针对RHAMM抗原短肽的高亲和力T细胞受体制造技术

本发明专利技术提供了一种T细胞受体(TCR)，其具有结合ILSLELMKL‑HLA A0201复合物的特性；并且所述TCR对所述ILSLELMKL‑HLA A0201复合物的结合亲和力是野生型TCR对ILSLELMKL‑HLA A0201复合物的结合亲和力的至少2倍。本发明专利技术还提供了此类TCR与治疗剂的融合分子。此类TCR可以单独使用，也可与治疗剂联用，以靶向呈递ILSLELMKL‑HLA A0201复合物肿瘤细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生物
，更具体地涉及能够识别衍生自RHAMM抗原多肽的T细胞受体(Tcellreceptor,TCR)。本专利技术还涉及所述受体的制备和用途。
技术介绍
仅仅有两种类型的分子能够以特异性的方式识别抗原。其中一种是免疫球蛋白或抗体；另一种是T细胞受体(TCR)，它是由α链/β链或者γ链/δ链以异二聚体形式存在的细胞膜表面的糖蛋白。免疫系统的TCR总谱的组成是在胸腺中通过V(D)J重组，然后进行阳性和阴性选择而产生的。在外周环境中，TCR介导了T细胞对主组织相容性复合体-肽复合物(pMHC)的特异性识别，因此其对免疫系统的细胞免疫功能是至关重要的。TCR是呈递在主组织相容性复合体(MHC)上的特异性抗原肽的唯一受体，这种外源肽或内源肽可能会是细胞出现异常的唯一迹象。在免疫系统中，通过抗原特异性的TCR与pMHC复合物的结合引发T细胞与抗原呈递细胞(APC)直接的物理接触，然后T细胞及APC两者的其他细胞膜表面分子就发生相互作用，这就引起了一系列后续的细胞信号传递和其他生理反应，从而使得不同抗原特异性的T细胞对其靶细胞发挥免疫效应。与TCR相对应的MHCI类和II类分子配体也是免疫球蛋白超家族的蛋白质但对于抗原的呈递具有特异性，不同的个体有不同的MHC，从而能呈递一种蛋白抗原中不同的短肽到各自的APC细胞表面。人类的MHC通常称为HLA基因或HLA复合体。RHAMM是一种内源性抗原，在细胞内生成后被降解成小分子多肽，并与MHC(主组织相容性复合体)分子结合形成复合物，被呈递到细胞表面。ILSLELMKL(165-173)是衍生自RHAMM的短肽(GreinerJ,etal.,Blood2005,106(3):938-945)。研究显示，RHAMM在多种肿瘤组织中均有表达，以白血病(GreinerJ,etal.,Experimentalhematology2002,30(9):1029-1035)、结肠癌(YamadaY,etal.,Japanesejournalofcancerresearch:Gann1999,90(9):987-992)、乳腺癌(WangC,etal.,Clinicalcancerresearch:anofficialjournaloftheAmericanAssociationforCancerResearch1998,4(3):567-576)较为突出，在其他的癌症，如胃癌(LiH,etal.,Internationaljournalofoncology2000,17(5):927-932)、肾癌(GreinerJ,etal.,Experimentalhematology2002,30(9):1029-1035)、口腔鳞状细胞癌(YamanoY,etal.,Internationaljournalofoncology2008,32(5):1001-1009)、头颈部鳞状细胞癌(SchmittA,etal.,Internationaljournalofoncology2009,34(3):629-639)等肿瘤细胞中也均有表达。肿瘤细胞的HLA分子呈递包括ILSLELMKL在内的源自于RHAMM的短肽。因此，ILSLELMKL-HLAA0201复合物提供了一种TCR可靶向肿瘤细胞的标记。能够结合ILSLELMKL-HLAA0201复合物的TCR对肿瘤的治疗具有很高的应用价值。例如，能够靶向该肿瘤细胞标记的TCR可用于将细胞毒性剂或免疫刺激剂递送到靶细胞，或被转化入T细胞，使表达该TCR的T细胞能够破坏肿瘤细胞，以便在被称为过继免疫治疗的治疗过程中给予患者。对于前一目的，理想的TCR是具有较高的亲和力的，从而使该TCR能够长期驻留在所靶向的细胞上面。对于后一目的，则优选使用中等亲和力的TCR。因此，本领域技术人员致力于开发可用于满足不同目的的靶向肿瘤细胞标记的TCR。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种对ILSLELMKL-HLAA0201复合物具有较高亲和力的TCR。本专利技术的再一目的是提供一种上述类型TCR的制备方法及上述类型TCR的用途。本专利技术的第一方面，提供了一种T细胞受体(TCR)，其具有结合ILSLELMKL-HLAA0201复合物的活性。在另一优选例中，所述T细胞受体，具有结合ILSLELMKL-HLAA0201复合物的特性。在另一优选例中，所述TCR包含α链可变域和β链可变域，TCRα链可变域包含3个CDR区，所述TCRα链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1α：DRVSQSCDR2α：IYSNGDCDR3α：AATNSGYALN，并且含有至少一个下列突变：突变前的残基突变后的残基CDR1α的第2位RI、K或MCDR1α的第3位VY或LCDR1α的第4位SNCDR1α的第6位SACDR2α的第1位ILCDR2α的第3位SRCDR2α的第4位NGCDR2α的第6位DS或TCDR3α的第5位SDCDR3α的第7位YICDR3α的第8位AH、I、V或LCDR3α的第9位LF、M或I在另一优选例中，TCRβ链可变域包含3个CDR区，所述TCRβ链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1β：GTSNPNCDR2β：SVGIGCDR3β：AWSVDGAEQY，并且含有至少一个下列突变：在另一优选例中，所述TCRα链可变域CDR区的突变个数为3个或4个或6个或7个或8个或9个或11个。在另一优选例中，所述TCRβ链可变域CDR区的突变个数为2个或3个或5个或6个或7个或8个或9个。在另一优选例中，所述TCR包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRβ链可变域包括CDR1β、CDR2β、和CDR3β，其中,所述CDR3β包含序列:DGAEQY，并且长度为10个氨基酸残基。在另一优选例中，所述DGAEQY,位于所述CDR3β的第5-10位。在另一优选例中，所述CDR3β包含序列：[3βX1][3βX2]S[3βX3]DGAEQY,其中，[3βX1]、[3βX2]、[3βX3]独立地选自任意的天然氨基酸残基。在另一优选例中，所述[3βX1]为A或S。在另一优选例中，所述[3βX2]为W或Y。在另一优选例中，所述[3βX3]为V或L。在另一优选例中，所述CDR3β包含选自下组的序列：AWSVDGAEQY、SYSLDGAEQY和AWSLDGAEQY。在另一优选例中，所述CDR2β包含序列:SVG。在另一优选例中，所述CDR2β包含序列：SVG[2βX1][2βX2],其中，[2βX1]、[2βX2]独立地选自任意的天然氨基酸残基。在另一优选例中，所述[2βX1]为I或V。在另一优选例中，所述[2βX2]为G或R。在另一优选例中，所述CDR2β包含选自下组的序列：SVGIG和SVGVR。在另一优选例中，所述CDR1β包含选自下组的序列：PHSPRL(较佳地)、LDDLRI(较佳地)、LRYIRA(较佳地)、LSNTRA和GTSNPN。在另一优选例中，所述TCRα链可变域包括CDR1α、CDR2α、和CDR3α。在另一优选例中，所述CDR3α包含序列:AATN，并且所述CDR3α长度为8-13个氨基酸，优选为10个氨基酸。在另一优选例中，所述CDR3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种T细胞受体(TCR)，其特征在于，其具有结合ILSLELMKL‑HLA A0201复合物的活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.09 CN 201510570265X1.一种T细胞受体(TCR)，其特征在于，其具有结合ILSLELMKL-HLAA0201复合物的活性。2.如权利要求1所述的TCR，其特征在于，其包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRα链可变域包含3个CDR区，所述TCRα链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1α：DRVSQSCDR2α：IYSNGDCDR3α：AATNSGYALN，并且含有至少一个下列突变：突变前的残基突变后的残基CDR1α的第2位RI、K或MCDR1α的第3位VY或LCDR1α的第4位SNCDR1α的第6位SACDR2α的第1位ILCDR2α的第3位SRCDR2α的第4位NGCDR2α的第6位DS或TCDR3α的第5位SDCDR3α的第7位YICDR3α的第8位AH、I、V或LCDR3α的第9位LF、M或I和/或所述TCRβ链可变域包含3个CDR区，所述TCRβ链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1β：GTSNPNCDR2β：SVGIGCDR3β：AWSVDGAEQY，并且含有至少一个下列突变：突变前的残基突变后的残基CDR1β的第1位GL或PCDR1β的第2位TS、H、R或DCDR1β的第3位SN、Y或DCDR1β的第4位NP、T、I或LCDR1β的第5位PRCDR1β的第6位NL、A或ICDR2β的第4位IVCDR2β的第5位GRCDR3β的第1位ASCDR3β的第2位WYCDR3β的第4位VL。3.一种T细胞受体(TCR)，其具有结合ILSLELMKL-HLAA0201复合物的活性，并包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，其特征在于，所述TCR在SEQIDNO：36所示的α链可变域中发生突变，所述突变的氨基酸残基位点包括28R、29V、30S、32S、50I、52S、53N、55D、94S、96Y、97A或98L中的一个或多个，其中，氨基酸残基编号采用SEQIDNO:36所示的编号；和/或所述TCR在SEQIDNO：37所示的β链可变域中发生突变，所述突变的氨基酸残基位点包括27G、28T、29S、30N、31P、32N、53I、54G、92A、93W或95V中的一个或多个，其中，氨基酸残基编号采用SEQIDNO:37所示的编号。4.如权利要求3所述的TCR，其特征在于，突变后的所述TCRα链可变域包括选自下组的一个或多个氨基酸残基：28I、28K、或28M；29Y或29L；30N；32A；50L；52R；53G；55S或55T；94D；96I；97H、97I、97V或97L；98M、98I或98F；和/或突变后的所述TCRβ链可变域包括选自下组的一个或多个氨基酸残基：27P或27L；28H、28S、28R或28D；29N、29Y或29D；30P、30T、30I或30L；31R；32L、32A或32I；53V；54R；92S；93Y；95L。5.一种T细胞受体(TCR)，其特征在于，所述TCR包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRβ链可变域包含CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR3β包含序列：DGAEQY，并且其长度为10个氨基酸残基。6.如以上任一权利要求所述的TCR，其特征在于，所述TCR是αβ异质二聚TCR，所述TCR的α链可变域包含与SEQIDNO:36所示的氨基酸序列有至少90％的序列同源性的氨基酸序列；和/或所述TCR的β链可变域包含与SEQIDNO:37所示的氨基酸序列有至少90％的序列同源性的氨基酸序列。7.如以上任一权利要求所述的TCR，其特征在于，所述TCR包含(ⅰ)除其跨膜结构域以外的全部或部分TCRα链，和(ⅱ)除其跨膜结构域以外的全部或部分TCRβ链，其中(ⅰ)和(ⅱ)均包含TCR链的可变域和至少一部分恒定域。8.如以上任一权利要求所述的TCR，其特征在于，所述TCR的α链可变域氨基酸序列包含SEQIDNO:40-56中任一氨基酸序列；和/或所述TCR的β链可变域氨基酸序列包含SEQIDNO:57-69中任一氨基酸序列。9.如以上任一权利要求所述的TCR，其特征在于，所述TCR具有选自下组的CDR：10.如以上任一权利要求所述的TCR，其特征在于，所述TCR的α链可变区与β链恒定区之间含有人工链间二硫键。11.如权利要求10所述的TCR，其特征在于，在所述TCR中形成人工链间二硫键的半胱氨酸残基取代了选自下列的一组或多组位点：TRAV的第46位氨基酸和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的第60位氨基酸；TRAV的第47位氨基酸和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的61位氨基酸；TRAV的第46位氨基酸和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的第61位氨基酸；或TRAV的第47位氨基酸和TRBC1*01或TRBC2*01外显子1的第60位氨基酸。12.如权利要求10或11所述的TCR，其特征在于，所述TCR包含α链可变域和β链可变域以及除跨膜结构域以外的全部或部分β链恒定域，但其不包含α链恒定域，所述TCR的α链可变域与β链形成异质二聚体。13.如权利要求1-9中任一所述的TCR，其特征在于，所述TCR的α链恒定区与β链恒定区之间含有人工链间二硫键。14.如权利要求13所述的TCR，其特征在于，在所述TCR中，形成人工链间二硫键的半胱氨酸残基取代了选自下列的一组或多组位点：TRAC*01外显子1的T...

【专利技术属性】
技术研发人员：李懿，黄仪有，
申请(专利权)人：广州市香雪制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44