THERAMUTEIN调节剂制造技术

本发明专利技术涉及为内源性蛋白质的变体形式抑制剂或活化剂的活性剂和鉴定这类变体新方法。特别关注由已经突变的基因编码的内源性蛋白质变体的抑制剂和活化剂，所述的变体通常在接触化学活性剂后产生或至少当已经产生时被首次鉴定，所述的化学活性剂为相应的未突变内源性蛋白质的抑制剂或活化剂。

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2005年5月23日、申请号为201310077862.X、专利技术名称为“THERAMUTEIN调节剂”的中国专利技术专利申请的分案申请。专利技术背景患者中耐药性的进行性发展为使用许多类型药物长期治疗的标志，尤其是在癌症和感染性疾病的治疗领域中。已经鉴定了介导某些类型的耐药性现象的分子机制，而在其它情况中，获得的以及重新形成的耐受性的机制目前仍然未知。最初认为在癌症疗法领域中相关的诱导的(获得的)耐药性的一种机制包括称作P-糖蛋白(P-gp)的蛋白质表达增加。P-gp位于细胞膜中并且起药物流出泵的作用。该蛋白质能够从细胞中泵出毒性化学活性剂，包括许多类型的抗癌药。因此，P-糖蛋白的增量调节通常产生对多种药物的耐药性。P-糖蛋白在肿瘤细胞中增量调节可以代表一种防御机制，该机制在哺乳动物细胞中发展以便防止受到毒性化学活性剂损害。目前已经鉴定了具有与P-gp类似的功能的其它相关耐药性蛋白质，包括多药物-抗性-相关蛋白家族成员，诸如MRP1和ABCG2。在任何情况下，在研发对指定靶蛋白具有特异性且毒性较低的化合物时，P-糖蛋白和相关ATP-结合弹夹(ABC)转运蛋白在临床显著性耐药性中的重要性已经下降。另一种可能的获得性耐药的分子机制在于可选的信号途径导致持续的细胞存活和代谢，即使原始药物仍然对其靶标有效。此外，药物胞内代谢的改变也可以导致治疗功效丧失。此外，可以发生基因表达和基因扩增结果的改变，从而导致指定靶蛋白的表达增加或减少，并且通常需要增加药物剂量以便维持相同作用(Adcock和Lane,2003)。突变诱导的耐药性通常为感染性疾病领域中出现的情况。例如，已经研发了几种抑制在人免疫缺陷(HIV)病毒基因组中编码的病毒逆转录酶或病毒蛋白酶的药物。在文献中充分确立了使用例如逆转录酶抑制剂反复治疗HIV-感染的AIDS患者最终产生了病毒突变体形式，它们具有因已经在编码逆转录酶的基因中出现的突变而导致的对药物的敏感性降低，所述的突变赋予所述酶的突变体形式受药物的影响降低。考虑到错误被引入HIV基因组的比例，在HIV治疗过程中耐药性的出现并不令人意外。已知HIV逆转录酶特别具有错误趋向性，其中正向突变率约为3.4x10-5种突变/碱基对/复制循环(Mansky等,J.Virol.69：5087-94(1995))。然而，在哺乳动物细胞中编码的内源性基因的类似突变率低一个数量级以上。新的证据表明耐药性还可能因涉及编码药物靶标的基因的突变结果产生(Gorre等,Science,2001；PCT/US02/18729)。在这种情况中，使患者接触具体的治疗物质，诸如靶向特异性所关注的蛋白质(POI或\靶\蛋白)的指定癌症药物后，隐含在编码为治疗物质靶标的蛋白质的基因中出现的突变的一组细胞的过度生长。目前还不了解该细胞群的过度生长是否因已经隐含产生药物抗性的POI的突变的患者的小百分比的预先存在的细胞所致，或这类突变是否在动物或人接触能够活化或抑制所述POI的治疗剂过程中或之后重新产生。任一情况中，这类突变结果均可以产生突变的蛋白(下文定义为theramutein)，它受所述治疗物质的影响程度较低或可能完全不受影响。慢性髓细胞性白血病(CML)的特征在于在该病稳定或慢性期过程中保持分化能力的骨髓先祖(progenitor)过度增殖。多线证据已经确立了作为某些形式的CML中的致病性癌基因的Abl酪氨酸激酶的失调。这种失调通常与称作费城染色体(Ph)的染色体易位相关，导致由与Abelson酪氨酸激酶融合的BCR基因产物组成的融合蛋白表达，由此形成具有酪氨酸激酶活性的p210Bcr-Abl。相关的融合蛋白称作p190Bcr-Abl，其由BCR基因中的不同断点产生并且已经证实出现在具有费城染色体阳性(Ph+)的急性成淋巴细胞性白血病(ALL)的患者中(Melo,1994；Ravandi等,1999)。转化看起来因多信号途径，包括那些涉及RAS、MYC和JUN的途径活化所致。甲磺酸伊马替尼(“STI-571”或)为靶向Abl的激酶结构域的ATP结合位点的2-苯氨基嘧啶(Druker等,NEJM2001,p.1038)。随后还通过其它方法已经发现了血小板衍生的生长因子(PDGF)β受体的抑制剂和Kit酪氨酸激酶，其中后者涉及胃肠道间质瘤的发生(参见下文)。直到近期为止，尚未观察到在使用指定内源性细胞蛋白的特异性抑制剂治疗的过程中，其相应的内源性基因中的突变可以导致蛋白质不同的表达，所述蛋白质变体的细胞功能耐受所述抑制剂。CharlesSawyers和同事所做的工作(Gorre等,Science293：876-80(2001)；PCT/US02/18729)首次证实了使用能够抑制p210Bcr-Abl酪氨酸激酶的药物(即STI-571)治疗患者后，在编码产生p210Bcr-Abl癌的含有Abelson酪氨酸激酶结构域的靶蛋白的基因中隐含突变的所述患者中可能出现具有临床意义的细胞群。各种这类突变产生p210Bcr-Abl的突变体形式，它们对Gleevec治疗的反应性低于产生最初癌症的形式。值得注意的是，出现的突变对突变蛋白赋予了对蛋白激酶抑制剂药物作用的相对抗性，同时维持了一定程度的突变蛋白激酶的原始底物特异性。在Gorre等的工作前，本领域技术人员一般认为可以在接触抑制Abelson蛋白激酶的化合物，诸如STI-571的患者中观察到的抗性类型可能因上述药物抗性的其它机制中的一种或多种或由某些其它尚不了解的机制导致，但在任何情况下，所述的抗性均可以涉及不同于药物靶标POI的靶标(蛋白质或其它)。因此，治疗临床相关的还为现存疗法靶标的蛋白质突变体形式可能极为有用。这类突变蛋白(如下文定义的theramuteins)正在被公认和理解为复发性癌症中的重要靶标，并且还在其它疾病中变得具有重要性。存在对治疗剂的需求，这类治疗剂对可能在一般有效药物疗法之前、过程中或之后产生的细胞蛋白的这类药物抗性变体形式具有活性。本专利技术的关键目的在于提供可以用作用于克服在内源性出现的蛋白质中的突变-诱导的耐药性的可能治疗剂的化合物。专利技术概述本专利技术涉及为内源性蛋白质的变体形式的抑制剂或活化剂的活性剂以及鉴定这类变体的新方法。特别关注的是由已经突变的基因编码的内源性蛋白质变体的抑制剂和活化剂，所述的变体通常在接触已知为相应未突变内源性蛋白质的抑制剂或活化剂的化学活性剂后产生或至少在已经产生后首先得到鉴定。这类蛋白质变体(突变蛋白)在本文中称作heramuteins\，它们可以自发在生物体内出现(并且在某些情况中预先存在突变)或所述的突变体可以作为使用当能够抑制所述theramutein的未突变形式(本文称作“prototheramutein”)的指定化学活性剂治疗生物体时产生的选择压力的结果产生。可以理解在某些情况中，prototheramutein可以为POI的“野生型\形式(例如因失调产生疾病的蛋白质)。在其它情况中，prototheramutein为引起疾病的“野生型”蛋白质的变体，它已经突变且由此促使作为所述在先突变结果的患病状态发生。Prototheramutein的后一种类型的一个实例为P210BCR-ABL癌蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于确定物质是否为能够引起可检测到的表型反应的theramutein的抑制剂或活化剂的方法，其中所述表型反应不是细胞的基因型特征，该方法包括：a)将以基本上恒定水平表达theramutein的第一种细胞与所述物质一起温育；b)将以基本上恒定水平表达相应的prototheramutein的第二种细胞与已知的prototheramutein的抑制剂或活化剂一起温育；c)将第二种细胞对已知的prototheramutein的抑制剂或活化剂的表型反应与第一种细胞对所述物质的表型反应进行比较；和d)确定将第一种细胞的表型反应抑制或活化至至少与用已知的prototheramutein的抑制剂或活化剂抑制或活化第二种细胞的表型反应相同的程度，由此将所述物质鉴定为theramutein的抑制剂或活化剂。

【技术特征摘要】
2004.05.23 US 60/573,962;2004.12.03 US 60/633,0131.用于确定物质是否为能够引起可检测到的表型反应的theramutein的抑制剂或活化剂的方法，其中所述表型反应不是细胞的基因型特征，该方法包括：a)将以基本上恒定水平表达theramutein的第一种细胞与所述物质一起温育；b)将以基本上恒定水平表达相应的prototheramutein的第二种细胞与已知的prototheramutein的抑制剂或活化剂一起温育；c)将第二种细胞对已知的prototheramutein的抑制剂或活化剂的表型反应与第一种细胞对所述物质的表型反应进行比较；和d)确定将第一种细胞的表型反应抑制或活化至至少与用已知的prototheramutein的抑制剂或活化剂抑制或活化第二种细胞的表型反应相同的程度，由此将所述物质鉴定为theramutein的抑制剂或活化剂。2.权利要求1所述的方法，其中theramutein对所述物质的表型反应大于prototheramutein对已知的protheramutein的抑制剂或活化剂的表型反应。3.用于确定物质是否为theramutein的特异性抑制剂或特异性活化剂的方法，该方法包括：...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰勒德·M·豪斯，
申请(专利权)人：杰勒德·M·豪斯，
类型：发明
国别省市：美国;US