一种疫苗用佐剂及含该佐剂的疫苗组合物和其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种疫苗用佐剂，该佐剂包括铝胶、壳聚糖，还包括卵磷脂。本发明专利技术还公开了含该佐剂的疫苗组合物及其应用。该佐剂用于灭活疫苗时不仅能使机体产生有效体液免疫，无体温升高、无副反应发生，还能在抗原含量较低、单次免疫时也能产生较好的免疫应答。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及用于增强抗原免疫应答的佐剂。
技术介绍
细菌、病毒及寄生虫感染广泛分布于人和动物，由这些感染剂引起的疾病通常对抗微生物药学疗法具有抗性，从而没有有效的治疗方法。因此，本领域更常使用疫苗学方法以控制传染，具体是通过用活的病原体、经灭活的病原体或其产物，或经基因工程手段将病原体蛋白质亚基制备成疫苗，进行疫苗接种来诱导特异性免疫。然而，当单独给予某些抗原时，不能对免疫系统产生足够的刺激作用。因此，必须加入能够使机体免疫应答增加的免疫佐剂来获得足够量的保护性抗体。免疫佐剂是疫苗必不可少的组成部分，不仅能影响机体对疫苗免疫应答的强度，而且能针对特定病原体诱导最有效的免疫应答类型(MbowML,DeGregorioE,ValianteNM,etal.Newadjuvantsforhumanvaccines.Currentopinioninimmunology,2010,22(3):411-416)。目前，研究的免疫佐剂类型很多，如铝胶、油佐剂、弗氏佐剂、微生物及其代谢产物、核酸及其类似物、细胞因子、脂质体等(DeyAK,SrivastavaIK.Noveladjuvantsanddeliverysystemsforenhancingimmuneresponsesinducedbyimmunogens.Expertreviewofvaccines,2011,10:227-251)，但由于存在不同程度的毒副作用或安全隐患等一些不可避免的缺陷而难以实际应用(MbowML,DeGregorioE,ValianteNM,RappuoliR.Newadjuvantsforhumanvaccines.Currentopinioninimmunology,2010,22(3):411-416；Batista-DuharteA,LindbladEB,Oviedo-OrtaE.Progressinunderstandingadjuvantimmunotoxicitymechanisms.Toxicologyletters,2011,203(2):97-105)，导致这些佐剂远远不能满足新型疫苗发展的需求。特别地，大量的临床免疫试验认为铝胶佐剂存在一些问题：(1)对Th2介导的体液免疫反应具有很强的激发作用，而对Th1介导的细胞免疫反应的作用较弱，只适用于以抗体为主要保护性免疫的疫苗(ExleyC,SiesjoP,ErikssonH.Theimmunobiologyofaluminumadjuvants:howdotheyreallywork？Trendsinimmunology,2010,31:103-109)；(2)可促进IgE抗体产生，容易诱导机体产生过敏反应；(3)有局部反应，会形成肉芽肿，极个别可发生局部无菌性脓肿；(4)因其理化性质，含铝胶疫苗怕冻，冻后铝胶疫苗容易变性；(5)对人、畜神经系统可能有影响(见中国专利CN101402666A)。因而，寻找安全、有效、新型的免疫佐剂是当前疫苗研究领域的一个热点(SchijinsVEJC,LavelleEC.Teendsinvaccineadjuvants.Expertreviewofvaccines,2011,10(4):539-550)。并且，免疫佐剂研究现已被列为疫苗研究的优先领域(HarandiAM,MedagliniD,ShattockRJ.Vaccineadjuvants:Apriorityforvaccineresearch.Vaccine,2010,28(12):2363-2366；HarandAM,BreweJ,SchijnV.Conferencescene:recentadvancementsinimmunopotentiatorsformodernvaccines.Immunotherapy,2011,3(11):1297-1301)。另外，目前商品化的菌苗(如猪肺炎支原体菌苗、副猪嗜血杆菌菌苗)是通过在含血清的培养基上生长所得的生物体制备而成，从而免疫物质中存在的血清组分(如免疫复合物或非免疫原性特异性蛋白)会诱导副反应发生(见中国专利CN104334186A)。而且，临床应用时发现现有的商品化疫苗免疫猪只后会出现体温升高的现象，其他现有技术所涉及的疫苗也有类似报道如中国专利CN103194413A、CN104312964A。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种疫苗用佐剂及含该佐剂的疫苗组合物和其应用。本专利技术的第一方面在于提供一种疫苗用佐剂，所述佐剂包括铝胶、壳聚糖。本专利技术还涉及一种疫苗用佐剂，所述佐剂包括铝胶、壳聚糖和磷脂。本专利技术所述疫苗用佐剂具有成本低廉、使用方便、免疫活性强等优点，含该佐剂的疫苗组合物不仅能使动物机体产生体液免疫、细胞免疫，还不会造成体温升高、副反应发生。本专利技术的另一方面在于提供一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包含本专利技术所述疫苗用佐剂和免疫有效量的抗原。含本专利技术佐剂的疫苗组合物在抗原含量较低、单次免疫时也能使动物获得较好的免疫应答水平。本专利技术还涉及本专利技术制备的含猪肺炎支原体抗原和副猪嗜血杆菌抗原以及疫苗用佐剂的疫苗组合物在制备预防和治疗猪肺炎支原体和副猪嗜血杆菌感染相关疾病的药物中的应用。本专利技术的疫苗用佐剂与抗原共同免疫动物后的免疫应答水平与现有商品化疫苗的免疫应答水平相当甚至较高，抗体持续时间也较长，无体温升高、无副反应发生，效果稳定；且在抗原含量较低时也能使动物获得较好的免疫效果，免疫次数少也可使猪的应激反应减少甚至消失。具体实施方式以下，对本专利技术的实施方式进行说明。本专利技术的第一方面在于提供一种疫苗用佐剂，所述佐剂包括铝胶、壳聚糖。术语“佐剂”是指当与抗原连同投予时，使受试者对这一抗原的免疫反应增强的化合物。术语“铝胶”，又称铝盐或铝佐剂，是本领域众所周知的，并且如在HarlowE.与D.Lane(Antibodies:alaboratorymanualgoldspringharborlaboratory.1988)和NicklasW.(Aluminumsalts,researchinimmunology.1992,143:489-493)中描述的，可广泛应用于疫苗制备。铝胶包括但不限于氢氧化铝(Aluminiumhydroxide或Amphogel，又称水化氧化铝、铝的水合物、三羟基铝、无定形氧化铝，包括一水合氧化铝、三水合氧化铝ATH)、磷酸铝、硫酸铝、铵明矾、钾明矾或硅酸铝的一种或多种，优选为氢氧化铝或磷酸铝。所述铝胶还可以包括以下任一产品如HPA(GeneralChemical,LLC)、M9400SP(J.M.HuberCorporation)、(Merck)、(BrenntagBiosector)、Aluminumhydroxide(Sigma-aldrich、Watson、Bisely&CompanyPtyLtd.、Noahthchnologiescorporation或CellMarkUSA,LLC)、氢氧化铝凝胶(内蒙古新宏生物科技有限公司)、20％氢氧化铝胶生理盐水(中牧实业股份有限公司)。术语“壳聚糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗用佐剂，所述佐剂包括铝胶、壳聚糖。

【技术特征摘要】
1.一种疫苗用佐剂，所述佐剂包括铝胶、壳聚糖。2.根据权利要求1所述佐剂，其特征在于，铝胶包括氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝、铵明矾、钾明矾、硅酸铝中的至少一种；优选地，铝胶包括氢氧化铝、磷酸铝中的至少一种；最优选地，铝胶包括HPA、M9400SP、Aluminumhydroxide、氢氧化铝凝胶、20％氢氧化铝胶生理盐水中的至少一种。3.根据权利要求1所述佐剂，其特征在于，壳聚糖包括天然壳聚糖、改性壳聚糖、壳聚糖盐类或壳聚糖衍生物中的至少一种。4.根据权利要求1所述佐剂，其特征在于，所述佐剂还包括磷脂；优选地，所述磷脂包括卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝胺酸、磷脂酸、鞘磷脂、心肌磷脂中的至少一种；优选地，所述磷脂为卵磷脂；优选地，所述卵磷脂包括天然卵磷脂、合成卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、合成的二棕榈酰卵磷脂、部分或完全氢化的卵磷脂中的至少一种。5.一种疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物含权利要求1-4中任一项所述佐剂和免疫有效量的抗原。6.根据权利要求5所述疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物中，铝胶含量为5％-30％V/V，壳聚糖浓度为0.1-10mg/ml；优选地，所述疫苗组合物中，卵磷脂浓度为0.2-8mg/ml。7.根据权利要求5所述疫苗组合物，其特征在于，铝胶含量为8％-20％V/V，壳聚糖浓度为1-5mg/ml；优选地，所述疫苗组合物中，卵磷脂浓度为0.5-5mg/ml。8.根据权利要求5所述疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗
\t组合物中所述抗原包括猪肺炎支...

【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，王莹，田克恭，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41