高亲和力NY-ESO T细胞受体制造技术

本发明专利技术提供了一种T细胞受体(TCR)，其具有结合SLLMWITQC‑HLA A2复合物的特性；并且所述TCR对所述SLLMWITQC‑HLA A2复合物的结合亲和力是野生型TCR对SLLMWITQC‑HLA A2复合物的结合亲和力的至少10倍。本发明专利技术还提供了此类TCR与治疗剂的融合分子。此类TCR可以单独使用，也可与治疗剂联用，以靶向呈递SLLMWITQC‑HLA A2复合物肿瘤细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，更具体地涉及能够识别衍生自NY-ESO-1蛋白多肽的T细胞受体(Tcellreceptor,TCR)。本专利技术还涉及所述受体的制备和用途。
技术介绍
仅仅有两种类型的分子能够以特异性的方式识别抗原。其中一种是免疫球蛋白或抗体；另一种是T细胞受体(TCR)，它是由α链/β链或者γ链/δ链以异二聚体形式存在的细胞膜表面的糖蛋白。免疫系统的TCR总谱的组成是在胸腺中通过V(D)J重组，然后进行阳性和阴性选择而产生的。在外周环境中，TCR介导了T细胞对主组织相容性复合体-肽复合物(pMHC)的特异性识别，因此其对免疫系统的细胞免疫功能是至关重要的。TCR是呈递在主组织相容性复合体(MHC)上的特异性抗原肽的唯一受体，这种外源肽或内源肽可能会是细胞出现异常的唯一迹象。在免疫系统中，通过抗原特异性的TCR与pMHC复合物的结合引发T细胞与抗原呈递细胞(APC)直接的物理接触，然后T细胞及APC两者的其他细胞膜表面分子就发生相互作用，这就引起了一系列后续的细胞信号传递和其他生理反应，从而使得不同抗原特异性的T细胞对其靶细胞发挥免疫效应。与TCR相对应的MHCI类和II类分子配体也是免疫球蛋白超家族的蛋白质但对于抗原的呈递具有特异性，不同的个体有不同的MHC，从而能呈递一种蛋白抗原中不同的短肽到各自的APC细胞表面。人类的MHC通常称为HLA基因或HLA复合体。短肽SLLMWITQC源自于被多种肿瘤细胞表达的NY-ESO-1蛋白(Chenetal.,(1997)PNASUSA941914-1918)。肿瘤细胞的Ⅰ型HLA分子呈递包括SLLMWITQC在内的源自于NY-ESO-1的短肽。因此，SLLMWITQC-HLAA2复合物提供了一种TCR可靶向肿瘤细胞的标记。能够结合SLLMWITQC-HLAA2复合物的TCR对肿瘤的治疗具有很高的应用价值。例如，能够靶向该肿瘤细胞标记的TCR可用于将细胞毒性剂或免疫刺激剂递送到靶细胞，或被转化入T细胞，使表达该TCR的T细胞能够破坏肿瘤细胞，以便在被称为过继免疫治疗的治疗过程中给予患者。对于前一目的，理想的TCR是具有较高的亲和力的，从而使该TCR能够长期驻留在所靶向的细胞上面。对于后一目的，则优选使用中等亲和力的TCR。因此，本领域技术人员致力于开发可用于满足不同目的的靶向肿瘤细胞标记的TCR。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种对SLLMWITQC-HLAA2复合物具有较高亲和力的TCR。本专利技术的再一目的是提供一种上述类型TCR的制备方法及上述类型TCR的用途。本专利技术的第一方面，提供了一种T细胞受体(TCR)，其具有结合SLLMWITQC-HLAA2复合物的活性。在本专利技术的一个较佳地实施方式中，根据本专利技术的TCR受体，包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRα链可变域包含3个CDR区，所述TCRα链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1α：ATGYPSCDR2α：ATKADDKCDR3α：ALTLNNAGNMLT，并且含有至少一个下列突变：突变前的残基突变后的残基CDR2α的第3位KA、R、M或TCDR2α的第4位APCDR2α的第5位DGCDR2α的第6位DQ或ECDR2α的第7位KT、V、R或ICDR3α的第2位LRCDR3α的第7位ASCDR3α的第8位GACDR3α的第9位NS或GCDR3α的第10位MS、P、H或FCDR3α的第12位TI在另一优选例中，所述TCRβ链可变域包含3个CDR区，所述TCRβ链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1β：SNHLYCDR2β：FYNNEICDR3β：ASLDPRAGTDTQY，并且含有至少一个下列突变：突变前的残基突变后的残基CDR1β的第1位SP、H或LCDR1β的第2位NGCDR1β的第3位HS或ACDR1β的第4位LI、M或PCDR1β的第5位YA或GCDR3β的第4位DGCDR3β的第5位PF或ICDR3β的第6位RLCDR3β的第7位AH或PCDR3β的第8位GICDR3β的第9位TY。在另一优选例中，所述TCRα链CDR区的突变个数可以为1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或11个。在另一优选例中，所述TCRβ链CDR区的突变个数可以为1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或11个。在另一优选例中，所述TCR包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRβ链可变域包含CDR1β、CDR2β和CDR3β，其中所述CDR2β包含序列：FYNNEI。在另一优选例中，所述CDR3β包含序列：ASL[3βX1][3βX2][3βX3][3βX4][3βX5][3βX6]DTQY,其中，[3βX1]、[3βX2]、[3βX3]、[3βX4]、[3βX5]、和[3βX6]各独立地选自任意的天然氨基酸残基。在另一优选例中，所述[3βX1]为G。在另一优选例中，所述[3βX2]为F或I。在另一优选例中，所述[3βX3]为L。在另一优选例中，所述[3βX4]为H或P。在另一优选例中，所述[3βX5]为I。在另一优选例中，所述[3βX6]为Y。在另一优选例中，所述CDR3β包含选自下组的序列：ASLDFLHIYDTQY、ASLDFLHIYDTQY、ASLDPRAGYDTQY和ASLDPRAGYDTQY。在另一优选例中，所述CDR1β包含序列:IA。在另一优选例中，所述CDR1β包含序列：[1βX1][1βX2][1βX3],其中，[1βX1]、[1βX2]、[1βX3]独立地选自任意的天然氨基酸残基。在另一优选例中，所述[1βX1]为P、H或L。在另一优选例中，所述[1βX2]为G或N。在另一优选例中，所述[1βX3]为S或A。在另一优选例中，所述CDR1β包含选自下组的序列：PGSIA、SNHLY、PGAIA、PGAIG、SGSIA、SGSPA、HGSIA、和LNSMG。在另一优选例中，根据本专利技术的T细胞受体(TCR)，包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRα链可变域包括CDR1α、CDR2α、和CDR3α。在另一优选例中，所述CDR1α包含序列:ATGYPS。在另一优选例中，所述CDR3α包含序列：A[3αX1]TLNN[3αX2][3αX3][3αX4][3αX5]L[3αX6],其中，[3αX1]、[3αX2]、[3αX3]、[3αX4]、[3αX5]、[3αX6]独立地选自任意的天然氨基酸残基。在另一优选例中，所述[3αX1]为R或L。在另一优选例中，所述[3αX2]为S或A。在另一优选例中，所述[3αX3]为A或G。在另一优选例中，所述[3αX4]为S、G或N。在另一优选例中，所述[3αX5]为S、P、H、F或M。在另一优选例中，所述[3αX6]为I或T。在另一优选例中，所述CDR3α包含选自下组的序列：ALTLNNSGSFLT、ALTLNNAGNMLT、ALTLNNAGGPLI、ALTLNNSASFLT、ALTLNNSASSLT、ALTLNNSGGHLT、ALTLNNSGNFLT、ARTLNNAGNMLT、和ARTLNNSGNFLT。在另一优选例中，所述CDR2α包含序列：AT[2αX1][2α本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种T细胞受体(TCR)，其特征在于，其具有结合SLLMWITQC‑HLA A2复合物的活性，并且所述T细胞受体包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRα链可变域包含3个CDR区，所述TCRα链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1α：ATGYPSCDR2α：ATKADDKCDR3α：ALTLNNAGNMLT，并且含有至少一个下列突变：突变前的残基突变后的残基CDR2α的第3位KA、R、M或TCDR2α的第4位APCDR2α的第5位DGCDR2α的第6位DQ或ECDR2α的第7位KT、V、R或ICDR3α的第2位LRCDR3α的第7位ASCDR3α的第8位GACDR3α的第9位NS或GCDR3α的第10位MS、P、H或FCDR3α的第12位TI和/或，所述TCRβ链可变域包含3个CDR区，所述TCRβ链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1β：SNHLYCDR2β：FYNNEICDR3β：ASLDPRAGTDTQY，并且含有至少一个下列突变：优选地，所述TCR具有选自下组的CDR：

【技术特征摘要】
2015.10.19 CN 20151067984291.一种T细胞受体(TCR)，其特征在于，其具有结合SLLMWITQC-HLAA2复合物的活性，并且所述T细胞受体包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRα链可变域包含3个CDR区，所述TCRα链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1α：ATGYPSCDR2α：ATKADDKCDR3α：ALTLNNAGNMLT，并且含有至少一个下列突变：突变前的残基突变后的残基CDR2α的第3位KA、R、M或TCDR2α的第4位APCDR2α的第5位DGCDR2α的第6位DQ或ECDR2α的第7位KT、V、R或ICDR3α的第2位LRCDR3α的第7位ASCDR3α的第8位GACDR3α的第9位NS或GCDR3α的第10位MS、P、H或FCDR3α的第12位TI和/或，所述TCRβ链可变域包含3个CDR区，所述TCRβ链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1β：SNHLYCDR2β：FYNNEICDR3β：ASLDPRAGTDTQY，并且含有至少一个下列突变：优选地，所述TCR具有选自下组的CDR：2.一种T细胞受体(TCR)，其具有结合SLLMWITQC-HLAA2复合物的活性，并包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，其特征在于，所述TCR在SEQIDNO：40所示的α链可变域中发生突变，所述突变的氨基酸残基位点包括52K、53A、54D、55D、56K、92L、97A、98G、99N、100M或102T中的一个或多个，其中，氨基酸残基编号采用SEQIDNO:40所示的编号；和/或所述TCR在SEQIDNO：41所示的β链可变域中发生突变，所述突变的氨基酸残基位点包括27S、28N、29H、30L、31Y、96D、97P、98R、99A、100G或101T中的一个或多个，其中，氨基酸残基编号采用SEQIDNO:41所示的编号；优选地，突变后的所述TCRα链可变域包括选自下组的一个或多个氨基酸残基：52A、52R、52M或52T；53P；54G；55Q或...

【专利技术属性】
技术研发人员：李懿，李小林，
申请(专利权)人：广州市香雪制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44