快速鉴定不同白化茶树品种的分子标记组合、方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种快速鉴定不同白化茶树品种的分子标记组合，所述分子标记组合采用CSR238、CSR1297、LG04‑06三对引物组合；本发明专利技术还公开了利用上述分子标记组合快速鉴定不同白化茶树品种的方法及含有上述分子标记的试剂盒；本发明专利技术可以对市场上的白化茶树品种进行区分鉴定，且鉴定方法简单、快速，可以解决目前市场长期存在的白化茶树品种命名混乱的问题；本发明专利技术还公开了一种白化茶树品种的指纹图谱，茶叶销售企业也可利用本发明专利技术生成的二维码指纹图谱对公司不同白化茶树品种加工而成的产品进行标注，从而使消费者更加方便的了解产品信息。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及茶树生物
，特别是涉及快速鉴定不同白化茶树品种的分子标记组合、方法及应用。
技术介绍
白茶品种是一类在特定条件下产生的具有不同程度的叶绿素缺失的叶色突变体，属于茶树中的珍稀资源，目前在全国各地均有发现，如浙江的安吉白茶、景宁白茶、黄金芽；江西的黄金菊等。已有的研究表明，这类茶树资源由于代谢机制的特异性，新稍芽叶的叶绿素合成减少，碳代谢受抑制，使其芽叶呈现出不同程度的白化现象，同时由于氮代谢增强，显著提高了游离氨基酸的生成量，使得有些品种资源的游离氨基酸含量能达到6％以上，茶氨酸含量达3％以上。以这类白化突变体为原料制作的茶样，因具有更高的氨基酸含量和更优异的外形，使其经济价值更高，已成为各地茶农增收的重要途径，很多新育成的白化茶树品种苗木市场价格高达1-2元/株。但随着新育成白化茶树品种的增多，以及新品种较高的苗木和成品茶价格，很多不法商贩开始利用茶叶和茶苗品种不易鉴定的特点，以老充新、以次充好。经调研发现，很多茶农经常不确定其购买的茶苗为哪一个品种，出现买到假苗或不合适苗的现象；也有很多茶叶加工企业不确定其加工出的成品茶是源自那一品种，从而无法为消费者提供更加准确的产品信息。而目前尚未有一种有效的手段可以将不同白化茶树茶苗或成品茶的具体品种鉴定区分的方法。因此，如何能创设一种快速、有效的鉴定不同白化茶树品种的分子标记，成为急需改进的目标。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种可以快速鉴定不同白化茶树品种的分子标记组合。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种快速鉴定不同白化茶树品种的分子标记组合，所述分子标记组合采用CSR238、CSR1297、LG04-06三对引物组合；所述CSR238的引物序列为：正向引物：TGACCCTACAACAAGACC，反向引物：TTGCCAACAAGCACCAC；所述CSR1297的引物序列为：正向引物：CAAATGCATAATGTGGTCGC，反向引物：ATTTCCCTCCCTTTCATGCT；所述LG04-06的引物序列为：正向引物：ACAGACCTTCACCCTCTCCATTTC,反向引物：GTTTACCTCTGCCTTCGTTCTTCAGC。进一步地，所述白化茶树品种包括：景宁白茶1号、MP1001、千年雪、郁金香、黄叶宝、花叶、安吉黄茶、黄金菊、安吉白茶、天台白茶、四明雪芽、景宁白茶2号、越乡白茶、中黄1号、黄金芽、中黄2号。本专利技术还提供了一种利用上述分子标记组合快速鉴定不同白化茶树品种的方法。进一步地，具体包括如下步骤：(1)对待测茶样或茶树苗木提取DNA；(2)以步骤(1)中提取的DNA为模板，以CSR238、CSR1297、LG04-06为引物分别进行PCR扩增；(3)对步骤(2)的PCR产物进行电泳分离，获得待测样品的分离带型；(4)对步骤(3)中的样品进行带型统计，对比判定，即可鉴定待测茶树品种。进一步地，所述步骤(1)中采用待测茶树品种的新鲜幼叶或是成品茶提取DNA。进一步地，所述步骤(4)具体为：对步骤(3)中的样品进行带型统计，将三对引物的扩增结果转换成1和0字符串后与下表的指纹图谱代码进行比对即可鉴定茶树品种；下表的指纹图谱代码由利用所述三对引物扩增16个白化茶树品种得到的等位基因转换成1和0字符串获得；本专利技术还提供了一种快速鉴定不同白化茶树品种的试剂盒，所述试剂盒包括上述的分子标记组合。本专利技术还提供了上述快速鉴定不同白化茶树品种的分子标记组合在制备试剂盒中的应用。本专利技术还提供了一种白化茶树品种的指纹图谱，由上述快速鉴定不同白化茶树品种的分子标记组合中的三对引物对白化茶树品种扩增得到的等位基因转换成1和0字符串，并利用在线二维码生成器生成。通过采用上述技术方案，本专利技术至少具有以下优点：1、本专利技术采用三对分子标记组合或包含其的试剂盒，可以对市场上的白化茶树品种进行区分鉴定，且鉴定方法简单、快速，可以解决目前市场上白化茶树品种混杂的问题，有利于育种工作的开展及白化茶树品种背景信息的确认，2、茶叶销售企业也可利用本专利技术生成的二维码对公司不同白化茶树品种加工而成的产品进行标注，从而使消费者更加方便的了解产品信息。附图说明上述仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，以下结合附图与具体实施方式对本专利技术作进一步的详细说明。图1是16个白化茶树品种Neighbor-Joining聚类图；图2是利用三对分子标记组合(CSR238、CSR1297、LG04-06)对16个白化茶树品种进行扩增的电泳图；图3是16个白化品种的指纹图谱二维码。具体实施方式实施例1分子标记组合的筛选实验1材料与方法1.1材料供试的16种白化茶树样品(见表1)所示，样品均采自国家茶树种质资源圃杭州分圃。采摘各供试样品无病虫害感染的一芽二叶新梢，液氮迅速冷冻后，于-80℃环境中保存备用。表1供试样品的编号、名称1.2方法1.2.1基因组DNA提取方法将所有样品在液氮中磨成粉末，采用CTAB法提取基因组DNA，1％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质量，利用ND-1000微量紫外分光光度计测定DNA浓度，后将DNA浓度稀释至工作浓度20ng/ul，用于PCR扩增，剩余原液-20℃保存备用。1.2.2PCR扩增及产物检测从本实验室设计、筛选的SSR引物中选取62对多态性高、扩增条带清晰、重复性好的引物，用于供试材料的SSR-PCR分析。PCR反应在ABI公司的PCR扩增仪上进行，反应体系为DNA2ul，TapDNApolymerase(2U/ul)0.2ul，dNTP(10nmol/L)0.2ul，10×PCRbuffer(Mg2+)1ul以及Primer(10umol/L)各0.2ul，PCR扩增程序为94℃预变性4min，然后94℃变性30s，不同温度下退火30s，72℃延伸30s，35个循环，最后72℃延伸7min，4℃保存。扩增产物用10％的聚丙烯酰胺电泳检测，150V电压下电泳80min，电泳结束后银染法显色。1.2.3数据处理及分析数据处理采用人工读带的方法，将电泳图上目的片段范围内清晰的条带，按照分子量大小，从大到小按照A、B、C、D、E等依次记录，从而建立原始数据库。利用软件POPGENE分析62对引物在16个白化品种中的扩增等位基因数(Observednumberofalleles，Na)、有效等位基因(Effectivenumberofalleles，Ne)、观测杂合度(Observedheterozygosity，HO)、期望杂合度(Expectedheterozygosity，HE)、Shannon信息指数(Shannon’sinformationindex，I)；利用软件PowerMarker分析基因型数(Genotype)和多态性信息量(Polymorphisminformationcontent，PIC)，之后计算16个品种间的Nei’s遗传距离，构建Neighbor-Joining(NJ)系统进化树，进行聚类分析。最后根据62对SSR引物扩增的基因型数及PIC值，从中筛选出扩增条带清晰、PIC值高的作为核心引物，将扩增出的基因型转化为[0，1]数据矩阵，利用在线二维码生成器(http：mh本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速鉴定不同白化茶树品种的分子标记组合，其特征在于，所述分子标记组合采用CSR238、CSR1297、LG04‑06三对引物组合；所述CSR238的引物序列为：正向引物：TGACCCTACAACAAGACC反向引物：TTGCCAACAAGCACCAC所述CSR1297的引物序列为：正向引物：CAAATGCATAATGTGGTCGC反向引物：ATTTCCCTCCCTTTCATGCT所述LG04‑06的引物序列为：正向引物：ACAGACCTTCACCCTCTCCATTTC反向引物：GTTTACCTCTGCCTTCGTTCTTCAGC。

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定不同白化茶树品种的分子标记组合，其特征在于，所述分子标记组合采用CSR238、CSR1297、LG04-06三对引物组合；所述CSR238的引物序列为：正向引物：TGACCCTACAACAAGACC反向引物：TTGCCAACAAGCACCAC所述CSR1297的引物序列为：正向引物：CAAATGCATAATGTGGTCGC反向引物：ATTTCCCTCCCTTTCATGCT所述LG04-06的引物序列为：正向引物：ACAGACCTTCACCCTCTCCATTTC反向引物：GTTTACCTCTGCCTTCGTTCTTCAGC。2.根据权利要求1所述的快速鉴定不同白化茶树品种的分子标记组合，其特征在于，所述白化茶树品种包括：景宁白茶1号、MP1001、千年雪、郁金香、黄叶宝、花叶、安吉黄茶、黄金菊、安吉白茶、天台白茶、四明雪芽、景宁白茶2号、越乡白茶、中黄1号、黄金芽、中黄2号。3.一种利用分子标记组合快速鉴定不同白化茶树品种的方法，其特征在于，采用权利要求1或2所述的分子标记组合来鉴定不同白化茶树品种。4.根据权利要求3所述的快速鉴定不同白化茶树品种的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)对待测茶树品种提取DNA；(2)以步骤(...

【专利技术属性】
技术研发人员：马春雷，陈亮，黄丹娟，姚明哲，王松琳，马建强，金基强，
申请(专利权)人：中国农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33