反柄紫芝萜类化合物及其制备方法与应用技术

提供一种反柄紫芝萜类化合物及其药物组合物与其在制备治疗肾脏纤维化的药物或保健食品中的应用。活性研究表明该化合物和药物组合物能抑制TGF‑β1诱导的人肾小管上皮细胞产生细胞外基质(纤粘连蛋白，fibronectin)，鉴于该指标是肾脏纤维化病理的主要表现之一，与临床疾病密切相关，因此表明本发明专利技术化合物具有抗肾脏纤维化作用，能用于治疗肾脏纤维化等疾病。

【技术实现步骤摘要】
本申请是专利申请“反柄紫芝萜类化合物及其药物组合物与在制药和食品中的应用”(申请号：201510282089.X，申请日：2015年9月8日)的分案申请。
：本专利技术属于药物技术和食品领域，具体地涉及反柄紫芝中的萜类化合物及其药物组合物，以及其在制备治疗肾脏纤维化的药物或保健食品中的应用。
技术介绍
：肾脏纤维化是慢性肾病进展到肾脏衰竭(尿毒症)的必经阶段。肾脏纤维化典型的病理特征是细胞外基的分泌增加而降解减少，致使细胞外基质积聚，因此减少细胞外基质是干预纤维化的重要思路之一。细胞外基质种类较多，其中纤粘连蛋白(fibronectin)是其主要成分之一。因此，观察化合物对TGF‐β1诱导的人肾小管上皮细胞分泌纤粘连蛋白的抑制作用可以反映化合物的抗肾脏纤维化效果，这已经成为业界共识，但目前关于这方面的小分子药物还比较缺乏。反柄紫芝(Ganodermacochlear)与紫芝具有类似功效，在民间被广泛应用。本专利技术发现其含有抗肾脏纤维化活性物质，而现有技术中未见有本专利技术涉及的化合物及其抗肾脏纤维化的相关报道。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于提供具有抗肾脏纤维化价值的化合物cochlearoidsA-D(1-4)及cochlearineB(5)及其该专利技术的化合物在制备抗肾脏纤维化的药物中的应用，以及以该化合物为有效成分的药物组合物。本专利技术的上述目的是由下述的技术方案得以实现的：具有下述结构式的cochlearoidsA-D(1-4)及cochlearineB(5)：(+)-1和(-)-1R1＝H,R2＝A,R3＝OAc(+)-2和(-)-2R1＝H,R2＝A,R3＝H(+)-3和(-)-3R1＝H,R2＝B,R3＝OH(+)-4和(-)-4R1＝B,R2＝H,R3＝OH(+)-1,(+)-2,(+)-3,(+)-4:7R,9S,13S(-)-1,(-)-2,(-)-3,(-)-4:7S,9R,13R(+)-5和(-)-5(+)-5:5S,6R(-)-5:5R,6S制备所述的化合物1-5的方法，取反柄紫芝(Ganodermacochlear)子实体100kg，粉碎后用70％的乙醇室温提取(6×300L×48h)，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于适量水中，然后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物(2kg)。经硅胶色谱柱进行分离，以氯仿：甲醇(100:1–1:1)梯度洗脱，每种溶剂梯度为1.5倍柱体积，按照每份2000mL收集得7个合并组份；组份6(160g)经MCIgelCHP20P柱层析(MeOH：H2O,60％-100％)，TLC检测合并斑点相同组分得12个组份(组份6.1-6.12)。组份6.10(18g)经SephadexLH‐20(MeOH)分离得到5个组份(组份6.5.1-6.5.5)。其中组份6.5.3(100mg)经半制备液相色谱仪(MeOH:H2O，66:34)分离得到消旋的化合物5(6.8mg)。组份6.11(40g)经硅胶色谱柱进行分离，以(石油醚:丙酮，30:1–1:1)梯度洗脱，收集得7个合并组份(组份6.11.1-6.11.7)；其中组份6.11.5(3g)经SephadexLH‐20(MeOH)分离得到5个组份；其中组份6.11.5.4(300mg)经半制备液相色谱仪(acetonitrile:H2O，88:12)分离得到消旋的化合物1(3.1mg)、2(1.2mg)、3(1.8mg)、4(2.0mg)和5(1.1mg)。化合物1-4经IC柱，化合物5经AD‐H柱手性拆分为它们的对映体。化合物1-5手性拆分的流动相条件分别为n‐hexane/ethanol(90:10)，n‐hexane/ethanol,(92:8)，n‐hexane/ethanol(90:10)，n‐hexane/ethanol(84:16)，n‐hexane/ethanol(70:30)。(Table1)，流速均为1mL/min。治疗肾脏纤维化的药物组合物，含有治疗有效量的上述化合物和药学上可接受的载体。上述化合物在制备治疗肾脏纤维化药物中的应用。上述化合物在制备保健食品中的应用。本专利技术化合物可以单独直接应用或组合应用，也可以与其它药物包括植物提取物组成复方的形式使用，可以使用不同的药用辅料，制成多种固体制剂和液体制剂。将本专利技术的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本专利技术的药物可经口服和注射两种形式给药。使用量可根据给药途径、患者的年龄、体重、所治疗疾病的类型和严重程度等变化进行一次或多次使用。附图说明：图1表示化合物抑制TGF‐β1诱导的人肾小管上皮细胞分泌纤粘蛋白。#p<0.01,TGF‐β1组versusControl组；*p<0.05,**p<0.01,加药组versusTGF‐β1组；抑制率％＝(造模组纤粘连蛋白含量-药物组纤粘连蛋白含量/造模组纤粘连蛋白含量-对照组纤粘连蛋白含量)x100％。具体实施方式：下面结合附图，用本专利技术的实施例来进一步说明本专利技术的实质性内容，但并不以此来限定本专利技术。根据本专利技术的实质对本专利技术进行的简单改进都属于本专利技术的范围。实施例1：化合物1–5的分离纯化：取反柄紫芝(Ganodermacochlear)子实体100kg，粉碎后用70％的乙醇室温提取(6×300L×48h)，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于适量水中，然后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物(2kg)。经硅胶色谱柱进行分离，以氯仿：甲醇(100:1–1:1)梯度洗脱，每种溶剂梯度为1.5倍柱体积，按照每份2000mL收集得7个合并组份；组份6(160g)经MCIgelCHP20P柱层析(MeOH：H2O,60％-100％)，TLC检测合并斑点相同组分得12个组份(组份6.1-6.12)。组份6.10(18g)经SephadexLH‐20(MeOH)分离得到5个组份(组份6.5.1-6.5.5)。其中组份6.5.3(100mg)经半制备液相色谱仪(MeOH:H2O，66:34)分离得到消旋的化合物5(6.8mg)。组份6.11(40g)经硅胶色谱柱进行分离，以(石油醚:丙酮，30:1–1:1)梯度洗脱，收集得7个合并组份(组份6.11.1-6.11.7)；其中组份6.11.5(3g)经SephadexLH‐20(MeOH)分离得到5个组份；其中组份6.11.5.4(300mg)经半制备液相色谱仪(acetonitrile:H2O，88:12)分离得到消旋的化合物1(3.1mg)、2(1.2mg)、3(1.8mg)、4(2.0mg)和5(1.1mg)。化合物1-4经IC柱，化合物5经AD‐H柱手性拆分为它们的对映体。化合物1-5手性拆分的流动相条件分别为n‐hexane/ethanol(90:10)，n‐hexane/ethanol,(92:8)，n‐hexane/ethanol(90:10)，n‐hexane/ethanol(84:16)，n‐hexane/ethanol(70:30)。(Table1)，流速均为1mL/min。化合物1–5的结构确证：化合物1–5的结构本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有下述结构式的化合物，

【技术特征摘要】
1.具有下述结构式的化合物，2.制备权利要求1所述的化合物的方法，取反柄紫芝子实体，粉碎后用70％的乙醇室温提取，6×300L×48h，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于适量水中，然后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物，经硅胶色谱柱进行分离，以100:1–1:1的氯仿:甲醇梯度洗脱，每种溶剂梯度为1.5倍柱体积，按照每份2000mL收集得7个合并组份；组份6经MCIgelCHP20P柱层析，MeOH：H2O,60％-100％，TLC检测合并斑点相同组分得12个组份6.1-6.12，组份6.10经SephadexLH‐20MeOH分离得到5个组份6.5.1-6.5.5，其中组份6.5.3经半制备液相色谱仪MeOH:H2O，66:34分离...

【专利技术属性】
技术研发人员：程永现，周凤娇，邸磊，吕青，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53