一种B族维生素的检测方法技术

本发明专利技术涉及分析化学领域，尤其涉及一种B族维生素的检测方法。实验表明，采用本发明专利技术提供的方法对多种维生素缓释胶囊进行检测，其中的辅料成分的检出峰不会对B族维生素产生干扰，本发明专利技术提供的方法具有良好的准确性、精密度、稳定性和重复性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分析化学领域，尤其涉及一种B族维生素的检测方法。
技术介绍
维生素是维护人体健康、促进生长发育和调节生理功能所必需的一类有机化合物。这些化合物都存在于天然食物中，一般在体内不能合成或合成量较少，不能满足需要。由于饮食习惯和缺乏营养知识，以及现代人生活方式改变，难以达到理想的平衡膳食模式，据权威部门调查，中国多数人日常饮食不能均衡提供某些维生素和矿物质，缺钙、铁、维生素A、B2比较普遍，缺锌、硒、维生素B1、维生素C也很常见。因此有必要服用营养素补充剂。多种维生素缓释胶囊是通过亲水凝胶骨架达到缓释的效果，口服后遇消化液发生水化作用生成凝胶，其中的B族维生素通过扩散和凝胶骨架溶蚀的方式释放。亲水凝胶骨架不容易完全溶解，从而造成B族维生素含量测定难度大。经试验，目前已报道文献的方法均不能测定多种维生素缓释胶囊的中的维生素B1、B2、B3、B5、B6、B7、B12。在保健食品的生产、贮藏、供应和临床使用等各个环节，为确保保健食品质量，均需经过严格的分析检验，以此来保证保健食品的安全有效合理。因此，进一步开发多种维生素缓释胶囊中B族维生素的检测方法是非常关键的。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种B族维生素的检测方法，本专利技术采用HPLC-MS联用的方法，可实现对多种维生素缓释胶囊中7种B族维生素的检测，该方法线性范围广，精密度，重复性、稳定性和灵敏度、准确性皆良好，且空白溶液对测定结果无影响。本专利技术提供的B族维生素的检测方法，以甲酸水溶液或乙酸水溶液为流动相A相；以甲醇或乙腈为流动相B相；采用高效液相色谱与质谱联用对样品进行检测，根据质谱图和色谱图对B族维生素进行定性和/或定量；所述高效液相色谱采用梯度洗脱，洗脱程序为：0～0.5min，流动相A相的体积分数为92％；0.5min～8min，流动相A相的体积分数由92％降至10％；8min～8.5min，流动相A相的体积分数为10％；8.5min～9min，流动相A相的体积分数由10％升至92％；9min～12min，流动相A相的体积分数为92％。高效液相色谱与质谱联用(HPLC-MS)将HPLC对复杂样品的分离能力与MS具有选择性、灵敏性及能够提供相对分子质量与结构信息的有点结合起来，在药物、食品、保健品或环境分析等多个领域得到了广泛的应用。但在面对需要对一种新的样品进行检测时，需要对HPLC-MS的条件进行摸索，以建立针对该样品的检测方法。新的方法需要进行精密度、重复性和准确度等多方面的鉴定，对本专利技术提供方法的鉴定结果表明：线性：线性实验结果表明，维生素B1、B2、B3、B5、B6、B7、B12的相关系数R分别为0.9999、0.9998、0.9998、0.9998、0.9998、0.9998、0.9997,所以用该方法测定维生素B1、B2、B3、B5、B6、B7、B12浓度分别为1.57343μg/ml至7.86712μg/ml，1.59031μg/ml至7.95156μg/ml，10.0300μg/ml至50.1498μg/ml，3.21878μg/ml至16.0939μg/ml，1.57642μg/ml至7.88211μg/ml，0.524892μg/ml至2.62446μg/ml，0.534886μg/ml至2.67443μg/ml，之间呈现良好的线性，符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求(GB/T27404-2008要求相关系数R≥0.99)。精密度：同一份B族维生素标准工作溶液，连续进样六次，7种B族维生素峰面积的相对标准偏差皆小于0.8％，说明该方法的精密度良好。重复性：取B族维生素标准工作溶液，由同一分析人员精密称取6份，平行操作测定6份供试品溶液，结果表明，7种B族维生素含量相对标准偏差皆小于0.9％，在规定范围内，说明此本专利技术提供方法的重复性较好。稳定性：将B族维生素的标准工作溶液分别在室温下放置0h、1h、2h、4h、8h、12h后进行检测，7种B族维生素峰面积的相对标准偏差皆小于0.7％，说明该方法的精密度良好。空白实验表明，对空白溶液的检测谱图中，在维生素B1、B2、B3、B5、B6、B7、B12的出峰时间处均无峰，表明空白对测定结果基本无干扰。准确度：在样品中加入已知量的标准品，以本专利技术提供的方法对B族维生素的进行定量，计算加样回收率。每组浓度平行三次检测回收率，计算平均值，结果表明，7种B族维生素回收率位于99.1％～100.1％，符合回收率要求。说明该方法具有良好的准确度。液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相对样品具有一定的溶解能力且与样品不产生化学反应，其黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；且流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用紫外检测器，则应使用对紫外吸收较低的溶剂配制。其沸点不可以太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。对于B族维生素而言，以本专利技术提供的流动相进行等度洗脱能够保证更好的检测效果，优于其他流动相的检测结果。在本专利技术中，甲酸水溶液中，甲酸的体积分数为0.1％；所述乙酸水溶液中，乙酸的体积分数为0.1％。一些具体实施例中，流动相A相为体积分数为0.1％的甲酸水溶液。在另一些实施例中，流动相A相为体积分数为0.1％的乙酸水溶液。在本专利技术中，高效液相色谱流动相的流速为0.3mL/min～0.5mL/min。一些具体实施例中，高效液相色谱流动相的流速为0.5mL/min。对柱温的选择需考虑待分离物质本身的特性，柱温影响流动相对待测物质的溶解度也会影响柱压。一般情况下，提高柱温有利于提高分离度，但温度过高会导致柱压过低，不利于物质的检出。本专利技术中，高效液相色谱的色谱柱的柱温为30℃～40℃。一些具体实施例中，高效液相色谱的色谱柱的柱温为40℃。高效液相色谱的进样量为1～5μL，优选为2μL。对本专利技术提供的方法而言，根据B族维生素的极性选择C18色谱柱。色谱柱的尺寸会对分离结果产生影响，其内径会对流动相的流速产生影响，长度较短的色谱柱运行时间短，柱压较低；长度较长的色谱柱分辨率稿，但运行时间增长。本专利技术中，高效液相色谱的色谱柱为C18色谱柱，尺寸为100×4.6mm，2.6μm；150×4.6mm，2.7μm或100×4.6mm，3μm。一些实施例中，色谱柱为Phenomenex,Kinetex,XB-C18,(100×4.6mm，2.6μm)；Agilent,EC-C18,(150×4.6mm，2.7μm)；或Phenomenex,Luna,C18(2),(100×4.6mm，3μm)。一个具体实施例中，色谱柱为Phenomenex,Kinetex,XB-C18,(100×4.6mm，2.6μm)。本专利技术中，质谱的离子源为电喷雾正离子源；离子源温度为600℃。本专利技术中，质谱的电喷雾电压为5500V；碰撞气压7.0psi；气帘气压22.0psi；雾化气压60.0psi；辅助气流速20.0psi。对不同B族维生素的检测参数如表1：表1质谱参数其中，母离子(Q1)、定量定性离子对(Q3)、去簇电压(DP)、入口电压(EP)、碰撞池入口电压(CEP)、碰撞气能量(C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种B族维生素的检测方法，其特征在于，以甲酸水溶液或乙酸水溶液为流动相A相；以甲醇或乙腈为流动相B相；采用高效液相色谱与质谱联用对样品进行检测，根据质谱图和色谱图对B族维生素进行定性和/或定量；所述高效液相色谱采用梯度洗脱，洗脱程序为：0～0.5min，流动相A相的体积分数为92％；0.5min～8min，流动相A相的体积分数由92％降至10％；8min～8.5min，流动相A相的体积分数为10％；8.5min～9min，流动相A相的体积分数由10％升至92％；9min～12min，流动相A相的体积分数为92％。

【技术特征摘要】
1.一种B族维生素的检测方法，其特征在于，以甲酸水溶液或乙酸水溶液为流动相A相；以甲醇或乙腈为流动相B相；采用高效液相色谱与质谱联用对样品进行检测，根据质谱图和色谱图对B族维生素进行定性和/或定量；所述高效液相色谱采用梯度洗脱，洗脱程序为：0～0.5min，流动相A相的体积分数为92％；0.5min～8min，流动相A相的体积分数由92％降至10％；8min～8.5min，流动相A相的体积分数为10％；8.5min～9min，流动相A相的体积分数由10％升至92％；9min～12min，流动相A相的体积分数为92％。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述甲酸水溶液中，甲酸的体积分数为0.1％；所述乙酸水溶液中，乙酸的体积分数为0.1％。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱流动相的流速为0.3mL/min～0.5mL/min。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的色谱柱的柱温为30℃～40℃。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏昭仑，叶少文，游景水，
申请(专利权)人：汤臣倍健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44