一种特异性结合肿瘤内皮标记物8的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程抗体技术领域，具体涉及一种特异性结合肿瘤内皮标记物8的单克隆抗体及其应用。本发明专利技术的特异性结合TEM8的单克隆抗体对TEM8具有特异性结合，本发明专利技术还提供所述的特异性结合TEM8的单克隆抗体在制备用于治疗TEM8相关性疾病药物中的用途，本发明专利技术还提供含有特异性结合TEM8的单克隆抗体的药物组合物或试剂、试剂盒或芯片。本发明专利技术的特异性结合TEM8的单克隆抗体，与TEM8重组蛋白和TEM8过表达细胞中的TEM8抗原都具有极强的特异性和敏感性，经实验验证，本发明专利技术的特异性结合TEM8的单克隆抗体可用于与TEM8相关性疾病药物中，并进行TEM8相关诊断与检测，具有很高的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程抗体
，具体涉及一种特异性结合肿瘤内皮标记物8的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
肿瘤内皮标记物(TEM8)是肿瘤内皮标记物(tumorendothelialmarkers，TEMs)中的一种，最初分别在肿瘤血管形成和体外正常血管形成过程中的内皮细胞中被发现表达上调。TEM8是一种由564个氨基酸残基组成的具有完整跨膜螺旋的I型跨膜蛋白，胞外有大约300个氨基酸，包括一个约200个氨基酸组成的vWA结构域和近膜的一个功能未知的Ig样结构域。其中vWA结构域主要负责蛋白质相互作用，TEM8的vWA结构域具有典型的Ⅰ结构域特征：一个NAD结合的Rossmann折叠，这一结构是由个α﹣螺旋围绕着中央的一个六层的β﹣折叠组成，在α﹣螺旋和β﹣折叠之间创造了一个疏水核心。目前对跨膜结构域的了解相当有限，只知道其由23个氨基酸残基组成，比一般的跨膜蛋白的跨膜区多两个残基，此外TEM8还有一个非常特殊的胞质尾。在研究肿瘤血管形成相关基因的表达时，发现TEM8在鼠和人的各种肿瘤血管细胞表面或者肿瘤细胞表面的表达量均有上调。起初发现TEM8表达于结肠癌内皮细胞中，而在周围正常组织中表达微乎其微，随后在结肠癌组织的血管中也检测到TEM8蛋白，后来TEM8还被发现在许多不同类型的人类肿瘤(包括膀胱癌、结肠癌、食管癌和肺癌等)的血管内皮细胞中表达增加，而在正常组织的血管中没有表达或表达很少。这些研究都表明TEM8可以成为治疗肿瘤的新靶点。肿瘤是一类严重危害人类生命健康的疾病，除了早期的化疗外，其余主要依靠抗体类的药物，目前大多数药物针对的靶点是血管内皮生长因子和血管内皮生长因子受体，除了价格昂贵，疗效也很难达到预期。针对靶点TEM8的抗体将会是一个新的治疗途径。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种特异性结合TEM8的单克隆抗体，以及含有该抗体的药物组合物或试剂、试剂盒或芯片，在检测肿瘤发生，发展及转移中的用途。本专利技术的特异性结合TEM8的单克隆抗体对TEM8具有特异性结合。经检测，本专利技术的特异性结合TEM8的单克隆抗体与TEM8重组蛋白结的结合活性的EC50值为32.42ng/ml，与TEM8过表达细胞结合，EC50值为133ng/ml。本专利技术的特异性结合TEM8的单克隆抗体，其氨基酸序列区由重链和轻链中的高度可变区CDR1、CDR2和CDR3，以及连接序列和框架区组成，其中重链可变区含有SEQIDNO.1、SEQIDN0.2和SEQIDNO.3所示的氨基酸序列，和/或其轻链可变区含有SEQIDNO.4、SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示的氨基酸序列，重链和轻链中的高度可变区CDR1、CDR2和CDR3是与TEM8结合的关键部位，框架区可在结合所需的三维结构不受影响的条件下被其他序列置换。在某些优选例中，一个单克隆抗体包含如下内容的可变区：一个包含了如SEQIDNO.12的重链可变区，其含有CDR1(SEQIDNO.1)、CDR2(SEQIDNO.2)和CDR3(SEQIDNO.3)，和一个包含了如SEQIDNO.13的轻链可变区，其含有CDR1(SEQIDNO.4)、CDR2(SEQIDNO.5)，CDR3(SEQIDNO.6)。可变区CDR的变体与上述CDR区除了有至多6个氨基酸取代的不同外基本上是一致的(例如，1、2、3、4或5个氨基酸取代)，在该单克隆抗体的CDR区具有与TEM8结合活性。在其它实施方案中，抗体可包含：a)一个重链可变区，其氨基酸序列与SEQIDNO.12相比有至多6个氨基酸序列取代的不同，例如1、2、3、4、5、或6个取代；和b)一个轻链可变区，其氨基酸序列与SEQIDNO.8相比有至多6个氨基酸序列取代的不同，例如1、2、3、4、5、或6个氨基酸取代。目标抗体可能包含这些取代中的任何一个或其组合。拥有这些取代位置中任一个的抗体和拥有所有取代位置的抗体同样具有结合TEM8的活性。氨基酸取代可同时存在于框架区和CDR区，或单独出现在框架区或CDR区。因此，在某些优选例中，重链可变区的框架区的氨基酸序列与SEQIDNO.13相比可能有最多6个氨基酸序列取代的不同，例如1、2、3、4、5、或6个取代，和轻链可变区的框架区的氨基酸序列与SEQIDNO.8相比可能有最多6个氨基酸序列取代的不同，例如1、2、3、4、5、或6个取代。在一些抗体中，氨基酸取代可能分布在多个CDR区。因此，重链可变区的多个CDR区的氨基酸序列与SEQIDNO.12相比可能有至多6个氨基酸序列取代的不同，例如1、2、3、4、5、或6个取代，和轻链可变区的多个CDR区的氨基酸序列与SEQIDNO.13相比可能有至多6个氨基酸序列取代的不同，例如1、2、3、4、5、或6个取代。在特殊的优选例中，抗体可能包含a)一个重链可变区，其氨基酸序列与SEQIDNO.12一致和b)一个轻链可变区，其氨基酸序列与SEQIDNO.13一致。在特殊的优选例中，抗体可能包含a)一个重链可变区，其氨基酸序列与SEQIDNO.12至少有95％的一致性和b)一个轻链可变区，其氨基酸序列与SEQIDNO.13至少有95％的一致性。因此，目标抗体可能包含a)一个重链可变区，其氨基酸序列与SEQIDNO.12至少有约95％、96％、97％、98％、99％或100％的一致性和b)一个轻链可变区，其氨基酸序列与SEQIDNO.13至少有约95％、96％、97％、98％、99％或100％的一致性。在特殊的优选例中，抗体可能包含a)一个重链，其氨基酸序列与SEQIDNO.16一致和b)一个轻链，其氨基酸序列与SEQIDNO.17一致。在特殊的优选例中，抗体可能包含a)一个重链，其氨基酸序列与SEQIDNO.9至少有95％的一致性和b)一个轻链，其氨基酸序列与SEQIDNO.10至少有95％的一致性。因此，目标抗体可能包含a)一个重链，其氨基酸序列与SEQIDNO.16至少有约95％、96％、97％、98％、99％或100％的一致性和b)一个轻链，其氨基酸序列与SEQIDNO.17至少有约95％、96％、97％、98％、99％或100％的一致性。除了上面所描述的氨基酸取代，目标抗体可能在重链或轻链的两端有附加的氨基酸。例如，目标抗体在重链和/或轻链的C或N末端分别可能包含至少1、2、3、4、5或6或更多的附加氨基酸。在某些实施例中，目标抗体可能比这里所描述的示范性氨基酸短，其主要区别为在重链和轻链的两端分别比示范性氨基酸少1、2、3、4、5或6个氨基酸。本专利技术所述特异性结合TEM8的单克隆抗体包括具有所需特异性的结合结构域的任意特异性结合因子，是单价的或是单链抗体、双链抗体、嵌合抗体以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽；如免疫球蛋白亚型：IgG，IgE，IgM，IgD和IgA及其亚型亚类，如包含抗原结合结构域的片段：Fab、scFv、Fv、dAb、Fd。本专利技术的特异性结合TEM8的单克隆抗体的制备方法是杂交瘤方法，根据本专利技术公开的氨基酸序列人工合成或用PCR法扩增，或者采用重组DNA方法，将本专利技术公开的氨基酸序列连入合适的表达载体中。本专利技术的特异性结合TEM8的单克隆抗体的纯化采本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异性结合TEM8的单克隆抗体，其特征在于对TEM8具有特异性结合作用。

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合TEM8的单克隆抗体，其特征在于对TEM8具有特异性结合作用。2.根据权利要求1所述的一种特异性结合TEM8的单克隆抗体，其特征在于其氨基酸序列区由重链和轻链中的高度可变区CDR1、CDR2和CDR3，以及连接序列和框架区组成，其中重链可变区含有SEQIDNO.1、SEQIDN0.2和SEQIDNO.3所示的氨基酸序列，和/或其轻链可变区含有SEQIDNO.4、SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示的氨基酸序列，重链和轻链中的高度可变区CDR1、CDR2和CDR3是与TEM8结合的关键部位，框架区可在结合所需的三维结构不受影响的条件下被其他序列置换。3.根据权利要求1所述的一种特异性结合TEM8的...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏云鹏，庄伟亮，裴丽丽，张建军，
申请(专利权)人：江苏诺迈博生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32