包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体、制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体、制备方法及应用，该复合抗体包括干扰素α、肿瘤抗体和氧化石墨烯，干扰素α、肿瘤抗体和氧化石墨烯通过非共价键连接，肿瘤抗体为利妥昔单抗或曲妥珠单抗。上述包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体，复合抗体可以有效地直接杀伤大部分的肿瘤细胞，破坏保护肿瘤细胞的微环境，同时干扰素α刺激免疫系统，打破肿瘤耐受，促进肿瘤特异性的细胞激活或者细胞因子的释放，达到缩小清除肿瘤、防治复发和最终治愈肿瘤的目标。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗体领域，特别地，涉及一种包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体。此外，本专利技术还涉及包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体的制备方法及应用。
技术介绍
化疗是一种治疗肿瘤的常用的方法，虽然文献报道化疗能降低了死亡率，但是，也有文献报道化疗既不能增提高疗效，也不能延长寿命，因为化疗损害免疫系统使肿瘤免疫疗效丧失。过去的几十年里，免疫治疗与靶向治疗是两个不同的有效策略，都被证明各有其利弊。基因组引导突变识别驱动的癌症，促进了靶向药物的发展，它们在多数有肿瘤靶病变的患者中有显著的反应，但其作用相对短暂。在化疗的情况下，联合基因靶向药物比单用制剂将更有效的预防癌症。通过联合用药有效地提高整体存活率是可行的。然而，由于固有的基因组不稳定性，获得性耐药的无数的机制和广泛靶标的复杂性，可能很难通过单个基因靶向策略治愈肿瘤。肿瘤免疫治疗(Tumorimmunotherapy)越来越受人关注。晚期肿瘤通过多种免疫机制逃脱宿主的免疫侦查和免疫清除，诱导肿瘤耐受，所以，有效的肿瘤免疫治疗应该促进肿瘤-免疫循环，解除肿瘤免疫抑制。肿瘤免疫治疗的理论基础是免疫系统具有识别肿瘤相关抗原、调控机体攻击肿瘤细胞，即高度特异性的细胞溶解能力。免疫治疗本质上是多价的，因为针对单个检查点可能释放对许多不同的抗原肽特异性的T细胞，这些肿瘤内的抗原肽目前包括肿瘤分化，进展，甚至由于基因组不稳定性导致新抗原的突变驱动癌症的发生。这个生物过程十分复杂，目前仍处于研究之中。众所周知，免疫疗法有三大特点：没有典型的耐药性；诱导产生持久的临床反应；诱导产生自体免疫样毒性。肿瘤免疫治疗的耐受性很好，与化疗不同(1+1<2)，将多种免疫治疗联合使用可能具有更好的安全性(1+1>2)。由于增加抗肿瘤T细胞的反应，免疫治疗效果更持久，但是只在一小部分患者中有效。因此亟需一种复合抗体，以使不同靶向目标的多个不同机制的免疫治疗，有可能在更多的患者中产生更好的效果。
技术实现思路
本专利技术提供了一种包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体、制备方法及应用，以解决现有的免疫治疗只对小部分患者有效的技术问题。本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术一方面提供了一种包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体，复合抗体包括干扰素α、肿瘤抗体和氧化石墨烯，干扰素α、肿瘤抗体和氧化石墨烯通过非共价键连接，肿瘤抗体为利妥昔单抗或曲妥珠单抗。进一步地，干扰素α、肿瘤抗体和氧化石墨烯的比例为每200～2000单位干扰素α对应0.1～0.5mg氧化石墨烯和1～5mg肿瘤抗体。进一步地，干扰素α、肿瘤抗体和氧化石墨烯的比例为每2000单位干扰素α对应0.1mg氧化石墨烯和1mg肿瘤抗体。进一步地，氧化石墨烯的粒径小于22μm。本专利技术另一方面提供了一种包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体的制备方法，包括以下步骤：将干扰素α和氧化石墨烯在32～42℃下混匀反应2～4小时；加入肿瘤抗体混匀，在32～42℃反应4～8小时，得到包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体。进一步地，干扰素α和氧化石墨的反应温度为37℃，反应时间为2小时；加入肿瘤抗体的反应温度为37℃，反应时间为2小时。进一步地，氧化石墨烯的制备包括以下步骤：将氧化石墨烯原材料在0～4℃的条件下，通过超声波破碎，经过孔径0.22μm的滤网过滤，得到氧化石墨烯。进一步地，超声波破碎的操作包括以下步骤：将氧化石墨烯原材料配置为1～2mg/ml，在超声波破碎的强度为3.5的条件下，超声2小时，超声模式为工作10s，休息5s。本专利技术还提供了一种包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体在治疗肿瘤药物中的应用。本专利技术具有以下有益效果：上述包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体，复合抗体可以有效地直接杀伤大部分的肿瘤细胞，破坏保护肿瘤细胞的微环境，同时干扰素α刺激免疫系统，打破肿瘤耐受，促进肿瘤特异性的细胞激活或者细胞因子的释放，达到缩小清除肿瘤、防治复发和最终治愈肿瘤的目标。除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本专利技术还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本专利技术作进一步详细的说明。附图说明构成本申请的一部分的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1是本专利技术优选实施例的各组小鼠的生存时间示意图；图2是本专利技术优选实施例的各组小鼠体内的PBMCs细胞存活数量示意图；图3是本专利技术优选实施例的各组以CCK8法测定肿瘤细胞活性鉴别柱状图；图4是本专利技术优选实施例的各组Raji细胞存活数量示意图；图5是本专利技术优选实施例的各组的淋巴瘤细胞存活数量示意图；图6是各组的Treg细胞分化增殖情况示意图；图7是本专利技术优选实施例的各组的Treg淋巴瘤细胞存活数量示意图；图8是本专利技术优选实施例的各组的Teff/Treg比例示意图。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的实施例进行详细说明，但是本专利技术可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。参照图1，本专利技术的优选实施例提供了一种包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体，复合抗体包括干扰素α、肿瘤抗体和氧化石墨烯，干扰素α、肿瘤抗体和氧化石墨烯通过非共价键连接，肿瘤抗体为利妥昔单抗或曲妥珠单抗。分子靶向治疗和化疗耐药是目前癌症研究的主要问题。细胞毒性化疗药物和可选择性的特异性靶分子的靶向药物耐药的经典机制有药物靶点的改变、促生存的途径激活和诱导细胞死亡失效。通过合理的治疗药物组合和使用预测生物标志物进行临床评估。影响耐药的可能因素有：(1)药物的运输与代谢，比如耐多药最常见药物泵，以及药物的活化与失活；(2)药物靶点的改变，例如，吉非替尼和厄洛替尼治疗非小细胞肺癌对表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂的反应率高，是因为活化的EGFR酪氨酸激酶结构域的突变(在19外显子缺失和21号外显子L858R突变)；(3)DNA损伤修复，如一些DNA损伤的药物；(4)下游耐药机制，凋亡负调控，自我吞噬；(5)耐药促进适应性反应：促生存信号通路激活，肿瘤旁路和路径冗余，上皮-间充质转化；(6)肿瘤微环境，如整合素家族、细胞因子和生长因子。在实体肿瘤，微环境是由细胞外基质，癌相关成纤维细胞，免疫和炎性细胞和血管组成的。在血液恶性肿瘤的微环境是由骨髓基质细胞、骨髓内皮细胞、破骨细胞、成骨细胞、巨噬细胞和其他细胞间的细胞组成的。微环境对抗细胞毒性药物为肿瘤细胞提供避难所，从而使他们能够逃避细胞凋亡和获得性耐药导致疾病复发。在大多数实体肿瘤的致癌过程均是一个多步骤的过程，分子机制解释不了单一治疗的效果。在这种情况下，单一靶向治疗似乎理论上是一个不理想的策略，并不能期望得到最佳的结果。然而单一靶向治疗的特异性高副作用较少，从该角度来看单一靶向治疗又是理想的。因此，建立有多针对性的分子靶向药物的联合可能是一个在未来癌症治疗的目标。这可能会解决肿瘤异质性的问题，同时保持治疗的选择性。抗肿瘤免疫的激活对于有效地消除肿瘤细胞可能是至关重要的。在这方面，小分子药物不直接作用于免疫系统，应结合免疫活性药物治疗以取得最好的治疗效果。因此，努力以不同类别的药物组合的分子靶点治疗癌症。单本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体，其特征在于，所述复合抗体包括干扰素α、肿瘤抗体和氧化石墨烯，所述干扰素α、所述肿瘤抗体和所述氧化石墨烯通过非共价键连接，所述肿瘤抗体为利妥昔单抗或曲妥珠单抗。

【技术特征摘要】
1.一种包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体，其特征在于，所述复合抗体包括干扰素α、肿瘤抗体和氧化石墨烯，所述干扰素α、所述肿瘤抗体和所述氧化石墨烯通过非共价键连接，所述肿瘤抗体为利妥昔单抗或曲妥珠单抗。2.根据权利要求1所述的包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体，其特征在于，所述干扰素α、所述肿瘤抗体和所述氧化石墨烯的比例为每200～2000单位干扰素α对应0.1～0.5mg氧化石墨烯和1～5mg肿瘤抗体。3.根据权利要求2所述的包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体，其特征在于，所述干扰素α、所述肿瘤抗体和所述氧化石墨烯的比例为每2000单位干扰素α对应0.1mg氧化石墨烯和1mg肿瘤抗体。4.根据权利要求1所述的包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体，其特征在于，所述氧化石墨烯的粒径小于22μm。5.一种如权利要求1～4中任一项所述的包含干扰素α/肿瘤抗体/氧化石墨烯的复合抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将干扰素α和氧化石墨烯在32～42℃下...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗承科，陈新建，王锡阳，陶立坚，黄菊芳，李岚，邓征浩，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43