一种在舌鳞癌癌旁组织中高表达的基因及其应用制造技术

本发明专利技术一种在舌鳞癌癌旁组织中高表达的基因及其应用，具体的涉及LCE3E基因和GSDMA基因及其表达产物在诊断舌鳞癌和制备舌鳞癌生物药中应用。发明专利技术基于高通量测序结合分子生物学实验，对筛选到舌鳞癌分子诊治标志物LCE3E基因和GSDMA基因进行验证，为LCE3E基因和GSDMA基因在舌鳞癌的临床运用提供实验基础，为舌鳞癌的早期诊断和治疗提供新的靶基因。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因诊断及治疗领域，具体涉及一种在舌鳞癌癌旁组织中高表达的基因及其应用，更具体的涉及基因在诊断舌鳞癌和制备抗舌鳞癌制剂中的应用。
技术介绍
口腔粘膜的鳞状细胞癌是最常见的口腔恶性肿瘤，是全球十大高发癌症之一。近年来，我国口腔癌的发病率均有逐年增高和年轻化的趋势。舌癌是口腔常见的恶性肿瘤之一，我国舌癌居口腔癌之首。舌癌是指原发于舌前游动部的恶性肿瘤，约半数以上发生于舌中1/3的边缘部。舌癌易通过淋巴和血液循环通路全身转移，分化程度低的中、晚期病人术后易复发。目前对舌癌治疗主要包括传统手术治疗、化疗和放疗。但手术治疗创伤大，术后患者生活质量下降，而传统的化疗和放疗缺乏特异性，取得疗效的同时也往往给患者带来较大的毒副作用。近年来，基因和生物治疗作为继手术、、放疗、化疗等传统疗法之外的新的治疗手段，在恶性肿瘤的综合治疗中发挥着日渐重要的作用，并越来越受到人们的重视。随着对肿瘤分子生物学行为的不断深入研究，发现了多个可用于治疗的特异性靶位点。然而有关口腔舌癌的分子靶向治疗还处于实验研究阶段，正确选择特异性的分子靶点至关重要。本专利技术首先拟通过RNA-seq测序检测舌鳞癌、癌旁及正常口腔黏膜差异表达基因，筛选出差异表达基因——LCE3E基因和GSDMA基因；进一步，通过大样本的Real-timePCR实验对差异表达基因进行分子验证；最后，利用慢病毒干扰技术，分别沉默其在细胞株CAL27中的表达。为LCE3E基因和GSDMA基因在舌鳞癌的临床运用提供实验基础，为舌鳞癌的早期诊断和治疗提供新的靶基因和理论依据。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种舌鳞癌诊断制剂，该诊断制剂检测LCE3E基因和/或GSDMA基因的转录或蛋白的表达情况。为实现上述目的，本专利技术首先通过高通量测序结合生物信息学方法筛选到候选LCE3E基因和GSDMA基因，继而通过分子生物学方法验证了他们与舌鳞癌的关系：LCE3E基因和GSDMA基因的表达情况与舌鳞癌具有很好的相关性，可用于制备抗舌鳞癌制剂和/或舌鳞癌诊断制剂，具有重要的临床应用价值。本专利技术的目的在于提供检测LCE3E基因和/或GSDMA基因表达的制剂在制备舌鳞癌诊断制剂中的应用。进一步，LCE3E基因和/或GSDMA基因在癌组织中相对表达量高。进一步，所述制剂包括用荧光定量PCR方法、基因芯片方法检测LCE3E基因和/或GSDMA基因的转录。进一步，检测外周血或组织中LCE3E基因和/或GSDMA基因的转录或蛋白的表达。荧光定量PCR法是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR的出现，极大地简化了定量检测的过程，而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现，使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率，反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。基因芯片又称为DNA微阵列(DNAmicroarray)，可分为三种主要类型：1)固定在聚合物基片(尼龙膜，硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段，通常用同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列，通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。3)在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列，与荧光标记的靶基因杂交进行检测。基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术，应用于疾病的诊断，其优点有以下几个方面：一是高度的灵敏性和准确性；二是快速简便；三是可同时检测多种疾病。所述的用于荧光定量PCR方法检测舌鳞癌中LCE3E基因和/或GSDMA基因的产品含有特异性扩增LCE3E基因和/或GSDMA基因的引物；所述的基因芯片包括与LCE3E基因和/或GSDMA基因的核酸序列杂交的探针。进一步，所述舌鳞癌的诊断制剂包括用免疫方法检测LCE3E蛋白和/或GSDMA蛋白的表达。优选所述免疫检测方法检测舌鳞癌中LCE3E蛋白和/或GSDMA蛋白表达的为westernblot和/或ELISA和/胶体金检测方法。本专利技术的目的在于提供上述舌鳞癌诊断制剂在制备检测舌鳞癌试剂中的应用。本专利技术的目的在于提供检测LCE3E蛋白和/或GSDMA蛋白表达的制剂在制备舌鳞癌诊断制剂中的应用。酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。ELISA检测试剂盒根据检测目的和操作步骤可分为间接法、双抗夹心法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。ELISA检测试剂盒中生色底物可选择辣根过氧化物酶(HRP)或者碱性磷酸酶(AP)。常用的免疫胶体金检测技术：(1)免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。(2)免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。(3)斑点免疫金渗滤法应用微孔滤膜作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。(4)胶体金免疫层析法将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，当移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。进一步，所述检测LCE3E蛋白和/或GSDMA蛋白的ELISA法为使用ELISA检测试剂盒。所述试剂盒中的抗体可采用市售的LCE3E蛋白和/或GSDMA蛋白单克隆抗体。进一步，所述的试剂盒包括：包被单克隆抗体的固相载体，酶标二抗，酶的底物，蛋白标准品，阴性对照品，稀释液，洗涤液，酶反应终止液等。进一步，所述检测LCE3E蛋白和/或GSDMA蛋白的胶体金法为使用检测试剂盒，所述的抗体可采用市售的单克隆抗体，进一步，所述的胶体金检测试剂盒采用胶体金免疫层析技术或胶体金渗滤法。进一步，所述的胶体金检测试剂盒硝酸纤维素膜上的检测区(T)喷点有单克隆抗体、质控区(C)喷点有免疫球蛋白IgG。本专利技术的目的在于提供一种检测舌鳞癌的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒检测LCE3E基因和/或GSDMA基因，采用特异的引物，引物序列为SEQIDNO.1和SEQIDNO.2，或者为SEQIDNO.3和SEQIDNO.4。进一步，该PCR试剂盒适合于目前存在市场上的所有类型荧光定量基因扩增仪，灵敏度高，定量快速准确、稳定性好，具有良好的应用前景。进一步，上述荧光定量PCR试剂盒组分包括：特异性引物、内参引物、荧光定量PCR反应液。其中所述的特异性引物包括上游引物和下游引物。本专利技术目的是提供了一种舌鳞癌检本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种舌鳞癌诊断制剂，其特征在于，诊断制剂检测LCE3E基因和/或GSDMA基因的转录或蛋白的表达情况。

【技术特征摘要】
1.一种舌鳞癌诊断制剂，其特征在于，诊断制剂检测LCE3E基因和/或GSDMA基因的转录或蛋白的表达情况。2.根据权利要求1所述的舌鳞癌诊断制剂，其特征在于，LCE3E基因和/或GSDMA基因在癌组织中相对表达量高。3.根据权利要求1所述的舌鳞癌诊断制剂，其特征在于，检测外周血或组织中LCE3E基因和/或GSDMA基因的转录或蛋白的表达。4.根据权利要求1所述的舌鳞癌诊断制剂，其特征在于，所述诊断制剂包括用荧光定量PCR方法、基因芯片方法检测LCE3E基因和/或GSDMA基因的转录。5.根据权利要求1所述的舌鳞癌诊断制剂，其特征在于，所述诊断制剂包括用免疫方法检测LCE3E蛋白和/或GSDMA蛋白的表达。优选所述免疫检测方法检测LCE3E蛋白和/或GSDMA蛋白表达的为westernblot和/或ELISA和/胶体金检测方法。6.权利要求1-5任意一项所述的舌鳞癌诊断制剂在制备检测舌鳞癌试剂中的应用。7...

【专利技术属性】
技术研发人员：李海岩，肖枫，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11