转移性前列腺癌早期预测的分子探针、试剂盒及该分子探针的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种转移性前列腺癌早期预测的分子探针、试剂盒及该分子探针的应用。本发明专利技术转移性前列腺癌早期预测的分子探针包含LCRMP4探针，所述LCRMP4探针的序列如SEQ ID NO:8所示；本发明专利技术转移性前列腺癌早期预测的试剂盒包含所述分子探针。本发明专利技术提供的分子探针和试剂盒对转移性前列腺癌进行早期预测时，准确性、敏感性和特异性均较高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种分子探针、试剂盒及该分子探针的应用，具体涉及一种转移性前列腺癌早期预测的分子探针、试剂盒及该分子探针的应用。
技术介绍
前列腺癌(Prostatecancer,PCa)是严重威胁男性健康的恶性肿瘤之一，其发病率在欧美国家高居首位，死亡率居第二位。近年来，随着我国经济发展、人口老龄化加重和饮食结构改变，PCa的发病率和死亡率已逐年增长。2015年最新癌症统计数据显示PCa已成为泌尿男性生殖系统发病率和死亡率最高、增长率最快的恶性肿瘤，转移性前列腺癌患者5年的生存率仅34％。PCa正在加速影响着我国老年男性的生活质量和预期寿命。由于PCa迥异的生物学行为及复杂的发病机制，以术前前列腺特异性抗原(Prostate-specificantigen,PSA)、GS(GleasonScore)评分及临床TNM分期建立的PCa风险评估并不能准确反映PCa患者个体生物学信息。传统观点认为只有肿瘤突破包膜才开始向全身进展，而PCa早期就可以发生微转移。因此，寻找与PCa转移密切相关的生物标记物迫在眉睫。近年来，随着肿瘤病因学和分子生物学的研究进展，人们逐步认识到肿瘤的发生和发展是一个多通路、多环节、多层次、高度复杂但可控的级联反应过程，并与促癌基因及抑癌基因的活性密切相关。检测外周血中循环肿瘤细胞(circulatingtumorcells,CTCs)在监测肿瘤复发转移、确定肿瘤分子特征及判断预后等方面有重要应用价值。CTCs的本质是存在于外周循环的各类肿瘤细胞，由原发灶或转移灶脱落进入外周血。外周血中的CTCs会发生主动或被动的凋亡，只有小部分CTCs能存活下来进而通过血行转移的方式发展成为新的转移灶。CTCs的出现早于肿瘤转移灶出现，提示癌症转移可能由CTCs导致。但大部分CTCs在外周循环中发生凋亡，或被吞噬，只有少数发展成为转移灶。检测这部分能形成转移灶的CTCs数目在泌尿外科肿瘤治疗中有重要作用。研究发现CTCs的形成与上皮细胞-间质转化机制(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)有关。CTCs富集效果直接决定着后续检测的灵敏度，目前常规方法根据原理分为基于细胞生物化学特性的富集法和基于细胞物理学特性的富集法。基于细胞生物化学特性的富集法主要有免疫磁珠富集法(immunomagneticseparation,IMS)和粘附富集法。其中，IMS是一种高效、高灵敏度的CTCs富集方法。CTCs表面上皮粘附分子(EpCAM)能与链接有磁珠的特异性单抗相结合，使CTCs具有磁性并能滞留在磁场中。将免疫磁珠富集法与常规检测技术(如免疫细胞化学法，流式细胞术RT-PCR等)相结合，可大大提高外周血样本中CTCs的浓度从而提高检出率。IMS需借助CTC表面EpCAM的表达，从而导致该方法仅适用于有限的癌种。粘附富集法基于CTCs与捕获表面的亲和作用，捕获表面通过一定的生物化学修饰获得了与CTCs的亲和力。该方法可以在静态或者常用的连续微流控芯片模式下进行分离富集。在静态分离模式中，样本首先在捕获表面上孵育一段时间。随后，未粘附的细胞被冲洗掉，而CTCs将被吸附在捕获表面。由于转移性癌细胞更倾向于侵入骨基质等胶原性的组织，因此这个方法被用来捕获具有较高侵袭性的CTCs。基于细胞物理学特性的富集法主要有膜过滤富集法、梯度密度富集法和OncoQuick富集法。其中，膜过滤富集法的原理是基于细胞大小及机械性能进行过滤。将血标本通过5-10μm孔径的滤膜可将CTC富集。对循环肿瘤微栓子(CTM)的富集效果比基于免疫学原理的富集法有优势，但会有小部分肿瘤细胞因直径小于滤膜孔径而丢失，导致该方法的灵敏度偏低。梯度密度富集法的原理是基于血液中各种细胞密度差别，用分层液将肿瘤细胞和单核细胞与其他细胞层分离。这种方法操作简单，但该分离方法要求的血标本量较大(通常15-30ml)，且灵敏度和特异度均较低。OncoQuick富集法利用一种内置多孔屏障的50ml专用试管，在进行离心之前将15-30ml的全血平铺于多孔膜上，通过离心将肿瘤细胞从其他细胞中分离出来进而达到CTC富集的目的。该方法在分离过程中有可能丢失少量细胞，而且一旦血液抗凝不完全则存在于微小血凝块中的肿瘤细胞可能沉降至梯度密度液的底部。目前，前列腺癌的检测方法主要有影像学检查法、血清学检测法和病理活检监测。用于前列腺癌诊断的影像学检查主要有超声、MR和PET-CT为基础的扩展技术。超声技术是前列腺癌诊断最古老最广泛应用的技术。B超能够较好区分前列腺区带，因为B超下外周带回声比中央带和移行带较强。黑白超声技术能良好地分辨低回声病灶，经直肠黑白超声技术随机系统穿刺联合低回声病灶穿刺奠定了前列腺穿刺诊断的基础(HodgeKK,McnealJE,StameyTA.Ultrasoundguidedtransrectalcorebiopsiesofthepalpablyabnormalprostate.[J].JUrol,1989,142(1):66-70；HodgeKK,McNealJE,TerrisMK,StameyTA.Randomsystematicversusdirectedultrasoundguidedtransrectalcorebiopsiesoftheprostate.[J]JUrol.1989；142(1):71–74.)。但是B超和黑白超声技术中一些良性疾病如前列腺炎、前列腺增生也会显示为低回声病灶。早期前列腺癌周围大量的良性腺体回声掩盖会导致其显示为等回声而难以检测出来(UkimuraO,FaberK,GillIS.Intraprostatictargeting.CurrOpinUrol.2012；22(2):97–103.)。据统计，60％的超声病灶是良性病变，21-47％的前列腺癌在初次穿刺活检中漏诊(LochT,EppelmannU,LehmannJ,WullichB,LochA,StockleM.Transrectalultrasoundguidedbiopsyoftheprostate:randomsextantversusbiopsiesofsono-morphologicallysuspiciouslesions.WorldJUrol.2004；22(5):357–360；SinghH,CantoEI,ShariatSF,etal.Predictorsofprostatecancerafterinitialnegativesystematic12corebiopsy.JUrol.2004；171(5):1850–1854；TairaAV,MerrickGS,GalbreathRW,etal.Performanceoftransperinealtemplate-guidedmappingbiopsyindetectingprostatecancerintheinitialandrepeatbiopsysetting.ProstateCancerProstaticDis.2010；13(1):71–77.)。此外，随机系统穿刺方法既不是肿瘤特异性也不是患者个性化的诊断方法，有时诊断出临床无意本文档来自技高网...

【技术保护点】
转移性前列腺癌早期预测的分子探针，其特征在于：所述分子探针包含LCRMP4探针，所述LCRMP4探针的序列如SEQ ID NO:8所示。

【技术特征摘要】
1.转移性前列腺癌早期预测的分子探针，其特征在于：所述分子探针包含LCRMP4探针，所述LCRMP4探针的序列如SEQIDNO:8所示。2.如权利要求1所述的转移性前列腺癌早期预测的分子探针，其特征在于：所述分子探针还包含上皮标志物、间质标志物和CD45探针；所述上皮标志物由EpCAM探针、CK8探针、CK18探针和CK19探针组成，所述间质标志物由Vimentin探针和Twist探针组成；其中，所述EpCAM探针的序列如SEQIDNO:1所示，CK8探针的序列如SEQIDNO:2所示，CK18探针的序列如SEQIDNO:3所示，CK19探针的序列如SEQIDNO:4所示，Vimentin探针的序列如SEQIDNO:5所示，Twist探针的序列如SEQIDNO:6所示，CD45探针的序列如SEQIDNO:7所示。3.转移性前列腺癌早期预测的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含如权利要求1或2所述转移性前列腺癌早期预测的分子探针。4.如权利要求3所述的转移性前列腺癌早期预测的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒为原位杂交检测试剂盒，所述LCRMP4探针、EpCAM探针、CK8探针...

【专利技术属性】
技术研发人员：高新，庞俊，陈征，
申请(专利权)人：高新，庞俊，陈征，
类型：发明
国别省市：广东;44