一种肾上腺醛固酮腺瘤相关下调lncRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了肾上腺醛固酮腺瘤相关下调lncRNA及其应用，发明专利技术人通过实验发现了与肾上腺醛固酮腺瘤相关下调lncRNA。通过定量lncRNA的表达量，可以很好地辅助APA的诊断，为部分由于原发性醛固酮增多症（PA）引起的难治性高血压患者的早期诊断，尽早手术，完全治愈提供诊断依据，有效指导高血压的治疗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种分子诊断标志，特别涉及一种肾上腺醛固酮腺瘤相关下调lncRNA及其应用。
技术介绍
近年来，一些研究报道原发性醛固酮增多症(PA)在高血压人群中的患病率为5％～15％，在难治性高血压患者中占17％～20％[MulateroP,DluhyRG,GiacchettiG,BoscaroM,VeglioF,StewartPM.Diagnosisofprimaryaldosteronism:fromscreeningtosubtypedifferentiation.TrendsEndocrinolMetab.2005；16:114–119.]。若按该病占高血压人口的6％计算，我国1.6亿高血压患者中就有960万系PA所致。因此，这已经成为动摇原发性高血压患病比例和诊断的重大问题。然而，目前我国每年证实的PA患者估计不到1万例，如果这么多PA因漏诊被归于原发性高血压，会贻误病情，失去治疗机会，浪费医疗资源。肾上腺醛固酮腺瘤(Aldosterone-producingadenoma，APA)是原醛症(PA)中最常见的亚型之一(占PA的40～50％)，也是继发性高血压最常见的原因。其以高血压，低血钾和代谢性碱中毒为主要临床表现，目前多采取手术治疗[MulateroP,VerhovezA,MorelloF,VeglioF.Diagnosisandtreatmentoflow-reninhypertension.ClinEndocrinol.2007；67:324–334.]。绝大多数早期APA患者通过手术治疗可以达到治愈的效果。然而，由于醛固酮瘤起病隐匿，进展缓慢；目前导致醛固酮高分泌的机制尚不十分清楚，使得原醛症的诊断程序繁锁，诊断方法复杂，诊断周期较长，现有的诊断手段下，小的肿瘤早期病例很容易漏诊，造成很多患者治疗效果不佳，血压控制不理想[MilliezP,GirerdX,PlouinPF,BlacherJ,SafarME,MouradJJ.Evidenceforanincreasedrateofcardiovasculareventsinpatientswithprimaryaldosteronism.JAmCollCardiol.2005；45:1243–1248.]。近年来许多研究试图从基因方面寻找APA的发病机制。目前已有的研究主要集中于对基因表达差异的研究、对基因突变的检测以及基因的多态性分析等。近些年，在对APA基因表达差异的研究中，通过表达谱芯片，检测醛固酮瘤组织中基因的差异表达，已报道的差异表达基因有：编码醛固酮合成酶相关的基因CYP11B2，KCNJ5，TDGF1，CACNA1D，CYP17A1，CYB5A,ATR,PCP4，AKR1C3等,这些基因的差异表达可能对肾上腺醛固酮瘤的发生、发展起着关键作用[TaoWang,FumitoshiSatoh,RyoMorimoto,YasuhiroNakamura.Geneexpressionprofilesinaldosterone-producingadenomasandadjacentadrenalglands,EuropeanJournalofEndocrinology(2011)164613–619.]。近10年来，随着人们对非编码RNA(non-coding，RNA，即ncRNA)的认识，发现基因组中非编码蛋白质区段对基因的表达调控发挥着重要的作用。长片段非编码RNA(lncRNA)是一类转录本长度超过200nt的RNA分子，不具有编码蛋白质功能，但在基因表达调控方面发挥着十分重要的作用。大量的研究表明，lncRNA数量庞大，且调控的方式多种多样，并在剂量补偿效应(Dosagecompensationeffect)、表观遗传调控、细胞周期调控和细胞分化调控等众多生命活动中发挥重要作用[M.C.Tsai,R.C.Spitale,H.Y.Chang,LongintergenicnoncodingRNAs:newlinksincancerprogression,CancerRes.71(2011)3–7.]。目前对lncRNA的致病机制还知之甚少，但大量临床观察和实验证据显示，lncRNA可能通过基因印记(Geneticimprinting)、染色质重塑、细胞周期调控、剪接调控、mRNA降解和翻译调控等方式，参与物种进化、胚胎发育、干细胞的维持、细胞的增殖分化以及肿瘤的发生等多种重要的调控过程。许多学者通过综合已经注释其功能的lncRNA数据和实验室收集的转录组测序，即RNA测序(RNAsequencing，RNA-seq)数据，发现4662种lncRNA中的大多数具有高度的组织特异性，说明它们在疾病诊断上具有较好的应用前景。研究APA的发病机制，发现新的、适用于高危人群筛查，具有较高特异性和灵敏性的诊断方法是提高PA确诊率，尤其早期确诊的重要途径。研发新的治疗药物，是控制患者症状和血压，提高生存质量的重要手段。现有的研究表明，lncRNA与一些复杂疾病有关。早在20世纪90年代H19就被发现与癌症有关，它是第一个被发现与癌症相关的RNA，也是第一个被发现的作为印痕基因的非编码转录本产物，它既有抑癌的作用又起促癌生成的作用。此后，人们陆续发现与冠心病相关的lncRNA(ANRIL)，还发现其他一些与癌症有关的lncRNA，如PCGEM1，MEG3，p15AS和HOTAIR等，甚至发现一些lncRNA如PCA3，MALAT1还是一些肿瘤特异性的生物标记物[Yu,X.；Li,Z.Longnon-codingRNAHOTAIR:Anoveloncogene(Review).Mol.Med.Rep.2015,12,5611–5618.]。然而，肾上腺醛固酮瘤(APA)的发病机制仍然处于研究探索阶段，至于lncRNA是否参与了APA的发生、发展过程及其调控机制尚未有研究涉及。因此，探讨APA发生发展过程中lncRNA的表达谱变化，有助于：(1)发现可能的特异性APA相关lncRNA分子标记物，便于PA的早期诊断。(2)发现可能与APA发生发展相关的重要调控因子，为进一步揭示PA发生发展的机制，探究APA治疗的新靶点提供理论依据。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供肾上腺醛固酮腺瘤相关下调lncRNA及其应用。专利技术人选取6例经病史、临床表现、生化检查、影像学检查和术后病理检查明确诊断为肾上腺醛固酮瘤病例作为实验组，另选取肾癌根治术中切取的肾上腺，经病理证实为正常肾上腺组织的6例病例作为对照组。入选的12例标本每例分为三份，一份用4％多聚甲醛固定，行病理HE常规染色，一份用2.5％电镜级戊二醛固定，行透射电镜观察，一份在手术切下标本后即刻放入液氮中冷冻、保存，为行DNA、RNA和蛋白质抽提备用。之后利用基因表达谱芯片AgilentG2565CAMicroarrayScanner对标本中的3例肾上腺醛固酮瘤和3例正常肾上腺组织进行扫描，检测醛固酮瘤和正常肾上腺组织中差异表达的lncRNA和mRNA。芯片图像的采集和数据分析标准为FC≥2，P≤0.01为具有统计学差异标准。进一步，对芯片数据在数据库里的信息进行重新注释、分析。最后挑选出感兴趣本文档来自技高网...

【技术保护点】
肾上腺醛固酮腺瘤相关lncRNA，具体为XLOC_003965、ENST00000320322、XLOC_003403、ENST00000514661和XLOC_006606。

【技术特征摘要】
1.肾上腺醛固酮腺瘤相关lncRNA，具体为XLOC_003965、ENST00000320322、XLOC_003403、ENST00000514661和XLOC_006606。2.定量肾上腺醛固酮腺瘤相关lncRNA表达量的试剂在制备肾上腺醛固酮腺瘤诊断试剂中应用，其特征在于：肾上腺醛固酮腺瘤相关lncRNA为权利要求1中的至少一条。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：定量肾上腺醛固酮腺瘤相关lncRNA表达量的试剂为其PCR试剂、定量芯片。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：XLOC_0...

【专利技术属性】
技术研发人员：张利朝，陈英华，胡卫列，
申请(专利权)人：广州军区广州总医院，
类型：发明
国别省市：广东;44