂蛋白A1的方法主要有高速密度梯度离心法和液相色谱层析法。Cohn法不能够有效回收利用载脂蛋白A1，高速密度梯度离心法依赖大型昂贵设备，液相色谱法工序复杂，处理时间较长。由于apoA1相对于血浆中其他蛋白质拥有较高的疏水性，其表现出较高的离液性，在血浆中添加有大比表面积的固体吸附剂的情况下，更倾向于被吸附沉淀。硅藻土是血液制品工业中用来澄清血浆的常用固体吸附剂，硅藻土主要成分为二氧化硅，但是硅藻土作为一种矿物质，含有较多的杂质，比表面积相对较小。澄清血浆后的硅藻土滤饼中含有前白蛋白等较多杂质成分。气相二氧化硅拥有极大的比表面积，吸附能力较强，被用做药物或疫苗缓释载体，也被用作增稠剂或触变剂。但是目前尚未有相关文献报道将其用于蛋白质的纯化过程。
技术实现思路
本专利技术解决的技术问题是提供了一种利用气相二氧化硅从人血浆中提取载脂蛋白A-1的方法，该方法基于气相二氧化硅是一种大比表面积吸附剂的原理，在特定条件下加入到血浆中吸附沉淀其中的apoA1，通过对沉淀复合物的洗涤解吸附得到较高纯度的apoA1蛋白。本专利技术为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种利用气相二氧化硅从人血浆中提取载脂蛋白A-1的方法，其特征在于具体步骤为：（1）在血浆中加入气相二氧化硅并混合均匀，其中1mL血浆对应气相二氧化硅的质量为2~35mg，混合物常温静置5-100分钟；（2）将步骤（1）得到的混合物置于离心机中在2000~14000g的条件下离心处理10分钟，收集固体沉淀物备用；（3）将步骤（2）得到的固体沉淀物用摩尔浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液进行洗涤，洗涤后置于离心机中在与步骤（2）相同的条件下离心处理10分钟，收集固体沉淀物备用；（4）将步骤（3）得到的固体沉淀物用apoA1洗脱液进行洗涤，其中apoA1洗脱液为Tris-HCl摩尔浓度50mmol/L、乙醇体积浓度10%-40%和pH=7.4的混合溶液，洗涤后置于离心机中在与步骤（2）相同的条件下离心处理10分钟，离心得到的液体即为载脂蛋白A-1溶液。进一步限定，步骤（1）中1mL血浆对应气相二氧化硅的质量为5~20mg。进一步限定，步骤（1）中室温静置时间为40~80分钟。进一步限定，步骤（2）中的离心处理条件为12000g。进一步限定，步骤（4）中apoA1洗脱液为Tris-HCl摩尔浓度50mmol/L、乙醇体积浓度20%和pH=7.4的混合溶液。本专利技术通过简单快速的分离过程得到人血浆中的apoA1成分，分离过程仅使用离心机即可完成，因此是一种快速且具有选择性的固液分离方法。相比于常用的柱层析或硫酸铵沉淀技术，该方法设备依赖少，操作简单。相较于硅藻土对apoA1的吸附，所添加的气相二氧化硅成份单一，对目的产物吸附的选择性较好，产物更加可控。附图说明图1是本专利技术实施例1中气相二氧化硅添加比例对apoA1的吸附效果SDS-PAGE检测图；图2是本专利技术实施例2中气相二氧化硅吸附时间对apoA1吸附效果的SDS-PAGE检测图；图3是本专利技术实施例4中乙醇体积浓度对apoA1从气相二氧化硅上洗脱效果的影响图。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本专利技术上述内容实现的技术均属于本发明的范围。实施例1（1）取1mL血浆分别放入8个1.5mL的离心管中，然后在不同的离心管中分别加入2mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg和35mg气相二氧化硅，并混合均匀，混合物常温放置80分钟；（2）将步骤（1）得到的混合物置于离心机中在12000g的条件下离心处理10分钟，收集固体沉淀物备用；（3）将步骤（2）得到的固体沉淀物用摩尔浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液进行洗涤，洗涤后置于离心机中在12000g的条件下离心处理10分钟，收集固体沉淀物备用；（4）将步骤（3）得到的固体沉淀物用apoA1洗脱液进行洗涤，其中apoA1洗脱液为Tris-HCl摩尔浓度50mmol/L、乙醇体积浓度20%和pH=7.4的混合溶液，洗涤后置于离心机中在12000g的条件下离心处理10分钟，离心得到的液体即为载脂蛋白A-1溶液。SDS-PAGE检测从气相二氧化硅中洗脱的apoA1的纯度（图1）。其中电泳泳道顺序为1、蛋白质分子量标准；2、人血浆；3、气相二氧化硅2mgapoA1洗脱液；4、气相二氧化硅5mgapoA1洗脱液；5、气相二氧化硅10mgapoA1洗脱液；6、气相二氧化硅15mgapoA1洗脱液；7、气相二氧化硅20mgapoA1洗脱液；8、气相二氧化硅25mgapoA1洗脱液；9、气相二氧化硅30mg；10、气相二氧化硅35mgapoA1洗脱液。实施例2（1）取1mL血浆分别放入7个1.5mL的离心管中，然后在不同的离心管中分别加入10mg气相二氧化硅，并混合均匀，混合物常温分别放置5、10、20、30、40、50、60、80、100分钟；（2）将步骤（1）得到的混合物置于离心机中在12000g的条件下离心处理10分钟，收集固体沉淀物备用；（3）将步骤（2）得到的固体沉淀物用摩尔浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液进行洗涤，洗涤后置于离心机中在12000g的条件下离心处理10分钟，收集固体沉淀物备用；（4）将步骤（3）得到的固体沉淀物用apoA1洗脱液进行洗涤，其中apoA1洗脱液为Tris-HCl摩尔浓度50mmol/L、乙醇体积浓度20%和pH=7.4的混合溶液，洗涤后置于离心机中在12000g的条件下离心处理10分钟，离心得到的液体即为载脂蛋白A-1溶液。SDS-PAGE检测从气相二氧化硅中洗脱的apoA1的纯度（图2）。其中电泳泳道1、蛋白质分子量标准；2、气相二氧化硅吸附100分钟apoA1洗脱结果；3、气相二氧化硅吸附80分钟apoA1洗脱结果；4、气相二氧化硅吸附60分钟apoA1洗脱结果；5、气相本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用气相二氧化硅从人血浆中提取载脂蛋白A‑1的方法，其特征在于具体步骤为：（1）在血浆中加入气相二氧化硅并混合均匀，其中1mL血浆对应气相二氧化硅的质量为2~35mg，混合物常温静置5‑100分钟；（2）将步骤（1）得到的混合物置于离心机中在2000~14000g的条件下离心处理10分钟，收集固体沉淀物备用；（3）将步骤（2）得到的固体沉淀物用摩尔浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液进行洗涤，洗涤后置于离心机中在与步骤（2）相同的条件下离心处理10分钟，收集固体沉淀物备用；（4）将步骤（3）得到的固体沉淀物用apoA1洗脱液进行洗涤，其中apoA1洗脱液为Tris‑HCl摩尔浓度50mmol/L、乙醇体积浓度10%‑40%和pH=7.4的混合溶液，洗涤后置于离心机中在与步骤（2）相同的条件下离心处理10分钟，离心得到的液体即为载脂蛋白A‑1溶液。

【技术特征摘要】
1.一种利用气相二氧化硅从人血浆中提取载脂蛋白A-1的方法，其特征在于具体步骤
为：
（1）在血浆中加入气相二氧化硅并混合均匀，其中1mL血浆对应气相二氧化硅的质量为
2~35mg，混合物常温静置5-100分钟；
（2）将步骤（1）得到的混合物置于离心机中在2000~14000g的条件下离心处理10分钟，
收集固体沉淀物备用；
（3）将步骤（2）得到的固体沉淀物用摩尔浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液进行洗涤，洗涤
后置于离心机中在与步骤（2）相同的条件下离心处理10分钟，收集固体沉淀物备用；
（4）将步骤（3）得到的固体沉淀物用apoA1洗脱液进行洗涤，其中apoA1洗脱液为Tris-
HCl摩尔浓度50mmol/L、乙醇体积浓度10%-40%和pH=7.4的混合溶液，洗涤后置于离心机中
在与步...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶玲，杨中智，李光飞，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：河南;41