一种液基细胞保存液及其制备方法技术

本发明专利技术提出一种液基细胞保存液，该保存液由固定剂、抗凝剂、缓冲剂、注射液、营养剂、抑制剂、消除剂以及添加剂组成，其成分组成按重量份计为：固定剂20‑60重量份、抗凝剂0.1‑0.5重量份、缓冲剂0.5‑5重量份、注射液40‑60重量份、营养剂0.1‑0.5重量份、抑制剂0.01‑0.1重量份、消除剂0.2‑0.5重量份以及添加剂0.01‑0.05重量份。本发明专利技术液基细胞保存液稳定性好、成本低廉、无毒副作用，便于细胞的保存和运输，制备方法简单，适应细胞治疗的临床大规模使用，具有良好的应用前景和经济效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药剂
，具体涉及一种液基细胞保存液及其制备方法。
技术介绍
近年来，细胞生物治疗技术逐渐代替传统药物治疗，在各大疾病治疗领域上发挥越来越重要的作用。细胞生物治疗技术是指利用具有某些特定功能的细胞，采用生物工程方法通过体外扩增、特殊培养等处理后，使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞、促进组织器官再生和机体康复等治疗功效，从而达到治疗疾病的目的。为了进一步的适应临床应用的需要，开发一种能在长时间的保存和运输过程中能维持细胞的存活率及活力的新保存液成为了当务之急。在申请号为CN200910034575.4的专利申请中，介绍了一种液基细胞保存液，其主要成分为醇类、双蒸水、磷酸盐、灭菌剂和粘液分解剂组成，该液基细胞保存液的独特粘液分解剂能把样本中被粘液包裹的细胞成功分离出来，避免了阳性细胞堆积与丢失，但是这些会导致将粘液溶解试剂残留在细胞样本中，抑制后续的检测。在申请号为CN201110325314.5的专利申请中，介绍了一种间充质干细胞保存液，其含有人AB型脐带血血浆和低分子肝素钙，该间充质干细胞保存液其临床应用安全可靠且制备方法简单，然而同体输注的成本极高，若是异体输注则存在安全隐患。综上所述，制备具有长时间维持细胞活性、对细胞无损伤、成本低廉且安全性好的液基细胞保存液对于细胞生物治疗技术的实际应用具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有长时间维持细胞活性、对细胞无损伤、成本低廉且安全性好的液基细胞保存液。本专利技术采用以下技术方案：一种液基细胞保存液，该保存液由固定剂、抗凝剂、缓冲剂、注射液、营养剂、抑制剂、消除剂以及添加剂组成，其成分组成按重量份计为：固定剂20-60重量份、抗凝剂0.1-0.5重量份、缓冲剂0.5-5重量份、注射液40-60重量份、营养剂0.1-0.5重量份、抑制剂0.01-0.1重量份、消除剂0.2-0.5重量份以及添加剂0.01-0.05重量份。作为本专利技术的进一步改进，所述固定剂为乙醇、甲醇和丙醇中的一种或多种。作为本专利技术的进一步改进，所述抗凝剂为EDTA。作为本专利技术的进一步改进，所述缓冲剂为磷酸盐和/或碳酸盐缓冲液。作为本专利技术的进一步改进，所述注射液为质量百分比为0.9％的氯化钠注射液。作为本专利技术的进一步改进，所述营养剂为L-谷氨酰胺。作为本专利技术的进一步改进，所述抑制剂为胰岛素。作为本专利技术的进一步改进，所述消除剂为N-乙酰半胱氨酸。作为本专利技术的进一步改进，所述添加剂为亚硒酸钠。同时提出一种液基细胞保存液的制备方法，其步骤如下：在注射液中分别加入缓冲剂、抗凝剂、固定剂、营养剂、抑制剂、消除剂及添加剂，混匀即可。本专利技术液基细胞保存液稳定性好、成本低廉、无毒副作用，便于细胞的保存和运输，制备方法简单，适应细胞治疗的临床大规模使用，具有良好的应用前景和经济效益。具体实施方式为了使本
人员更好地理解本专利技术的技术方案，并使本专利技术的上述特征、目的以及优点更加清晰易懂，下面结合实施例对本专利技术做进一步的说明。实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。醇类(包括乙醇、甲醇和丙醇)、EDTA、磷酸盐和/或碳酸盐缓冲液购自上海如吉生物科技发展有限公司；质量百分比为0.9％氯化钠注射液购自江苏亚邦生缘药业有限公司；L-谷氨酰胺购自浙江绿州生物技术有限公司；胰岛素购自永华化学科技(江苏)有限公司；N-乙酰半胱氨酸购自武汉伊美特生物技术有限公司；亚硒酸钠购自上海勤联化工有限公司。实施例1一种液基细胞保存液，该保存液由固定剂、抗凝剂、缓冲剂、注射液、营养剂、抑制剂、消除剂以及添加剂组成，其成分组成按重量份计为：60重量份固定剂乙醇、0.5重量份抗凝剂EDTA、5重量份缓冲剂碳酸盐、20重量份注射液质量百分比为0.9％的氯化钠溶液、0.5重量份营养剂L-谷氨酰胺、0.1重量份抑制剂胰岛素、0.5重量份消除剂N-乙酰半胱氨酸以及0.05重量份添加剂亚硒酸钠。乙醇可用等质量的甲醇或丙醇或者甲醇、乙醇、丙醇三者形成的混合物代替。碳酸盐可用等质量的磷酸盐或者碳酸盐和磷酸盐的混合物代替。制备的方法为在注射液中分别加入上述的缓冲剂、抗凝剂、固定剂、营养剂、抑制剂、消除剂及添加剂，混匀即可。实施例2一种液基细胞保存液，该保存液由固定剂、抗凝剂、缓冲剂、注射液、营养剂、抑制剂、消除剂以及添加剂组成，其成分组成按重量份计为：20重量份固定剂甲醇、0.1重量份抗凝剂EDTA、5重量份缓冲剂碳酸盐、60重量份注射液质量百分比为0.9％的氯化钠溶液、0.1重量份营养剂L-谷氨酰胺、0.01重量份抑制剂胰岛素、0.2重量份消除剂N-乙酰半胱氨酸以及0.01重量份添加剂亚硒酸钠。甲醇可用等质量的乙醇或丙醇或者甲醇、乙醇、丙醇三者形成的混合物代替。碳酸盐可用等质量的磷酸盐或者碳酸盐和磷酸盐的混合物代替。制备的方法为在注射液中分别加入上述的缓冲剂、抗凝剂、固定剂、营养剂、抑制剂、消除剂及添加剂，混匀即可。实施例3一种液基细胞保存液，该保存液由固定剂、抗凝剂、缓冲剂、注射液、营养剂、抑制剂、消除剂以及添加剂组成，其成分组成按重量份计为：40重量份固定剂丙醇、0.3重量份抗凝剂EDTA、2重量份缓冲剂碳酸盐、40重量份注射液质量百分比为0.9％的氯化钠溶液、0.3重量份营养剂L-谷氨酰胺、0.05重量份抑制剂胰岛素、0.3重量份消除剂N-乙酰半胱氨酸以及0.03重量份添加剂亚硒酸钠。丙醇可用等质量的乙醇或丙醇或者甲醇、乙醇、丙醇三者形成的混合物代替。碳酸盐可用等质量的磷酸盐或者碳酸盐和磷酸盐的混合物代替。制备的方法为在注射液中分别加入上述的缓冲剂、抗凝剂、固定剂、营养剂、抑制剂、消除剂及添加剂，混匀即可。对比例1新型液基细胞保存液的制备方法同实施例2，只是没有添加缓冲剂。对比例2新型液基细胞保存液的制备方法同实施例1，只是没有添加营养剂L-谷氨酰胺。对比例3新型液基细胞保存液的制备方法同实施例3，只是没有添加抑制剂胰岛素。对比例4新型液基细胞保存液的制备方法同实施例2，只是没有添加消除剂N-乙酰半胱氨酸。对比例5新型液基细胞保存液的制备方法同实施例1，只是没有添加添加剂亚硒酸钠。任意的采用肝细胞作为样品采用上述实施例和对比例中由MTT法测得细胞存活率，测试结果见表1。表1实施例1-3和对比例1-5所制细胞保存液的性能本专利技术实施例1-3相比于对比例1-5具备上述优良性能的原因在于：固定剂用于固定细胞结构，维持细胞DNA和蛋白质完整性；缓冲剂为磷酸盐和/或碳酸盐缓冲液，其可以抑制氢离子的堆积，解除对糖酵解的抑制，从而减轻细胞内酸化；营养剂为L-谷氨酰胺，其为细胞提供能量，补充细胞能量丢失，并有效减轻细胞损害，降低机体对无氧酵解的依赖，减轻细胞内酸化；抑制剂为胰岛素，能够抑制细胞的调亡；消除剂为N-乙酰半胱氨酸，其可以直接提供电子还原自由基或增强抗氧化酶活性，从而清除自由基，并具有延迟、抑制和阻断氧化损伤的作用；添加剂为亚硒酸钠，可与N-乙酰半胱氨酸协同消除氧自由基和氧化物酶对细胞的伤害，稳定细胞膜结构。本专利技术同现有技术相比，具有以下优点和有益效果：(1)本专利技术液基细胞保存液安全，能长时间维持细胞的活性，且细胞形态正常、不影响其增殖扩增能力、不影响间细胞表型特征；(2)本专利技术液基细胞保存本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种液基细胞保存液，其特征在于，该保存液由固定剂、抗凝剂、缓冲剂、注射液、营养剂、抑制剂、消除剂以及添加剂组成，其成分组成按重量份计为：固定剂20‑60重量份、抗凝剂0.1‑0.5重量份、缓冲剂0.5‑5重量份、注射液40‑60重量份、营养剂0.1‑0.5重量份、抑制剂0.01‑0.1重量份、消除剂0.2‑0.5重量份以及添加剂0.01‑0.05重量份。

【技术特征摘要】
1.一种液基细胞保存液，其特征在于，该保存液由固定剂、抗凝剂、缓冲剂、注射液、营养剂、抑制剂、消除剂以及添加剂组成，其成分组成按重量份计为：固定剂20-60重量份、抗凝剂0.1-0.5重量份、缓冲剂0.5-5重量份、注射液40-60重量份、营养剂0.1-0.5重量份、抑制剂0.01-0.1重量份、消除剂0.2-0.5重量份以及添加剂0.01-0.05重量份。2.根据权利要求1所述的一种液基细胞保存液，其特征在于：所述固定剂为乙醇、甲醇和丙醇中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的一种液基细胞保存液，其特征在于：所述抗凝剂为EDTA。4.根据权利要求1所述的一种液基细胞保存液，其特征在于：所述缓冲剂为磷酸盐...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴华阳，
申请(专利权)人：宁波华莱斯医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33