一种利用膜分离‑电渗析技术制备大豆降压肽的方法技术

一种利用膜分离‑电渗析技术制备大豆降压肽的方法，该方法包括以下步骤：(1)大豆蛋白水解物的制备：将大豆分离蛋白置于酶反应器中，加入适量蒸馏水搅拌混匀，调节温度和pH后进行酶解，酶解后灭酶、离心分离得到大豆蛋白水解物；(2)大豆降压肽的分离：将蛋白水解物通过中性超滤膜，超滤后得到粗水解物抑制肽(ACE)；(3)电渗析：电渗析仪的设计应用中KCl离子浓度为0.5‑1.0g/L，在KCl(1)中收集分离得到带负电荷的大豆降压肽,在KCl(2)中收集分离得到带正电荷的大豆降压肽，使降压肽达到分离的目的，该技术将膜分离和电渗析结合起来，对将实现带正电荷和带负电荷的降压肽的大规模分离，提高对目标产物的选择性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品加工技术，主要涉及一种利用膜分离-电渗析技术制备大豆降压肽的方法。
技术介绍
为了获得高纯度特殊功能的活性肽，目前最好的方法是采用现代色谱技术对水解物进行逐步分离，而这种分离方法虽然最终能够获得目标活性肽，但是所得到的产量往往都是微克级，并且需要花费大量的时间和支付购买色谱柱相关耗材带来的经济成本，难以实现对生物活性肽的规模化分离。另一方面，单独应用压力驱动的膜分离技术虽然可以大规模分离蛋白质水解物，但是由于其较低的选择性，往往只能分离分子量差异较大的活性肽和氨基酸，对于生物活性好，而分子量比较接近的活性肽的有效富集效果相对较差。而且高通量的膜分离会带来膜包的严重污染，影响分离效果。与其他分离技术相比，膜分离-电渗析技术可以根据目标产物的等电点和分子量，选择、设定合适的外加电场、分离液的pH值和超滤膜，并且本专利技术通过设计不同浓度梯度的KCl分离液对大豆降压肽进行粗分的同时分离出带正电荷和带负电荷的降压肽，实现对目标产物的选择性、大规模分离。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种利用膜分离-电渗析技术制备大豆降压肽的方法。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：一种利用膜分离-电渗析技术制备大豆降压肽的方法，该方法包括以下步骤：(1)大豆蛋白水解物的制备：将大豆分离蛋白置于酶反应器中，加入适量蒸馏水搅拌混匀，进行预热处理，再将温度调到55℃，调节pH为8.5，加入底物浓度为4％的Alcalase蛋白酶水解4h，反应过程中保持体系pH不变，水解结束后，沸水浴灭酶10min，冷却到室温后在3000g的条件下离心15min取上清液，得到大豆蛋白水解物；(2)大豆降压肽的分离：将蛋白水解物通过中性超滤膜，超滤后得到粗水解物-抑制肽(ACE)；(3)电渗析：将电渗析仪的直流电源发生器的电压和电流分别设置为20V、0.17A，通过阴离子交换膜(AXM)和阳离子交换膜(CXM)同时分离获得带正负电荷的降压肽。大豆分离蛋白置于酶反应器中的浓度为8％(w/v)，在90℃水浴条件下热处理10min。酶解温度为55℃，酶解pH为8.5，酶解时间4h。蛋白水解物通过中性超滤膜为1kDa，使相对分子质量小于1kDa的多数降压肽通过。膜分离-电渗析的回收池装有15-20g/LNaCl溶液，起到缓冲离子交换的作用，在电场作用下，通过超滤膜的带负电荷和带正电荷的降压肽分别在KCl(1)和KCl(2)中收集。电渗析仪的设计应用中KCl离子浓度为0.5-1.0g/L，在KCl(1)中收集分离得到带负电荷的大豆降压肽,其相对分子质量的范围主要在200-300之间，在KCl(2)中收集分离得到带正电荷的大豆降压肽，相对分子质量的范围主要在400-500之间；膜分离-电渗析技术(EDUF)可用于分离提纯大豆蛋白源降血压肽，具有较好的选择性和分离效果，且操作方便设备简单。本方法可用于分离提纯大豆蛋白源降血压肽，具有较好的选择性和分离效果，操作方便设备简单的特点。附图说明附图本专利技术膜分离-电渗析装置原理图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术具体实施例进行详细描述。一种利用膜分离-电渗析技术制备大豆降压肽的方法，该方法包括以下步骤：(1)大豆蛋白水解物的制备：将大豆分离蛋白置于酶反应器中，加入适量蒸馏水搅拌混匀，90℃预热处理10min，再将温度降到55℃稳定，调节pH为8.5，加入底物浓度为4％的Alcalase蛋白酶水解4h，反应过程中保持体系pH不变，水解结束后，沸水浴灭酶10min，冷却到室温后在3000g的条件下离心15min取上清液，得到大豆蛋白水解物；(2)大豆降压肽的分离：将蛋白水解物通过中性超滤膜，超滤后得到粗水解物抑制肽(ACE)；(3)电渗析：电渗析仪的设计应用中KCl离子浓度为0.5-1.0g/L，在KCl(1)中收集分离得到带负电荷的大豆降压肽,其相对分子质量的范围主要在200-300之间，在KCl(2)中收集分离得到带正电荷的大豆降压肽，相对分子质量的范围主要在400-500之间，使降压肽达到分离的目的。实施例1将5g大豆分离蛋白置于酶反应器中，加入100mL蒸馏水搅拌混匀，90℃预热处理10min，再将温度降到55℃稳定，用0.1MNaOH溶液调节pH为8.5，加入底物浓度为4％的Alcalase蛋白酶水解4h，反应过程中保持体系pH不变，水解结束后，沸水浴灭酶10min，冷却到室温后在3000g的条件下离心15min取上清液，得到大豆蛋白水解物通过膜分离-电渗析装置，电渗析仪的设计应用中KCl离子浓度为1.0g/L，在KCl(1)中收集分离得到带负电荷的大豆降压肽,其相对分子质量的范围主要在200-300之间，在KCl(2)中收集分离得到带正电荷的大豆降压肽，相对分子质量的范围主要在400-500之间，使降压肽达到分离的目的。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用膜分离‑电渗析技术制备大豆降压肽的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)大豆蛋白水解物的制备：将大豆分离蛋白置于酶反应器中，加入适量蒸馏水搅拌混匀，进行预热处理，再将温度调到55℃，调节pH为8.5，加入底物浓度为4％的Alcalase蛋白酶水解4h，反应过程中保持体系pH不变，水解结束后，沸水浴灭酶10min，冷却到室温后在3000g的条件下离心15min取上清液，得到大豆蛋白水解物；(2)大豆降压肽的分离：将蛋白水解物通过中性超滤膜，超滤后得到粗水解物‑抑制肽(ACE)；(3)电渗析：将电渗析仪的直流电源发生器的电压和电流分别设置为20V、0.17A，通过阴离子交换膜(AXM)和阳离子交换膜(CXM)同时分离获得带正负电荷的降压肽。

【技术特征摘要】
1.一种利用膜分离-电渗析技术制备大豆降压肽的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)大豆蛋白水解物的制备：将大豆分离蛋白置于酶反应器中，加入适量蒸馏水搅拌混匀，进行预热处理，再将温度调到55℃，调节pH为8.5，加入底物浓度为4％的Alcalase蛋白酶水解4h，反应过程中保持体系pH不变，水解结束后，沸水浴灭酶10min，冷却到室温后在3000g的条件下离心15min取上清液，得到大豆蛋白水解物；(2)大豆降压肽的分离：将蛋白水解物通过中性超滤膜，超滤后得到粗水解物-抑制肽(ACE)；(3)电渗析：将电渗析仪的直流电源发生器的电压和电流分别设置为20V、0.17A，通过阴离子交换膜(AXM)和阳离子交换膜(CXM)同时分离获得带正负电荷的降压肽。2.根据权利要求1所述的一种利用膜分离-电渗析技术制备大豆降压肽的方法，其特征在于，大豆分离蛋白置于酶反应器中的浓度为8％(w/v)，在90℃水浴条件下热处理10min。3.根据权利要求1所述的利用膜分离-电渗析技术制备大豆降压肽的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：隋晓楠，江连洲，佟晓红，齐宝坤，李杨，丁俭，王中江，寻崇荣，余光霞，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23