用于诱导或延长细胞之细胞毒性免疫应答的方法的药物技术

本发明专利技术涉及药物，其用于延长细胞之细胞毒性免疫应答的方法，所述细胞毒性免疫应答针对包含抗原之蛋白质，所述方法包括以下步骤：i)向具有针对抗原活化的T细胞的患者施用加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC‑I)呈递细胞和支持Th‑1介导的应答的佐剂，其中所述肽来自于所述包含抗原之蛋白质，从而使活化的T细胞再活化，其中步骤i)的加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC‑I)呈递细胞在针对抗原活化T细胞后0小时至14天的时间段内施用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及药物，其用于延长细胞之细胞毒性免疫应答的方法，所述细胞毒性免疫应答针对包含抗原之蛋白质，所述方法包括以下步骤：i)向具有针对抗原活化的T细胞的患者施用加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞和支持Th-1介导的应答的佐剂，其中所述肽来自于包含抗原之蛋白质，从而使活化的T细胞再活化，其中步骤i)的所述加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞在针对抗原活化T细胞后0小时至14天的时间段(timeframe)内施用。免疫系统对身体提供针对病原体和肿瘤细胞的保护。为了正常工作，它必须区分“自己”和“异己”(病原体/肿瘤)。免疫系统检测病原体(包括细菌、病毒、寄生虫、真菌和毒素)并与其斗争。为了使得区分“自己”和“异己”，所有的自身蛋白和异源蛋白(及其组分)必须通过树突细胞(dendriticcell，DC)筛选。一些病原体直接感染DC，然后可筛选其性质(无害的或危险的)。如果病原体侵入其他组织(例如，血管内皮细胞、B细胞、巨噬细胞等)，但没有侵入DC，这些组织经历程序性细胞死亡并且死细胞物质被树突细胞摄入(“抗原转移”)，然后可筛选其性质。树突细胞(以及其他细胞)包含病原体相关分子模式(pathogen-associatedmolecularpattern，PAMP)的传感器。PAMP是具有病原体特性的组分(例如，细菌的细胞壁组分，或某些病毒的双链RNA)。一旦自身或异源蛋白质直接或间接地进入DC，其被分解成片段(肽)，然后其在MHC-I和MHC-II的情况下被呈递到DC的表面上。在MHC-I环境中下肽被CD8+T细胞识别，在MHC-II环境中下肽被CD4+T细胞识别，这两者均通过该过程被活化。如果没有提供额外的信号，该T细胞活化是自限的(self-limiting)并导致T细胞耐受。如果蛋白质和所产生的肽来自于病原体，DC将病原体的PAMP识别为“危险的”，并产生多种额外的信号。这些额外的信号导致DC“成熟”(例如，表面分子CD80、CD86、CD40、CD83的上调)并且DC现在可为T细胞提供强烈的炎性共信号(inflammatoryco-signal)(PaulW.E.2012)。随着产生某些病原体(例如，寄生虫)Th2信号(例如IL-4、IL-5)，产生了其他病原体(病毒、细胞内细菌)Th1信号(例如IL-2、IL-12)。以下这些额外的信号强烈地形成对在MHC-I或MHC-II的情况下在DC上识别的肽(“抗原”)的T细胞应答：Th2信号导致产生Th2CD4+T细胞，这主要帮助B细胞产生抗体。Th1信号(例如LPS、双链RNA、CpGDNA)导致产生细胞毒性CD8+T细胞，但也诱导Th1CD4+(细胞毒性)T细胞应答。通常认为仅DC能够指导初始T细胞成为效应T细胞(初级反应，“致敏(priming)”)(PaulW.E.2012)。因此，仅DC能够致敏CD8+T细胞变为细胞毒性细胞或致敏CD4+T细胞变为辅助细胞或细胞毒性细胞。通常认为无论感染的类型和途径如何，T细胞(并且特别是CD8+T细胞)的致敏必须由DC产生(PaulW.E.2012)。存在几个DC亚群。在小鼠中，XCR1+DC专门针对死细胞物质的吸收且其在MHC-I环境中下呈递到CD8+T细胞，在人中，这些是(XCR1+)CD141+(BDCA3+)DC(vanMontfoor等，2014，Gurka等，2015)。在小鼠和人中SIRPα+DC专门针对可溶性物质的吸收且其在MHC-II环境中下呈递到CD4+T细胞(Gurka等，2015)。除了这些“常规的DC”之外，还存在皮肤DC(例如朗格汉斯细胞)、单核细胞来源的DC和浆细胞样DC(Merad等，2013)。DC亚群的功能看来均不是独特的和专有的，例如SIRPα+DC还可将抗原呈递到CD8+T细胞(Bachem等，2012)，尽管不是最优的(suboptimally)。此外，其他细胞类型(例如，巨噬细胞)可将蛋白质转移到XCR1+DC，其随后降解蛋白质并将获得的肽呈递到CD8+T细胞(Backer等，2010)。虽然XCR1+DC专门用于致敏CD8+T细胞，但是由XCR1+DC降解的任何材料也将在MHC-II环境中下被呈递，并因此还致敏CD4+T细胞(例如，Hartung等，2015)。XCR1+DC在致敏CD8+T细胞中的突出作用在遗传缺乏XCR1+DC的动物模型Batf3-KO小鼠中变得更加明显(Hildner等，2008)。设计以诱导预防性或治疗性CD8+T细胞免疫应答之现代的基于蛋白质的疫苗利用抗原加工和呈递的生物学。因为可溶性蛋白质无法高效地被XCR1+DC摄入，所以使用单克隆抗体或表面受体配体将蛋白质抗原靶向至DC表面上表达的分子(Tacken等，2011，Caminschi等，2012，Hartung等，2015)。靶向的蛋白质内化到DC中，降解，并在MCH-I和MCH-II的情况下呈递。因为这些蛋白质性疫苗(proteinaciousvaccine)不产生诱导CD8+效应T细胞所需的额外信号，(靶向)蛋白质的应用通过添加Th1“佐剂”来补充(Dubensky等，2010)。这些佐剂是纯化的病原体PAMP(例如，LPS)或模拟PAMP的化合物，例如聚肌苷酸：聚胞苷酸(聚I：C)，其模拟某些病毒的双链RNA。存在多种诱导DC的Th1应答的PAMPS及其类似物：例如在小鼠中的LPS、CpG或聚I：C或在人中的聚I：C、RIG-I激动剂、TLR8激动剂等。所有Th1佐剂的共同之处在于当与蛋白质性抗原一起应用时，其在体内有效地诱导强大的Th1应答、特别是强大的CD8+细胞毒性应答的能力。用于诱导CD8+效应T细胞的另一些疫苗方法，例如基于DNA或基于RNA的疫苗或者病毒或细菌疫苗接种系统不一定必需添加佐剂，因为它们含有在DC中诱导Th1信号所需的PAMP。这些疫苗接种系统被认为是“自佐剂的(self-adjuvanted)”。当前知识表明在同一溶液中疫苗接种抗原应当与佐剂一起施加，理想地甚至物理连接以在CD4+和CD8+T细胞中诱导有效的Th1应答(Cohn等，2014)。这种假设是基于观察到在没有佐剂时施加蛋白质抗原会导致T细胞耐受(Probst等，2005，Lischke等，2012)。某些感染(特别是病毒感染)在宿主中诱导强烈的急性CD8+T细胞应答。在过去，使用非活疫苗(non-Iifevaccine)一直难以诱导相似的应答。任何类型的基于肽/蛋白质或基于核酸的疫苗接种(含佐剂的或自佐剂的)仅诱导相当低的初级CD8+T细胞应答，将抗原特异性CD8+T细胞的频率最大限度地提高至所有CD8+T细胞的百分之几。对于基于DC的疫苗也是如此，其中在体外生成的DC在体外以多种方式加载抗原，再注射(经常反复地)到宿主中(Palucka等，2013)。这种方法是基于正确的假设，即成熟的活化DC需要致敏初始CD8+T细胞，以及基于错误的假设，即将致敏的CD8+T细胞进一步扩增并分化为细胞毒性细胞需要成熟的活化DC。出人意料地，我们已经表明，不需要这种扩增阶段DC(参见实施例3和7至10)。用基于例如腺病毒、α-病毒等的非复制病毒疫苗接种本文档来自技高网...

【技术保护点】
药物，其用于延长细胞之细胞毒性免疫应答的方法，所述细胞毒性免疫应答针对包含抗原之蛋白质，所述方法包括以下步骤：i)向具有针对抗原活化的T细胞的患者施用加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC‑I)呈递细胞和支持Th‑1介导的应答的佐剂，其中所述肽来自于所述包含抗原之蛋白质，从而使活化的T细胞再活化，其中步骤i)的加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC‑I)呈递细胞在针对抗原活化T细胞后0小时至14天的时间段内施用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.03.17 EP 14000971.31.药物，其用于延长细胞之细胞毒性免疫应答的方法，所述细胞毒性免疫应答针对包含抗原之蛋白质，所述方法包括以下步骤：i)向具有针对抗原活化的T细胞的患者施用加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞和支持Th-1介导的应答的佐剂，其中所述肽来自于所述包含抗原之蛋白质，从而使活化的T细胞再活化，其中步骤i)的加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞在针对抗原活化T细胞后0小时至14天的时间段内施用。2.根据权利要求1所述应用的药物，其中-步骤i)的加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞向所述患者施用仅一次，和/或-步骤i)的加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞全身性施用，特别是静脉内、腹膜内或通过鞘内注射施用，和/或作为在生理学上可接受的水溶液中的混悬液施用，所述水溶液优选为经缓冲的，和/或-其中步骤i)的加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞不是树突细胞，和/或-其中向所述患者施用1×106至4×108个、优选1×107至4×108个加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞。3.根据权利要求1或2所述应用的药物，其中步骤i)的加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞在针对抗原活化T细胞后0小时至14天的时间段内向所述患者施用仅一次，且在针对抗原活化的T细胞恢复至记忆状态后再施用一次或更多次，优选仅一次，更优选在针对抗原活化T细胞后3周或更长时间后施用一次或更多次，甚至更优选仅一次。4.根据权利要求1或2所述应用的药物，其中所述时间段为72小时至12天，优选5天至12天，更优选5天至9天。5.权利要求1至4中任一项所述应用的药物，其中(i)所述MHC-I呈递细胞是血细胞，尤其是外周血单个核细胞(PBMC)，例如单核细胞或淋巴细胞，和/或(ii)所述来自于所述包含抗原之蛋白质的肽的长度为8、9或10个氨基酸和/或是由MHC-I，优选由等位基因HLA-A2、HLA-A1、HLA-A3、HLA-B7、HLA-B35、HLA-A24或HLA-A30，更优选由等位基因HLA-A2呈递的肽，和/或(iii)至少一种肽包含所述抗原。6.权利要求1至5中任一项所述应用的药物，其中步骤i)的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞从所述患者获得，优选地其中从所述患者获得的步骤i)的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞在体外培养2小时至3天，更优选2小时至2天。7.权利要求1至6中任一项所述应用的药物，其中步骤i)的加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞通过以下获得：(a)在体外将至少一种I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞与所述肽孵育，或(b)应用物理、化学或生物学方法以将包含抗原之蛋白质或其包含所述抗原的片段，或者编码所述包含抗原之蛋白质或其包含所述抗原的片段的核酸引入到至少一种I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞中，对于核酸的情况，使所述至少一种细胞将所述包含抗原之蛋白质或其包含所述抗原的片段表达到至少一种I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞中，以及使所述至少一种细胞加工所述抗原并在MHC-I环境中下呈递所述肽。8.权利要求1至7中任一项所述应用的药物，其中所述患者是人。9.权利要求1至8中任一项所述应用的药物，其中延长细胞之细胞毒性免疫应答的所述方法用于预防性治疗或治疗肿瘤和/或感染，和/或其中所述患者是免疫受损的或免疫抑制的。10.权利要求1至9中任一项所述应用的药物，其中通过以下针对所述抗原活化所述T细胞：(1)向所述患者施用递送系统，所述递送系统包含(a)与抗原呈递细胞表面上的受体结合的分子，(b)与(a)的分子结合的所述包含抗原之蛋白质，并且其中在(a)的分子与所述受体结合后，(b)的蛋白质被内化并在所述抗原呈递细胞中被加工，并且包含在所述蛋白质中的所述抗原被呈递到所述抗原呈递细胞的表面上，从而活化所述患者中的T细胞，以及(2)施用支持Th-1介导的应答的另外的佐剂。11.权利要求10所述应用的药物，其中所述抗原呈递细胞选自树突细胞、巨噬细胞和B细胞。12.权利要求11所述应用的药物，其中所述抗原呈递细胞是树突细胞(DC)，其优选地选自：XCR1+(CD141+)树突细胞、SIRPα+树突细胞、单核细胞来源的树突细胞、皮肤树突细胞如郎格汉斯细胞、以及浆细胞样树突细胞(pDC)。13.权利要求1至12中任一项所述应用的药物，其中(i)支持Th-1介导的应答的佐剂选自：RIG-I激动剂；合成的或重组的TLR配体，特别是TLR8激动剂如瑞喹莫德(R848)，或者TLR3激动剂如聚ICLC和聚肌苷酸：聚胞苷酸(聚I：C)；Montanide，如ISA51、ISA720；皂苷，如Quil-A、ISCOM、QS-21、AS02和AS01；聚肌苷酸：聚胞苷酸(聚I：C)、脂多糖(LPS)和CpG寡脱氧核苷酸，优选地所述支持Th-1介导的应答的佐剂选自RIG-I激动剂，TLR8激动剂如瑞喹莫德(R848)，以及TLR3激动剂如聚ICLC和聚肌苷酸：聚胞苷酸(聚I：C)，和/或(ii)所述支持Th-1介导的应答的佐剂在施用所述加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞之前、同时或之后施用，优选地，所述支持Th-1介导的应答的佐剂在施用所述加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞之前1天和之后3天的时间段内施用，更优选地，所述支持Th-1介导的应答的佐剂在施用所述加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞(a)同一天或(b)之后1天至3天的时间段内施用，甚至更优选地，所述支持Th-1介导的应答的佐剂在施用所述加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞的同一天施用，和/或(iii)所述支持Th-1介导的应答的佐剂与所述加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞作为单药物组合物施用，或者与所述加载肽的I类主要组织相容性复合体(MHC-I)呈递细胞在空间上分开施用。14.权利要求10至13中任一项所述应用的药物，其中(i)所述支持Th-1介导的应答的另外的佐剂选自：RIG-I激动剂；合成的或重组的TLR配体，特别是TLR8激动剂如瑞喹莫德(R848)，或TLR3激动剂如聚ICLC和聚肌苷酸：聚胞苷酸(聚I：C)；Montanide，如ISA51、ISA720；皂苷，如Quil-A、ISCOM、QS-21、AS02和AS01；聚肌苷酸：聚胞苷酸(聚I：C)、脂多糖(LPS)和CpG寡脱氧核苷酸，优选地，所述支持Th-1介导的应答的佐剂选自：RIG-I激动剂，TLR8激动剂如瑞喹莫德(R848)，以及TLR3激动剂如聚IC...

【专利技术属性】
技术研发人员：理查德·克罗切克，
申请(专利权)人：德意志联邦共和国代表主席罗伯特·科赫研究所，
类型：发明
国别省市：德国;DE