一种蓝莓叶提取物，提取方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种蓝莓叶提取物，该提取物包括0.2%醋酸‑乙醇提取物、95%乙醇提取物、水提取物，具体制备方法是将蓝莓鲜叶于鼓风干燥箱50℃烘干、粉碎后，于锥形瓶中，按料液比加入为0.2%醋酸‑乙醇的混合溶液、95%乙醇、或水后，50℃水浴加热提取1 h，重复2次，过滤，合并滤液并浓缩干燥得到相应的提取物；将该提取物用DMSO配制成0.1g·mL‑1供试液，即为0.2%醋酸‑乙醇提取物、95%乙醇提取物、水提取物。本发明专利技术合成工艺简单，蓝莓叶提取的化合物中对L929细胞均没有毒性，对DPPH具有显著的清楚作用，且能显著抑制络氨酸酶活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种蓝莓叶提取物及其提取方法，该蓝莓叶提取物具有抗氧化活性剂、抑制络氨酸酶的活性。
技术介绍
蓝莓(Blueberry)，属杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vaccinium.spp)多年生落叶或常绿灌木。除果实风味独特营养丰富外，蓝莓叶也可入药。蓝莓叶性温、味苦，有利尿、解毒之功效，研究发现蓝莓叶中存在大量黄酮类物质。黄酮类化合物分子中含有多电子的羟基部分，使其具有良好的抗氧化性能。最近日本研究人员又报道蓝莓叶中存在一种黄酮类物质即原花青素，是一种高活性、无毒副作用天然物质，具有较强清除自由基、抗氧化能力。拥有白皙亮丽的皮肤，是现今社会大多数人对的追求。人们希望通过物理或化学方法达到美白的效果，但随着美白化妆品中曲酸的泛滥使用出现的一系列问题，美白产品的安全性引起了广大研究者的重视。而从天然植物中提取美白剂成为寻求新型美白剂的重要方向之一。
技术实现思路
本专利技术旨在从蓝莓叶中提取抗氧化物质，就可更好地实现蓝莓叶的存在价值。本专利技术公开了一种提取蓝莓叶中的抗氧化物质的提取工艺，寻求新型、高效低毒的天然抗氧化剂的制备方法，提高蓝莓种植的经济效益。酪氨酸酶广泛存在于生物体内，具有许多重要的生理功能。在人体中，酪氨酸酶是黑色素生物合成途径中的主要限速酶。因此，本专利技术的另一目的在于提供一种蓝莓叶中具有抑制酪氨酸酶的活性成分的物质，对于蓝莓叶的深度开发利用具有重要意义。具体如下：一种蓝莓叶提取物，该提取物包括如下5种主要化合物，具体为3,3’,4’,6,7-五羟基黄酮-5-O-木糖、5-羟基-4’-甲氧基黄酮-3,7-二鼠李糖、3,3’,4’-三羟基黄酮-7-O-鼠李糖(1-6)-O-葡萄糖、3,3’,4’,6,7-五羟基黄酮-5-O-鼠李糖(1-6)-O-木糖、4’,5-二羟基-2’,7-二甲氧基-8-异戊烯基黄酮。一种蓝莓叶提取物，该提取物在上述主要化合物的基础上还包括如下10种主要化合物，具体为绿原酸、3,3’,4’,6,7-五羟基黄酮-5-O-木糖、5-羟基-4’-甲氧基黄酮-3,7-二鼠李糖、芦丁、异槲皮素、3,3’,4’-三羟基黄酮-7-O-鼠李糖(1-6)-O-葡萄糖、3,3’,4’,6,7-五羟基黄酮-5-O-鼠李糖(1-6)-O-木糖、槲皮素-3-O-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖苷、4’,5-二羟基-2’,7-二甲氧基-8-异戊烯基黄酮。所述的蓝莓叶提取物为0.2％醋酸-乙醇提取物，0.2％醋酸-乙醇提取物的提取方法如下：(1)取蓝莓鲜叶于鼓风干燥箱50℃烘干至恒重，粉碎得蓝莓叶备用；(2)取粉碎的蓝莓叶于锥形瓶中，按料液比1:10加入为0.2％醋酸-乙醇的混合溶液，50℃水浴加热提取1h，重复2次，过滤，合并滤液并浓缩干燥得到为0.2％醋酸-乙醇提取物；(3)将0.2％醋酸-乙醇提取物用DMSO配制成0.1g·mL-1供试液，即为0.2％醋酸-乙醇提取物。0.2％醋酸-乙醇的混合溶液是指100mL乙醇溶液中含有0.2mL的醋酸溶液的混合溶液。所述的蓝莓叶提取物为95％的乙醇提取物，体积浓度为95％的乙醇提取物的提取方法如下：(1)取蓝莓鲜叶于鼓风干燥箱50℃烘干至恒重，粉碎得蓝莓叶备用；(2)取蓝莓叶于锥形瓶中，按料液比1：10加入体积浓度为95％乙醇；500W超声提取0.5h，重复2次，过滤，合并滤液并浓缩干燥得到体积浓度为95％的乙醇提取物；(3)将体积浓度为95％的乙醇提取物用DMSO配制成0.1g·mL-1供试液，即为95％乙醇提取物。所述的蓝莓叶提取物还可以为水提取物，水提取物的提取方法如下：(1)取蓝莓鲜叶于鼓风干燥箱50℃烘干至恒重，粉碎得蓝莓叶备用；(2)取蓝莓叶于锥形瓶中，按料液比1：10加入水，500W超声提取0.5h，重复2次，过滤，合并滤液并浓缩干燥得到水提取物；(3)将水提取物用DMSO配制成0.1g·mL-1供试液，即为水提取物。本专利技术将蓝莓叶的95％乙醇提取物、蓝莓叶的水提取物、蓝莓叶的0.2％醋酸-乙醇提取物在制备抗氧化活性的药物上的应用。本专利技术进一步将蓝莓叶的95％乙醇提取物、蓝莓叶的水提取物、蓝莓叶的0.2％醋酸-乙醇提取物在制备抑制络氨酸酶活性的药物上的应用。本专利技术提取工艺简单，在蓝莓叶的95％乙醇提取物、蓝莓叶的水提取物、蓝莓叶的0.2％醋酸-乙醇提取物中首次发现了化合物3,3’,4’,6,7-五羟基黄酮-5-O-木糖、5-羟基-4’-甲氧基黄酮-3,7-二鼠李糖、3,3’,4’-三羟基黄酮-7-O-鼠李糖(1-6)-O-葡萄糖、3,3’,4’,6,7-五羟基黄酮-5-O-鼠李糖(1-6)-O-木糖、4’,5-二羟基-2’,7-二甲氧基-8-异戊烯基黄酮，蓝莓叶提取的化合物中对L929细胞均没有毒性，对DPPH具有显著的清楚作用，且能显著抑制络氨酸酶活性。附图说明图1为不同蓝莓样品对L929细胞的细胞毒性检测，其中，1为蓝莓叶的0.2％醋酸-乙醇提取物，2为蓝莓叶的95％乙醇提取物，3为蓝莓叶的水提取物。图2为不同蓝莓样品对DPPH自由基清除能力，其中，1为蓝莓叶的0.2％醋酸-乙醇提取物，2为蓝莓叶的95％乙醇提取物，3为蓝莓叶的水提取物。图3为不同蓝莓样品的抑制络氨酸酶活性，其中，1为蓝莓叶的0.2％醋酸-乙醇提取物，2为蓝莓叶的95％乙醇提取物，3为蓝莓叶的水提取物。图4为蓝莓叶的0.2％醋酸-乙醇提取物的液相色谱图。图5为蓝莓叶的0.2％醋酸-乙醇提取物的质谱图。图6为蓝莓叶的95％乙醇提取物的液相色谱图。图7为蓝莓叶的水提取物的液相色谱图。具体实施方式实施例11、样品的制备蓝莓鲜叶1.3Kg于鼓风干燥箱50℃烘干至恒重，粉碎得580g蓝莓叶备用。2、提取0.2％醋酸-乙醇提取物的提取：取粉碎的蓝莓叶1g于锥形瓶中，按料液比1:10加入体积浓度为0.2％醋酸-乙醇，50℃水浴加热提取1h，重复2次，过滤，合并滤液并浓缩干燥得到体积浓度为0.2％醋酸-乙醇提取物；将体积浓度为0.2％醋酸-乙醇提取物用DMSO配制成0.1g·mL-1供试液，即为0.2％醋酸-乙醇提取物(样品1)。95％乙醇提取物：取蓝莓叶1g于锥形瓶中，按料液比1：10加入体积浓度为95％乙醇；500W超声提取0.5h，重复2次，过滤，合并滤液并浓缩干燥得到体积浓度为95％的乙醇提取物；将体积浓度为95％的乙醇提取物用DMSO配制成0.1g·mL-1供试液，即为95％乙醇提取物(样品2)。水提取物：取蓝莓叶1g于锥形瓶中，按料液比1：10加入水，500W超声提取0.5h，重复2次，过滤，合并滤液并浓缩干燥得到水提取物；将水提取物用DMSO配制成0.1g·mL-1供试液，即为水提取物(样品3)。本实验考察了不同的提取溶剂(0.2％醋酸-乙醇、95％乙醇、水)和不同的提取方法(加热回流提取和超声提取)，结果发现提取溶剂和提取方法对蓝莓叶的提取率影响不大，3个样品的提取率分别为19.3％、19.9％和26.1％。针对上述活性的应用，本申请进行了细胞毒活性、抗氧化活性、抑制络氨酸酶活性实验，具体如下：细胞毒活性细胞毒活性取对数生长期的成纤维L929细胞，以2×103个/ml细胞浓度接种于96孔板中，每孔100μl，培养24h后加分别加蓝莓提取物100μl本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蓝莓叶提取物，其特征在于，该提取物包括如下5种主要化合物，具体为3,3’,4’,6,7‑五羟基黄酮‑5‑O‑木糖、5‑羟基‑4’‑甲氧基黄酮‑3,7‑二鼠李糖、3,3’,4’‑三羟基黄酮‑7‑O‑鼠李糖（1‑6）‑O‑葡萄糖、3,3’,4’,6,7‑五羟基黄酮‑5‑O‑鼠李糖（1‑6）‑O‑木糖、4’,5‑二羟基‑2’,7‑二甲氧基‑8‑异戊烯基黄酮。

【技术特征摘要】
1.一种蓝莓叶提取物，其特征在于，该提取物包括如下5种主要化合物，具体为3,3’,4’,6,7-五羟基黄酮-5-O-木糖、5-羟基-4’-甲氧基黄酮-3,7-二鼠李糖、3,3’,4’-三羟基黄酮-7-O-鼠李糖（1-6）-O-葡萄糖、3,3’,4’,6,7-五羟基黄酮-5-O-鼠李糖（1-6）-O-木糖、4’,5-二羟基-2’,7-二甲氧基-8-异戊烯基黄酮。2.一种蓝莓叶提取物，其特征在于，该提取物包括如下10种主要化合物，具体为绿原酸、3,3’,4’,6,7-五羟基黄酮-5-O-木糖、5-羟基-4’-甲氧基黄酮-3,7-二鼠李糖、芦丁、异槲皮素、3,3’,4’-三羟基黄酮-7-O-鼠李糖（1-6）-O-葡萄糖、3,3’,4’,6,7-五羟基黄酮-5-O-鼠李糖（1-6）-O-木糖、槲皮素-3-O-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖苷、4’,5-二羟基-2’,7-二甲氧基-8-异戊烯基黄酮。3.权利要求1或2所述的蓝莓叶提取物为0.2%醋酸-乙醇提取物，其特征在于，为0.2%醋酸-乙醇提取物的提取方法如下：（1）取蓝莓鲜叶于鼓风干燥箱50℃烘干至恒重，粉碎得蓝莓叶备用；（2）取粉碎的蓝莓叶于锥形瓶中，按料液比1:10加入为0.2%醋酸-乙醇的混合溶液，50℃水浴加热提取1h，重复2次，过滤，合并滤液并浓缩干燥得到为0.2%醋酸-乙醇提取物；（3）将为0.2%醋酸-乙醇提取物用DMSO配制成0.1g·...

【专利技术属性】
技术研发人员：喻玲玲，罗伟，吴红艳，刘森，胥道明，谭潇，
申请(专利权)人：三峡大学，宜昌扬子果园生态农业有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42