一种诱导禾谷镰刀菌大量产生分生孢子的培养基及方法技术

本发明专利技术公开了绿豆粉和绿豆渣在诱导禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum Schw.)产生大量分生孢子上的应用，还公开了相应的绿豆粉培养基或绿豆渣培养基，其组成成分为：绿豆粉或绿豆渣20‑80g，琼脂粉15～25g，蒸馏水1000ml。本发明专利技术还公开了诱导禾谷镰刀菌产孢的方法。禾谷镰刀菌在本发明专利技术绿豆粉或绿豆渣培养基上产孢量大，每cm2产孢量可达107个；且能产生大量的大型分生孢子堆；其次，本发明专利技术方法简单，对培养条件要求不高，不需要额外的近紫外灯光诱导；此外，本发明专利技术培养基组分简单，原料易得，成本低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物病原真菌产孢培养基，具体涉及绿豆粉在诱导禾谷镰刀菌产孢上的用途；还涉及一种诱导禾谷镰刀菌大量产生分生孢子的培养基及方法。
技术介绍
禾谷镰刀菌(FusariumgraminearumSchw.)是世界上分布广泛的重要病原菌，其寄主范围广，能侵染小谷物禾谷类作物(包括大麦、小麦、黑麦、燕麦和黑小麦)、玉米、水稻、高粱以及多种杂草，在作物不同时期引起多种不同的病害。其中，在粮食作物中主要引起麦类赤霉病和根、茎基腐病以及玉米穗、茎腐病。禾谷镰刀菌不仅能引起多种作物病害而造成产量损失和谷物品质的下降，更为严重的是禾谷镰刀菌侵染籽粒后能产生多种对人、畜造成急性或慢性中毒的毒素，对人、畜健康造成威胁。禾谷镰刀菌腐生能力很强，在土壤中残留的麦秆、稻桩、玉米秆、豆秆、多种杂草、非禾谷类作物以及阔叶植物种子等植物残体上存活，病残体上产生的子囊孢子和分生孢子是下一个生长季的主要初侵染源。禾谷镰刀菌侵染宿主通常是通过分生孢子进行二次侵染，在自然条件下，病害的初侵染源主要来自病菌越冬后在各种残体上产生的子囊孢子，在大麦与小麦混栽地区及东北春麦区，分生孢子也可成为初侵染源。冬茬作物上，在春季温暖潮湿的天气条件下，子囊壳开始形成和发育成熟并释放出子囊孢子，孢子释放后，借助风、雨进行传播完成对冬茬作物的侵染并在病部形成大量分生孢子；在夏茬作物上，主要通过分生孢子完成对夏茬作物的侵染和危害。子囊孢子和分生孢子的产生也是病原菌遗传变异的重要原因，是微生物学研究的重点，在研究病害的发生规律、品种抗性鉴定和防治技术上，利用分生孢子定量接种是不可缺少的手段。禾谷镰刀菌在多种培养基上均以营养生长为主，不产生分生孢子，因此多数以菌丝体形式进行病原菌保存，为了菌种的较长时间保存，需要频繁转接，而菌种长期在同一培养基中连续继代培养，容易引起病原菌的变异及致病力的退化，因此掌握禾谷镰刀菌大量产生大型分生孢子的培养基及方法是进行禾谷镰刀菌鉴定、长期稳定保存，进而进行病害研究的先决条件。镰刀菌鉴定手册中通常用康乃馨叶片水琼脂培养基(CLA)进行大型分生孢子的培养，用于菌种的鉴定和低温长期保存，但是利用该培养基产孢需要近紫外灯光的诱导，而且有些菌产大型分生孢子堆的数量少，浓度达不到菌种保存和接种浓度的要求，而在病原菌接种方面，多采用绿豆汤培养液或镰刀菌液体培养液振荡培养产生分生孢子悬浮液，液体培养基培养产生的大型分生孢子形态变异较大，不适宜病原菌的鉴定和接种体的保存，而且存在产孢量低的不足，有时不能满足接种浓度要求。而通过大型分生孢子堆形成的分生孢子比在培养基上通过菌丝上单个单瓶梗产生的大型分生孢子在孢子形状和长度上更一致，适用于菌种的鉴定、保存等。经检索，目前还没有能使禾谷镰刀菌大量产生分生孢子、且以大型分生孢子堆的形式产生的培养基。
技术实现思路
针对目前培养基培养的禾谷镰刀菌分生孢子产生数量少、难以满足病原菌鉴定、菌种保存、接种需要等问题，本专利技术目的在于提供一种绿豆粉或绿豆渣在诱导禾谷镰刀菌产孢上的应用。本专利技术另一目的在于提供一种绿豆粉培养基。本专利技术第三目的在于提供上述绿豆粉培养基的制备方法。本专利技术第四目的在于提供利用上述绿豆粉培养基诱导禾谷镰刀菌产孢的方法。本专利技术第五目的在于提供一种绿豆渣培养基。实现本专利技术的技术方案如下：本专利技术提供了绿豆粉或绿豆渣在诱导禾谷镰刀菌(FusariumgraminearumSchw.)产孢上的应用。上述应用中所述的绿豆粉的粒径大小为250μm～1700μm。上述应用中所述的绿豆粉，按照如下方法制备：用料理机将新鲜绿豆打碎，过10目～60目分样筛，即得粒径大小为250μm～1700μm的绿豆粉。上述应用中所述绿豆渣的粒径大小为1～2mm。上述应用中所述的绿豆渣，按照如下方法制备：将新鲜绿豆洗净，放入水中，煮沸20min，过滤得煮熟的绿豆，加水用料理机将煮熟的绿豆打碎，即得绿豆渣。本专利技术还提供了一种绿豆粉培养基，其原料组成及其重量比例为：绿豆粉20～80g，琼脂粉15～25g，蒸馏水1000ml。上述绿豆粉培养基中所述的绿豆粉的粒径大小为250μm～1700μm。上述绿豆粉培养基中所述的绿豆粉的重量比例优选为50～80g；进一步优选为60g。上述绿豆粉培养基的制备方法，包括按照比例将绿豆粉和琼脂粉加入到蒸馏水中，搅拌均匀，分装，121℃高温灭菌20min，冷却至室温。上述绿豆粉培养基在诱导禾谷镰刀菌(FusariumgraminearumSchw.)产孢上的应用。利用上述绿豆粉培养基诱导禾谷镰刀菌产孢的方法，按照5％～7％的体积比比例将禾谷镰刀菌接种体接种到上述绿豆粉培养基上，然后在16～22℃、自然光条件下培养7～10d，用灭菌蒸馏水洗下培养皿上的大型分生孢子。上述方法中所述的禾谷镰刀菌接种体为禾谷镰刀菌孢子悬浮液；所述禾谷镰刀菌孢子悬浮液中分生孢子的浓度为5×104分生孢子/mL。上述绿豆粉培养基的使用方法，按照比例将绿豆粉、琼脂粉加入蒸馏水中，搅拌均匀，分装，121℃高温灭菌20min，冷却至室温，倒入直径8cm的平皿，每皿培养基15～20mL，培养基平板放置表面干燥后，每皿接种禾谷镰刀菌接种体1mL，涂匀。本专利技术还提供一种绿豆渣培养基：其原料组成成分及其比例为：绿豆渣20～80g，琼脂粉15～25g，蒸馏水1000ml。上述绿豆渣培养基的制备方法，包括按照比例取新鲜绿豆20～80g，洗净，放入1000ml水中，煮沸20min，过滤得到煮熟的绿豆，加100mL水用料理机打碎，得到大小为1～2mm的绿豆渣，加蒸馏水补足1000mL，再加入琼脂粉20g，搅拌均匀，分装，121℃湿热灭菌20min。上述绿豆粉培养基或绿豆渣培养基还可以在诱导黄色镰刀菌(Fusariumculmorum)或假禾谷镰刀菌(Fusariumpseudograminearum)产孢上应用。与现有的PDA、CLA培养基相比，本专利技术具有的优点和有益效果：(1)、在本专利技术绿豆粉培养基或绿豆渣培养基上禾谷镰刀菌分生孢子产孢量大，每cm2产孢量可达到107，比常用的绿豆汤固体培养基的产孢量约提高10倍，比CLA培养基的产孢量约提高1000倍；且能产生大量的大型分生孢子堆，有利于大型分生孢子的收集与试验，能够满足病原菌鉴定、菌种保存、接种等需要。(2)、本专利技术方法简单，对培养条件要求不高，不需要额外的近紫外灯光的诱导。(3)、本专利技术培养基组分简单，易购易得，成本低。(4)、与液体培养基相比，本专利技术培养基能够产生的大型分生孢子堆和大量分生孢子，易于较长时间保存，可随时为病原菌的扩繁提供接种体，而且在病原菌大量扩繁过程中，本专利技术方法较液体培养方法节省空间。(5)、本专利技术培养基对其他不易产孢镰刀菌有借鉴作用，用途广泛。附图说明图1为在绿豆粉培养基上培养的禾谷镰刀菌大型分生孢子堆的照片。图2为禾谷镰刀菌大型分生孢子堆放大5倍的照片。图3为禾谷镰刀菌大型分生孢子显微照片。具体实施方式下面以具体实施例来进一步详细说明本专利技术，但本专利技术的保护范围并不局限于此。实施例1禾谷镰刀菌在不同培养基上的产孢对比试验(一)供试禾谷镰刀菌菌株1449：为2014年从河北省石家庄赵县采集到的小麦赤霉病病样，按照植病研究法上病原真菌分离方法分离得到，初分离物经过单孢本文档来自技高网...

【技术保护点】
绿豆粉或绿豆渣在诱导禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum Schw.)产孢上的应用。

【技术特征摘要】
1.绿豆粉或绿豆渣在诱导禾谷镰刀菌(FusariumgraminearumSchw.)产孢上的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的绿豆粉的粒径大小为250μm～1700μm。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述绿豆渣的粒径大小为1～2mm。4.一种绿豆粉培养基，其特征在于其原料组成及其重量比例为：绿豆粉20～80g，琼脂粉15～25g，蒸馏水1000ml。5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于所述的绿豆粉的重量比例为50～80g。6.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于所述的绿豆粉的重量比例为60g。7.权利要求4所述的绿豆粉培养基的制备方法，其特征在于按照比例将绿豆粉和琼脂粉加入到蒸馏水中，搅...

【专利技术属性】
技术研发人员：纪莉景，孔令晓，栗秋生，王亚娇，李聪聪，
申请(专利权)人：河北省农林科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：河北;13