一种使茯苓高产三萜酸的纯小麦培养基及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种使茯苓高产三萜酸的纯小麦培养基，表明了一套测定纯小麦栽培料培养过程中的总三萜、多糖和三萜酸的方法与步骤，通过该方法测定的固体栽培料在培养到25天是三萜酸达到最大。目前在灵芝在液体发酵过程中胞外三萜酸可以达到200mg/L，茯苓仅仅达到50mg/L，而通过本发明专利技术纯小麦培养基进行固体发酵，胞外三萜酸高达130mg/L，是液体发酵胞外三萜酸浓度的2倍以上。目前已有利用纯小麦培养茯苓作为酸奶添加剂。但通过纯小麦培养，测定其中三萜酸含量的变化以及最高积累量仍未见报道。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物发酵工程领域，具体的说涉及一种使茯苓高产三萜酸的纯小麦培养基及其制备方法。
技术介绍
茯苓为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，多寄生于马尾松或赤松的根部。在我国传统医学中，茯苓的药用已有二千多年的历史，其性味甘平，归心、肺、脾经，能渗湿利水、健脾安神，被誉为中药四君八珍之一，是多种方剂配伍的要药及中成药的重要原料。茯苓因其药用部位不同，而有不同的名称和功用。经国内外专家对茯苓化学成分的深入研究，茯苓的主要成分为三萜系化合物(茯苓素)和茯苓聚糖，另外还含有一些氨基酸、蛋白质、脂肪等。其所含有的大量三萜类物质具有免疫调节、抗肿瘤和抗炎等作用，茯苓是医家常用药物，茯苓药性缓和，能益心脾、利水湿、补而不峻、利而不湿，既能扶正又能祛邪，在我国医药宝库中占有非常重要的地位。其中茯苓多糖和三萜为其主要活性成分，国内外在茯苓多糖、三萜等成份及其药理作用、生物活性方面作了较多的研究，并且有了较大的进展。三萜酸具有减肥、降血糖、抗癌、抗肿瘤、抗肝损伤、抗菌消炎和抗病毒等多种生物学活性,开发前景广阔。因此，开发研究茯苓三萜酸提取物具有重要的意义。目前在灵芝在液体发酵过程中胞外三萜酸可以达到200mg/L，茯苓仅仅达到50mg/L，而通过该纯小麦培养基进行固体发酵，胞外三萜酸高达130mg/L。是液体发酵胞外三萜酸浓度的2倍以上。目前已有利用纯小麦培养茯苓作为酸奶添加剂。但通过纯小麦培养，测定其中三萜酸含量的变化以及最高积累量仍未见报道。
技术实现思路
本专利技术主要是提供一种使茯苓高产三萜酸的纯小麦培养基及其测定方法，该方法在培养至25-30天时三萜酸浓度达到130mg/kg，本专利技术的另一个目的为后期饮料的开发提供依据。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种使茯苓高产三萜酸的纯小麦培养基，所述的培养基成分含量为：小麦粒120-125g。所述小麦粒含水量为50%；经过100-120℃下水煮30-60min。使茯苓高产三萜酸的纯小麦培养基的测定方法，所述步骤包括如下：（1）称量小麦粒，将小麦粒使用自来水进行清洗，取清洗后的小麦粒水煮，直至小麦粒软而不裂内部稍显白色，泡10-20min后小麦粒饱满内部不显白色，等量分装入栽培瓶，封口后121℃灭菌120min。（2）使用打孔器对制备好的菌种进行打孔接种，接完中放入25℃培养箱进行培养；（3）每隔5天取样研磨成碎末，准确称取20g研磨后的栽培料置于烘干箱进行烘干，烘干后取10g栽培料至三角瓶，加入50mL的双蒸水，60℃水浴2h，每隔半小时摇晃混匀；（4）离心取上清液测定pH，并用考马斯亮蓝方法测定蛋白浓度；将剩余上清液70℃旋蒸浓缩10倍后加入3倍体积无水乙醇4℃过夜静置；（5）离心分离上清与沉淀，取2mL上清液于烘干箱烘干，烘干后用1mL双蒸水溶解，再添加1ml乙酸乙酯（99.5wt.%）进行萃取两遍；合并上层液烘干后使用香草醛-高氯酸显色测定三萜酸浓度；沉淀加入10mL 1M的NaOH溶液，60℃水浴2h后，取上清使用硫酸-苯酚法测定多糖浓度；（6）准确称取5g烘干后的栽培料，加入50mL甲醇（99.5wt.%）置于37℃摇床中浸提5h，取4mL保存，取1mL于6000r/min，4℃离心10min；取0.5ml上清液于烘干箱烘干后使用香草醛-高氯酸方法测定总三萜含量；（7）精确称取步骤3烘干栽培料1g加入5mL离心管，再加入4mL石油醚（30-60℃）于40摄氏度水浴锅水浴2h，冷却后于9000r/min，4℃离心7min，等滤渣中石油醚挥发干后，连同滤渣滤纸至于5mL离心管，加入4mL水，沸水浴2h，冷却后于4℃，9000r/min，离心7min，定容到10ml之后吸取3mL蒸干其中的石油醚残留，以蒸馏水洗涤3次，合并滤液于容量瓶 ，取100μL使用苯酚-硫酸法测定总糖。本专利技术的优点在于：目前国内外中草药三萜的研究主要集中在灵芝的液体发酵上，茯苓作为一种与灵芝代谢相似的中草药，本身也会产生大量的三萜类物质，但国内外有关茯苓三萜的研究报道还是比较少见。本专利技术所针对的纯小麦培养基在发酵过程中能够产生较高的三萜、胞外三萜酸，分别高达1.6g/Kg与130mg/Kg,可以很好地提高茯苓三萜类物质的发酵提取、纯化与利用。三萜酸具有减肥、降血糖、抗癌、抗肿瘤、抗肝损伤、抗菌消炎和抗病毒等多种生物学活性，其有效的开发利用具有很大的市场前景。具体实施方式实施例1（1）称量小麦粒，将小麦粒使用自来水进行清洗，取清洗后的小麦粒水煮，直至小麦粒软而不裂内部稍显白色，泡10min后小麦粒饱满内部不显白色，等量分装入栽培瓶，封口后121℃灭菌120min；（2）使用打孔器对制备好的菌种进行打孔接种，接完中放入25℃培养箱进行培养；（3）每隔5天取样研磨成碎末，准确称取20g研磨后的栽培料置于烘干箱进行烘干，烘干后取10g栽培料至三角瓶，加入50mL的双蒸水，60℃水浴2h，每隔半小时摇晃混匀；（4）离心取上清液测定pH，并用考马斯亮蓝方法测定蛋白浓度；将剩余上清液70℃旋蒸浓缩10倍后加入3倍体积无水乙醇4℃过夜静置；（5）离心分离上清与沉淀，取2mL上清液于烘干箱烘干，烘干后用1mL双蒸水溶解，再添加1ml乙酸乙酯（99.5%）进行萃取两遍；合并上层液烘干后使用香草醛-高氯酸显色测定三萜酸浓度；沉淀加入10mL 1M的NaOH 溶液，60℃水浴2h后，取上清使用硫酸-苯酚法测定多糖浓度；（6）准确称取5g烘干后的栽培料，加入50mL甲醇（99.5%）置于37℃摇床中浸提5h，取4mL保存，取1mL于6000r/min，4℃离心10min；取0.5ml上清液于烘干箱烘干后使用香草醛-高氯酸方法测定总三萜含量；（7）精确称取步骤3烘干栽培料1g加入5mL离心管，再加入4mL石油醚（30-60℃）于40摄氏度水浴锅水浴2h，冷却后于9000r/min，4℃离心7min，等滤渣中石油醚挥发干后，连同滤渣滤纸至于5mL离心管，加入4mL水，沸水浴2h，冷却后于4℃，9000r/min，离心7min，定容到一定体积10ml之后吸取3mL蒸干其中的石油醚残留，以蒸馏水洗涤3次，合并滤液于容量瓶，取100μL使用苯酚-硫酸法测定总糖。根据培养不同天数栽培料中的三萜酸测定，得到在培养到第25天时，每千克干栽培料中的总三萜达到1.6g，三萜酸量高达130mg。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例，凡依本专利技术申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本专利技术的涵盖范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种使茯苓高产三萜酸的纯小麦培养基，其特征在于：所述的培养基成分含量为：小麦粒120‑125g。

【技术特征摘要】
1.一种使茯苓高产三萜酸的纯小麦培养基，其特征在于：所述的培养基成分含量为：小麦粒120-125g。
2.根据权利要求1所述的一种使茯苓高产三萜酸的纯小麦培养基，其特征在于：所述小麦粒含水量为50%；经过100-120℃下水煮30-60min。
3.一种如权利要求1所述的一种使茯苓高产三萜酸的纯小麦培养基的...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡开辉，林辉，张燎原，孙淑静，万春和，张职视，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35