多特异性抗体构建体制造技术

本公开内容涉及多特异性抗体分子，其包含以下部分或由其组成：a)式(I)的多肽链：VH‑CH1‑X‑V1；和b)式(II)的多肽链：VL‑CL‑Y‑V2，和例如用于治疗的包含其的药物制剂。本公开内容还提供了编码所述多特异性抗体分子的多核苷酸序列，包含所述多核苷酸的载体和包含所述载体和/或多核苷酸序列的宿主细胞。提供了从宿主细胞表达本公开内容的多特异性抗体分子的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本公开内容涉及某些多特异性抗体构建体，包含所述构建体的药物制剂，编码所述构建体的DNA和包含所述DNA的载体。本公开内容还扩展至例如在宿主细胞中表达所述构建体的方法和用于将其配制为药物组合物的方法。本公开内容还涉及多特异性抗体构建体和制剂在治疗中的用途。有许多用于产生双特异性抗体的方法，其中许多基于Morrison等最初描述的形式(Coloma和Morrison1997，NatBiotechnol.15,159-163)，涉及单链可变片段(scFv)与全抗体例如IgG或与抗体Fab片段的融合，Schoonjans等，2000，JournalofImmunology，165，7050-7057。在Fab-scFv的情况下，用于此类双特异性和三特异性分子的scFv的VH和VL结构域通常通过肽接头保持在一起。然而，对于VH和VL可变结构域的某些组合，肽接头不能赋予scFv足够的稳定性，从而导致可变结构域“呼吸”和混杂的与可变结构域的分子间配对，和从而通过其单链Fv部分形成多聚体的趋势。这在图1中在双特异性分子的上下文中进行了举例说明。本专利技术人已重新工程化所关注的多特异性抗体分子，以提供具有等同功能性的抗体分子，同时在表达阶段和/或纯化后使多聚化降至最低。这有助于增加获得的“单体”材料的产率，并提供在纯化、浓缩和配制后用于治疗的具有合适稳定性的分子。因此，一方面，提供了多特异性抗体分子，其包含以下部分或由其组成：a)式(I)的多肽链:VH-CH1-X-V1；和b)式(II)的多肽链:VL-CL-Y-V2；其中：VH表示重链可变结构域；CH1表示重链恒定区的结构域，例如其结构域1；X表示键或接头；Y表示键或接头；V1表示dsFv、sdAb、scFv或dsscFv；VL表示轻链可变结构域；CL表示来自轻链恒定区的结构域，例如Cκ；V2表示dsFv、sdAb、scFv或dsscFv；其中V1或V2中的至少一个是dsFv或dsscFv。有利地，本公开内容的多特异性抗体分子使纯化后可见的聚集的量最小化，并使在药物浓度下构建体的制剂中的单体的量最大化，包括在储存时随时间推移保持高单体水平，例如单体可以以总蛋白质的50％、60％、70％或75％或更多，诸如80％或90％或更多，诸如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％存在。专利技术详述如本文所用的“多特异性抗体”是指如本文所述的抗体分子，其具有两个或更多个结合结构域，例如两个或三个结合结构域。在一个实施方案中，抗体构建体是三特异性抗体。本文使用的“三特异性抗体”是指具有三个抗原结合部位的抗体分子，其可以独立地结合相同或不同的抗原。在一个实例中，三特异性抗体分子结合两种不同的抗原，即两个结合位点结合相同的抗原，第三结合位点结合第二种不同的抗原。优选地，本专利技术的特异性抗体分子的三个结合位点独立地结合三种不同的抗原。在一个实施方案中，构建体是双特异性抗体。本文使用的“双特异性分子”是指具有两个抗原结合部位的分子，其可以结合相同或不同的抗原。在一个实施方案中，所有结构域都结合相同的抗原，包括结合抗原上的相同表位或结合抗原上的不同表位。在一个实施方案中，存在三个结合结构域，并且三个结合结构域中的每一个结合不同(独特)的抗原。在一个实施方案中，存在三个结合结构域，并且两个结合结构域结合相同抗原，包括结合相同抗原上的相同表位或不同表位，并且第三结合结构域结合不同(独特)抗原。本文使用的“抗原结合部位”是指分子的一部分，其包含一对可变区，特别是与靶抗原特异性相互作用的同源对。本文使用的结合结构域包括单结构域抗体，即可变区和抗原结合部位。本文所用的“特异性地”是指仅识别其所特异于的抗原的结合部位或结合结构域，或相较于对其所非特异于的抗原的亲和力具有显著更高的对其所特异于的抗原的结合亲和力(例如5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍的结合亲和力)的结合部位或结合结构域。结合亲和力可通过标准测定法例如表面等离子体共振(诸如BIAcore)来测量。在一个实施方案中，根据本公开内容的多特异性抗体分子作为分别地式(I)和(II)的重链和轻链的二聚体提供，其中VH-CH1部分与VL-CL部分一起形成功能性Fab或Fab'片段。VH表示可变结构域，例如重链可变结构域。在一个实施方案中，VH表示重链可变结构域。在一个实施方案中，VH是嵌合可变结构域，也就是说其包含源自至少两个物种的组分，例如人构架和非人CDR。在一个实施方案中，VH是人源化的。在一个实施方案中，VH是人的。VL表示可变结构域，例如轻链可变结构域。在一个实施方案中，VL表示轻链可变结构域。在一个实施方案中，VL是嵌合可变结构域，也就是说，其包含源自至少两个物种的组分，例如人构架和非人CDR。在一个实施方案中，VL是人源化的。在一个实施方案中，VH是人源化的。在一个实施方案中，VH是人的。通常VH和VL一起形成抗原结合结构域。在一个实施方案中，VH和VL形成同源对。本文使用的“同源对”是指来自单个抗体的一对可变结构域，其是在体内产生的，即从宿主分离的可变结构域的天然存在的配对。因此，同源对是VH和VL对。在一个实例中，同源对与抗原协同地结合。本文使用的“可变区”是指包含CDR和构架(特别是合适的构架)的抗体链中的区域。用于本公开内容的可变区通常衍生自抗体，其可通过本领域已知的任何方法产生。如本文所用的“衍生自”是指使用的序列或与所用序列高度相似的序列获自原始遗传物质，例如抗体的轻链或重链。本文所用的“高度相似”意指在其全长上为95％相似或更多、诸如96％、97％、98％或99％相似的氨基酸序列。用于本专利技术的可变区，如上文针对VH和VL所述的，可来自任何合适的来源，并且可以是例如完全人的或人源化的。在一个实施方案中，由VH和VL形成的结合结构域对第一抗原是特异性的。在一个实施方案中，由V1形成的结合结构域对第二抗原是特异性的。在一个实施方案中，由V2形成的结合结构域对第二或第三抗原是特异性的。在一个实施方案中，CH1结构域是来自抗体重链或其衍生物的天然存在的结构域1。在一个实施方案中，轻链中的CL片段是恒定κ序列或恒定λ序列或其衍生物。本文所用的天然存在的结构域的衍生物旨在指其中天然存在的序列中的1、2、3、4或5个氨基酸已经被替换或删除，例如以优化结构域的性质，诸如通过消除不期望的性质但其中保留了结构域的表征性特征。在一个实施方案中，在功能性Fab或Fab'片段中存在一个或多个天然或工程化的链间(即轻链和重链之间)二硫键。在一个实施方案中，“天然”二硫键存在于式(I)和(II)的多肽链中的CH1和CL之间。当CL结构域衍生自κ或λ时，形成键的半胱氨酸的天然位置在人cκ和cλ中为第214位(Kabat编号第4版1987)。CH1中形成二硫键的半胱氨酸的确切位置取决于实际使用的特定结构域。因此，例如在人γ-1中，二硫键的天然位置位于位置233(Kabat编号第4版1987)。已知其它人同种型诸如γ2、3、4、IgM和IgD的形成键的半胱氨酸的位置，例如人IgM、IgE、IgG2、IgG3、IgG4的位置127以及人IgD和IgA2B的重链的位置128。任选地，在式I和II的多肽的VH与VL之间可以存在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多特异性抗体分子，其包含以下部分或由其组成：a)式(I)的多肽链：VH‑CH1‑X‑V1；和b)式(II)的多肽链：VL‑CL‑Y‑V2；其中：VH表示重链可变结构域；CH1表示重链恒定区的结构域，例如其结构域1；X表示键或接头；Y表示键或接头；V1表示dsFv、sdAb、scFv或dsscFv；VL表示轻链可变结构域；CL表示来自轻链恒定区的结构域，例如Cκ；V2表示dsFv、sdAb、scFv或dsscFv；其中V1或V2中的至少一个是dsFv或dsscFv。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.25 GB 1411320.31.一种多特异性抗体分子，其包含以下部分或由其组成：a)式(I)的多肽链：VH-CH1-X-V1；和b)式(II)的多肽链：VL-CL-Y-V2；其中：VH表示重链可变结构域；CH1表示重链恒定区的结构域，例如其结构域1；X表示键或接头；Y表示键或接头；V1表示dsFv、sdAb、scFv或dsscFv；VL表示轻链可变结构域；CL表示来自轻链恒定区的结构域，例如Cκ；V2表示dsFv、sdAb、scFv或dsscFv；其中V1或V2中的至少一个是dsFv或dsscFv。2.权利要求1的多特异性抗体分子，其中X是接头。3.权利要求1至2的任一项的多特异性抗体分子，其中Y是接头。4.权利要求1至3的任一项的多特异性抗体分子，其中V1是dsFv，并且V2是dsFv。5.权利要求1至3的任一项的多特异性抗体分子，其中V1是dsscFv，并且V2是dsscFv。6.权利要求1至3的任一项的多特异性抗体分子，其中V1是dsscFv，并且V2是dsFv，或其中V1是dsFv，并且V2是dsscFv。7.权利要求1至3的任一项的多特异性抗体分子，其中V1不是scFv。8.权利要求1至3和7的任一项的多特异性抗体分子，其中V2不是scFv。9.权利要求1至8的任一项的多特异性抗体分子，其中V1的轻链可变结构域或重链可变结构域例如通过肽键与X连接。10.权利要求1至9的任一项的多特异性抗体分子，其中V2的轻链可变结构域或重链可变结构域例如通过肽键与Y连接。11.权利要求1至10的任一项的多特异性抗体分子，其中V1的轻链和重链可变结构域和/或V2的轻链和重链可变结构域通过两个工程化的半胱氨酸残基之间的二硫键连接。12.权利要求1至11的任一项的多特异性抗体分子，其中V1和/或V2的重...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·巴塔，E·戴夫，S·P·海伍德，D·P·汉弗莱斯，
申请(专利权)人：UCB生物制药私人有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE