本发明专利技术涉及用于稳定β淀粉酶的水溶液的方法，具体通过使用甘油、山梨酸钾和碳酸钠进行。所述添加剂的合剂随时间推移在维持β淀粉酶的酶活性方面特别有效。本发明专利技术的另一目的由使用所述合剂用于维持β淀粉酶的酶活性的特定功能组成。本发明专利技术的另一个目的是提供包含上述合剂的β淀粉酶的水溶液。本发明专利技术的最终目的由以下组成：使用所述β淀粉酶水溶液，用于在面包制作中，在麦芽工业中，作为食品添加剂，作为消化剂，用于增甜剂生产，在药学中，并且最后是用于麦芽糖和富含麦芽糖的糖浆的生产。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及一种用于制造β淀粉酶的水溶液(尤其是通过使用甘油，山梨酸钾和碳酸钠)的方法。添加剂的这种合剂证明具有目的在于维持β淀粉酶随时间的酶活性的特别高的性能。本专利技术的另一个主题在于具有维持β淀粉酶的酶活性的特定功能的所述合剂的用途。本专利技术的另一个主题由包含上述合剂的β淀粉酶的水溶液组成。本专利技术的最后主题在于β淀粉酶的所述水溶液在面包制作中、在麦芽工业中，作为食品添加剂，作为消化剂，用于生产增甜剂，在药学中，并且最后是用于生产麦芽糖和富含麦芽糖的糖浆的用途。β淀粉酶是从α1→4连接的葡萄糖聚合物或低聚物的非还原β端释放麦芽糖单元的外水解酶，该反应在遇到的第一个α1→6分支点停止。在发芽(谷粒的人工萌发)期间，“糖化力”(对应于α淀粉酶、β淀粉酶、α葡糖苷酶和脱支酶的组合活性)的主要组分，从这种酶合剂(cocktail)中分离的β淀粉酶活性对于生产麦芽糖或产生自淀粉的其他可发酵糖而言是必需的。因此，单独的β淀粉酶的糖化活性用于大量的应用中：在面包制作中，在麦芽工业中，作为食品添加剂，或甚至作为消化剂，用于生产增甜剂，在药学中用于生产疫苗，并且最后是用于生产麦芽糖和富含麦芽糖的糖浆(麦芽糖醇的前体和麦芽糖醇糖浆)。存在许多用于制造β淀粉酶的方法。因此，已知的是未萌发的大麦、黑麦或小麦的谷粒都是用于大规模商业制备β淀粉酶的生物材料的选择。此外，本领域的技术人员已知，可以从未萌发的大麦、小麦或黑麦谷粒中提取的一半β淀粉酶可以容易地通过用水和盐溶液提取以游离酶的形式获得。另一半部分处于“结合”形式，对于它的提取需要添加还原剂或蛋白水解酶。不能被直接提取的另一部分的β淀粉酶，称为“潜伏”的，也已经被描述：需要洗涤剂用来从谷粒中提取它。此外，取决于目标应用，将描述于现有技术中的用于提取β淀粉酶的方法进行了调整。在此方面，本申请人在申请EP2414379中已经研发并保护了一种用于生产β淀粉酶的原创方法，在这个意义上而言，它是依靠一种迄今为止几乎没有利用的起始原料：“可溶部分”。后者之前唯一被用作发酵中的氮源，并且被用作家畜的营养饲料，只要所述的部分富含纤维。此类可溶部分是在湿法提取淀粉植物组分期间产生的，这些淀粉植物是诸如玉米、马铃薯、甘薯、小麦、水稻、豌豆、蚕豆、马蚕豆、木薯、高粱、魔芋、黑麦、荞麦以及大麦。在提取期间产生的称为“贵重的”组分尤其是淀粉、蛋白质或其他纤维。从一方面来说，“可溶部分”表示“非贵重的”成分：这些是产自所述提取的液体残余物，尽管这些残余物仍可以包含痕量的罕见不可溶物质，并且包含不同且多变的颗粒和胶体。作为申请EP2414379的主题的该方法是基于最初选择将要被处理的可溶部分，然后基于通过微滤进行澄清的一个步骤，并且最后基于通过超滤进行纯化的一个步骤。在这种情况下，证明了所获得的β淀粉酶非常好地适用于麦芽糖浆的制备，就像根据现有技术根据多种技术生产的β淀粉酶，但是使用更复杂并且更昂贵的方法。在此之后，申请人还通过专利申请FR2994440和法国专利申请号1356022保护了对这种方法的改进，在本申请的提交日期尚未公布。这些改进是尤其基于在微滤步骤期间使用蛋白酶，这使可能非常大地减少微滤膜的堵塞，并且因此在超滤步骤期间增加洗涤前的生产时间，并且也基于在超滤步骤期间使用果胶酶，这使可能限制超滤膜的堵塞，以减少在这个步骤结束时渗余物的粘度，同时增加在β淀粉酶中的其丰度。现在，在已经被提到的应用中使用之前，包含浓缩形式的β淀粉酶的超滤渗余物能够被保存数周，或甚至数月。然后，似乎其酶活性随时间减小。可回想的是，酶的活性是通过定义每单位时间并且在酶的最佳操作条件(温度，pH、等)下转化的底物(或形成的产物)的量。因此这个值量化了酶的有效性。常规地，酶活性是通过确定另一参数，糖化活性来测量的。后者表示为糖化力的度数(°DP)，定义为当在20℃下将所述样品置于100ml的底物中持续1h时，足以还原5ml的费林液(Fehling’ssolution)的包含在0.1ml按重量计5％酶制剂的样品溶液中的酶的量。目前已知有多个文件描述用于获得β淀粉酶的方法，以从其酶活性的角度，改进其稳定性。文件CN102965358披露了用于通过沉淀、然后排水、澄清和超滤从大豆获得β淀粉酶的方法。所述方法在沉淀步骤中使用氯化钙和硫酸的任选的盐。文件CN102399763描述了从糠生产β淀粉酶，其中添加氯化钙和磷酸氢钠，然后在山梨糖醇和山梨酸钾存在下浓缩并且稳定化，之后灭菌。文件CN101544967披露了用于通过沉淀、分离和离心，然后建议添加氯化钙、正磷酸、硅藻土和甘油，制造β淀粉酶的方法。文件CN1225943描述了用于制备β淀粉酶的方法，该方法包括超滤、浓缩和沉淀大豆粉的提取物的步骤，沉淀之前是添加硫酸钠并且调节pH在3.6和5之间。文件US2496261描述了用于从甘薯获得β淀粉酶的方法，它包括在硫酸铵存在下沉淀的步骤，然后用盐酸酸化。文件US4024000描述了用于制备β淀粉酶的方法，它使用选自氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化钡和氢氧化铝和它们的盐的二价或三价离子，并且调节pH在4.5和8之间的范围内。然而，应该指出的是，这些解决方案中没有一个使可能获得水溶液的形式的β淀粉酶的制剂，从其酶活性的角度来看，该制剂随时间推移是足够稳定的，尤其经数周的时段，并且更具体为至少70天。在追求其研究中，申请人已经成功地证明，只有添加剂的非常具体的选择，才使可能实现这样的目标。添加剂的这种合剂由山梨酸钾，甘油和碳酸钠组成。因此，本专利技术的第一主题由用于稳定获得自淀粉植物的可溶部分的β淀粉酶的水溶液的方法组成，该方法包括将以下项引入所述β淀粉酶的水溶液中的至少一个步骤：a)山梨酸钾；b)甘油；以及c)碳酸钠。有利地，将山梨酸钾、甘油和碳酸钠按以下比例引入所述β淀粉酶的水溶液：a)从0.05％至0.5％，优先从0.1％至0.3％，以及非常优先大约0.2％山梨酸钾；b)从30％至50％，优先从35％至45％，以及非常优先大约40％甘油；c)从0.05％至0.5％，优先从0.1％至0.3％，以及非常优先大约0.2％碳酸钠；这些％表示为按相对于所述水溶液的总重量计，每种成分的干重的％。有利地，相对于所述水溶液的总重量，β淀粉酶的水溶液具有按干重计，5％和20％之间，优先10％和20％之间，非常优先等于大约15％的β淀粉酶的含量。山梨酸钾、甘油和碳酸钠优先处于水溶液的形式。本领域的技术人员将知道，如何相对于产物的溶解度，调整这些溶液的固体提取物，而且以便限制这些溶液的粘度，并且以便使其易于处理，并且尤其是可泵送。根据一个实施例，通过以下步骤获得β淀粉酶的水溶液，这些步骤在于：-提供淀粉植物的可溶部分；-对所述可溶部分进行微滤步骤，以获得微滤渗透物；-对该微滤渗透物进行超滤步骤，以获得超滤渗余物。因此，在此实施例中，向构成所述β淀粉酶的水溶液的所述超滤渗余物中引入了山梨酸钾、甘油和碳酸钠。按一个更详细的方式，在根据本专利技术的方法的上游，适合选择待处理的淀粉植物的可溶部分。这一选择尤其是从下组进行的，该组由以下项的可溶部分组成：玉米、马铃薯、甘薯、小麦、水稻、豌豆、蚕豆、马蚕豆、木薯、高粱、魔芋、黑麦、荞麦以及大麦。淀粉植物的可溶部分的微滤尤其具本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于稳定获得自淀粉植物的可溶部分的β淀粉酶的水溶液的方法，该方法包括将以下项引入所述β淀粉酶的水溶液中的至少一个步骤：a)山梨酸钾；b)甘油；c)碳酸钠。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.16 FR 14554661.一种用于稳定获得自淀粉植物的可溶部分的β淀粉酶的水溶液的方法，该方法包括将以下项引入所述β淀粉酶的水溶液中的至少一个步骤：a)山梨酸钾；b)甘油；c)碳酸钠。2.如以上权利要求所述的方法，其特征在于将以下项引入所述β淀粉酶的水溶液：a)从0.05％至0.5％，优先从0.1％至0.3％，以及非常优先大约0.2％山梨酸钾；b)从30％至50％，优先从35％至45％，以及非常优先大约40％甘油；c)从0.05％至0.5％，优先从0.1％至0.3％，以及非常优先大约0.2％碳酸钠；这些％表示为按相对于所述水溶液的总重量计，每种成分的干重的％。3.如以上权利要求之一所述的方法，其特征在于该水溶液具有按干重计，5％和20％之间的，优先10％和20％之间的，非常优先等于大约15％的其总重量的β淀粉酶的含量。4.如以上权利要求之一所述的方法，其特征在于山梨酸钾、甘油和碳酸钠处于水溶液的形式。5.如以上权利要求所述的方法，其中通过以下步骤获得β淀粉酶的水溶液，...
【专利技术属性】
技术研发人员：V·库尔布斯，A·勒科克，P·迪弗洛，
申请(专利权)人：罗盖特公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR
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