一种口蹄疫疫苗的制备方法技术

本申请涉及一种口蹄疫疫苗的制备方法，包括如下步骤：(i)获取口蹄疫病毒细胞培养液；(ii)将所述口蹄疫病毒细胞培养液通过双膜联用一体过滤系统进行分离纯化；(iii)收集步骤(ii)中所获得的含有口蹄疫病毒的浓缩液。本申请还涉及由所述方法制备得到的口蹄疫疫苗及其在制备用于预防动物口蹄疫疾病的药物中的用途。本申请还涉及一种用于制备口蹄疫疫苗的装置，其包括双膜联用一体过滤系统。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及兽用生物制品领域，具体地，本申请涉及一种口蹄疫疫苗的制备方法、由所述方法制备得到的口蹄疫疫苗、所述口蹄疫疫苗在制备用于预防动物口蹄疫疾病的药物中的用途，以及用于制备口蹄疫疫苗的装置。
技术介绍
口蹄疫(FootandMouthDisease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、发热性、高度接触性传染的动物传染病。口蹄疫主要侵害偶蹄类动物，其临床诊断特征为口腔黏膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱。目前已开发出多种用于控制和预防口蹄疫疾病的口蹄疫疫苗。对于口蹄疫疫苗的制备方法，目前本领域通常采用的是各种分离纯化加工单元的简单组合，例如，采用连续流离心搭配直流过滤、深层过滤、或者中空纤维过滤、PEG沉淀法或者色谱层析法等手段对收获的口蹄疫病毒细胞培养液进行分离和纯化，以获得纯化的口蹄疫病毒疫苗。然而，这种分离纯化加工单元的简单组合难以发挥各加工单元的最佳分离纯化效率，造成产品品质、生产效率和生产成本极不平衡的状况，而这是人们所不希望的。专利技术概述本申请涉及一种口蹄疫疫苗的制备方法、由所述方法制备得到的口蹄疫疫苗、所述口蹄疫疫苗在制备用于预防动物口蹄疫疾病的药物中的用途，以及用于制备口蹄疫疫苗的装置。一方面，本申请提供了一种口蹄疫疫苗的制备方法，包括如下步骤：(i)获取口蹄疫病毒细胞培养液；(ii)将所述口蹄疫病毒细胞培养液通过双膜联用一体过滤系统进行分离纯化，所述双膜联用一体过滤系统包括并行设置的微滤装置和超滤装置，所述微滤装置包括微滤料液罐、第一主泵和微滤膜，所述超滤装置包括浓缩罐、第二主泵和超滤膜；其中所述微滤装置用于除去所述口蹄疫病毒细胞培养液中的大颗粒杂质，所述超滤装置用于除去所述口蹄疫病毒细胞培养液中的小分子杂质；所述微滤装置和所述超滤装置同时运行对所述口蹄疫病毒细胞培养液同时进行微滤和超滤，从而在所述浓缩罐中形成含有口蹄疫病毒的浓缩液；(iii)收集步骤(ii)中所获得的含有口蹄疫病毒的浓缩液。在某些实施方式中，所述浓缩罐的体积等于所述口蹄疫病毒细胞培养液的目标浓缩体积或者不大于所述目标浓缩体积的1.5倍。在某些实施方式中，所述浓缩罐的体积为所述口蹄疫病毒细胞培养液初始体积的1/5～1/50。在某些实施方式中，所述微滤膜的孔径为0.1μm～0.45μm。在某些实施方式中，所述超滤膜是孔径为100kD～500kD的中空纤维超滤膜。在某些实施方式中，在所述口蹄疫病毒细胞培养液至少部分通过所述微滤装置之后，进一步向所述微滤料液罐中加入第一洗滤液，使其通过所述双膜联用一体过滤系统，获得浓缩液。在某些实施方式中，所述第一洗滤液为pH7.2～pH9、电导5-300mS/cm的缓冲溶液。在某些实施方式中，所加入的第一洗滤液的体积为微滤截留液体积的1～5倍。在某些实施方式中，将步骤(ii)中所获得的超滤滤过液做为第一洗滤液加入至所述微滤料液罐中，使所述超滤滤过液通过所述双膜联用一体过滤系统，获得浓缩液。在某些实施方式中，向步骤(ii)中所获得的含有口蹄疫病毒的浓缩液中加入第二洗滤液，使所述浓缩液中的小分子杂质透过超滤膜，获得纯化的病毒浓缩液。在某些实施方式中，所述第二洗滤液为pH7.2～pH9、电导5-300mS/cm的缓冲溶液。在某些实施方式中，所加入的第二洗滤液的体积为所述病毒浓缩液体积的1～10倍。在某些实施方式中，所述微滤装置与第一恒流泵连接、所述超滤装置与第二恒流泵连接以动态控制过膜通量。在某些实施方式中，所述第一恒流泵设置在所述微滤装置的滤过端，所述第二恒流泵设置在所述超滤装置的滤过端。在某些实施方式中，所述过膜通量为微滤膜或超滤膜的临界膜通量的65％～100％。在某些实施方式中，所述过膜通量为10-150LMH。在某些实施方式中，所述微滤膜和所述超滤膜的剪切速率各为1500～4000s-1。在某些实施方式中，所述微滤膜和所述超滤膜的物料与膜面积比均各为10～500L/m2。在某些实施方式中，在步骤(iii)之后对所述含有口蹄疫病毒的浓缩液进行灭活。在某些实施方式中，在所述灭活之后对所述含有口蹄疫病毒的浓缩液进行乳化。在某些实施方式中，在所述灭活之前或之后对所述含有口蹄疫病毒的浓缩液进行进一步纯化。在某些实施方式中，所述进一步纯化通过PEG沉淀法或色谱层析法进行。在某些实施方式中，所述色谱层析法包括排阻色谱层析法、离子交换色谱层析法、疏水色谱层析法和亲和色谱层析法。在某些实施方式中，在步骤(iii)之后对所述微滤装置和所述超滤装置进行清洗再生。在某些实施方式中，所述清洗再生包括如下步骤：(a)将纯水分别加入所述微滤装置和所述超滤装置以分别清洗其中的微滤膜和超滤膜，清洗过程中膜剪切速率提升至8000s-1～16000s-1，过膜通量控制在10～500LMH；(b)经步骤(a)清洗后将0.1～0.5MNaOH溶液分别加入所述微滤装置和所述超滤装置做进一步清洗，溶液温度为45～55℃，膜剪切速率为8000s-1～16000s-1，过膜通量控制在50～500LMH，时间为30～60分钟；(c)经步骤(b)清洗后用纯水分别冲洗所述微滤装置和所述超滤装置至微滤滤过液和超滤滤过液的pH值降至9以下。在某些实施方式中，所述口蹄疫病毒毒株包括一种或多种口蹄疫病毒血清型毒株。在某些实施方式中，所述血清型为O型、A型、C型、SAT1型、SAT2型、SAT3型或Asia1型。在另一方面，本申请涉及根据本申请所述的方法制备得到的口蹄疫疫苗。在另一方面，本申请涉及根据本申请所述的口蹄疫疫苗在制备用于预防动物口蹄疫疾病的药物中的用途。在另一方面，本申请涉及一种预防动物口蹄疫疾病的方法，包括给予所述动物免疫有效量的根据本申请所述的口蹄疫疫苗。在另一方面，本申请涉及用于预防动物口蹄疫疾病的根据本申请所述的口蹄疫疫苗。在另一方面，本申请涉及一种用于制备口蹄疫疫苗的装置，其包括双膜联用一体过滤系统，所述双膜联用一体过滤系统包括并行设置的微滤装置和超滤装置，所述微滤装置包括微滤料液罐、第一主泵和微滤膜，所述超滤装置包括浓缩罐、第二主泵和超滤膜；其中所述微滤装置用于除去所述口蹄疫病毒细胞培养液中的大颗粒杂质，所述超滤装置用于除去所述口蹄疫病毒细胞培养液中的小分子杂质；所述微滤装置和所述超滤装置同时运行对所述口蹄疫病毒细胞培养液同时进行微滤和超滤，从而在所述浓缩罐中形成含有口蹄疫病毒的浓缩液。在某些实施方式中，所述微滤装置和所述超滤装置相互连接，以使得微滤滤过液和超滤截留液均置于所述浓缩罐中形成所述含有口蹄疫病毒的浓缩液。在某些实施方式中，所述双膜联用一体过滤系统还包括第一恒流泵和第二恒流泵，所述微滤装置与所述第一恒流泵连接，所述超滤装置与所述第二恒流泵连接以动态控制过膜通量。在某些实施方式中，所述第一恒流泵设置在所述微滤装置的滤过端，所述第二恒流泵设置在所述超滤装置的滤过端。附图说明图1显示了本申请实施例1的口蹄疫疫苗制备工艺的示意图。图2显示了本申请实施例2的口蹄疫疫苗制备工艺的示意图。图3显示了本申请实施例1的口蹄疫病毒抗原SDS-PAGE电泳图。图4显示了本申请实施例1的口蹄疫病毒抗原HPLC检测结果。图5显示了本申请实施例5的微滤膜和超滤膜连续使用200次后清洗回复的水通量测定值。专利技术详述尽管本申请将本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种口蹄疫疫苗的制备方法，包括如下步骤：(i)获取口蹄疫病毒细胞培养液；(ii)将所述口蹄疫病毒细胞培养液通过双膜联用一体过滤系统进行分离纯化，所述双膜联用一体过滤系统包括并行设置的微滤装置和超滤装置，所述微滤装置包括微滤料液罐、第一主泵和微滤膜，所述超滤装置包括浓缩罐、第二主泵和超滤膜；其中所述微滤装置用于除去所述口蹄疫病毒细胞培养液中的大颗粒杂质，所述超滤装置用于除去所述口蹄疫病毒细胞培养液中的小分子杂质；所述微滤装置和所述超滤装置同时运行对所述口蹄疫病毒细胞培养液同时进行微滤和超滤，从而在所述浓缩罐中形成含有口蹄疫病毒的浓缩液；(iii)收集步骤(ii)中所获得的含有口蹄疫病毒的浓缩液。

【技术特征摘要】
1.一种口蹄疫疫苗的制备方法，包括如下步骤：(i)获取口蹄疫病毒细胞培养液；(ii)将所述口蹄疫病毒细胞培养液通过双膜联用一体过滤系统进行分离纯化，所述双膜联用一体过滤系统包括并行设置的微滤装置和超滤装置，所述微滤装置包括微滤料液罐、第一主泵和微滤膜，所述超滤装置包括浓缩罐、第二主泵和超滤膜；其中所述微滤装置用于除去所述口蹄疫病毒细胞培养液中的大颗粒杂质，所述超滤装置用于除去所述口蹄疫病毒细胞培养液中的小分子杂质；所述微滤装置和所述超滤装置同时运行对所述口蹄疫病毒细胞培养液同时进行微滤和超滤，从而在所述浓缩罐中形成含有口蹄疫病毒的浓缩液；(iii)收集步骤(ii)中所获得的含有口蹄疫病毒的浓缩液。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述浓缩罐的体积等于所述口蹄疫病毒细胞培养液的目标浓缩体积或者不大于所述目标浓缩体积的1.5倍。3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述口蹄疫病毒细胞培养液至少部分通过所述微滤装置之后，进一步向所述微滤料液罐中加入第一洗滤液，使其通过所述双膜联用一体过滤系统，获得浓缩液。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中向步骤(ii)中所获得的含有口蹄疫病毒的浓缩液中加入第二洗滤液，使所述浓缩液中的小分子杂质透过超滤膜，获得纯化的病毒浓缩液。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述微滤装置与第一恒流泵连接、所述超滤装置与第二恒流泵连接以动态控制过膜通量。6.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(iii)之后对所述含有口蹄疫病毒的浓缩液进行灭活。7.根据权利要求6所述的方法，其中在所述灭活之前或之后对所述含有口蹄疫病毒的浓缩液进行进一步纯化。8.根据权利要求7所述的方法，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：马贵军，张震，聂东升，罗盘棋，
申请(专利权)人：申联生物医药上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31