一种鲟鱼软骨提取物的提取方法技术

本发明专利技术提供一种鲟鱼软骨提取物的提取方法。利用史氏鲟鱼头骨及脊骨为原料，将酶解、盐解与碱解工艺相结合优化提取工艺，获得以硫酸软骨素为主要成分的鲟鱼软骨提取物。此提取物双蒸馏水溶解后涂抹于昆明小鼠背部皮肤全层切口创面，发现用鲟鱼软骨提取物水溶液涂抹的小鼠创口比用生理盐水涂抹愈合得早，生成的疤痕不明显，再生皮肤光滑如常，具有极大后期开发性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种鲟鱼软骨提取物的提取方法。
技术介绍
鲟鱼是世界上唯一生活在水中的活化石，是所有鱼类中营养价值最高的一种鱼类。中国是鲟鱼养殖最多、分布最广、产量最高的国家，鲟鱼全身遍布软骨，鲟鱼头、脊索及鳍中含有的软骨约占体重10%。软骨又称明骨、鱼脑，是软骨鱼类鲟鱼特有的组织，除供食用外，还具有独特的保健药用功效。本草拾遗记载：鲨鱼翅、鲟鱼骨，食之明目壮阳，延年益寿。软骨组织中含丰富的硫酸软骨素，是一种酸性粘多糖（糖胺多糖），鲟鱼软骨含量可达30%。经现代医学证明，它有降血脂、抗动脉硬化、消炎镇痛、恢复关节活动能力、增强人体软骨弹性，抗衰老、耐疲劳等功能，因此软骨提取物是一种很好的药用来源。创面是正常皮肤（组织）在外界致伤因子如外科手术、外力、热、电流、化学物质、低温以及机体内在因素如局部血液供应障碍等作用下所导致的损害。常伴有皮肤完整性的破坏以及一定量正常组织的丢失，同时，皮肤的正常功能受损。每年全国受交通事故、意外跌落、动物咬伤、外科手术、战争等因素导致的创伤人群多达数百万人，创伤成为不可忽视的疾病，因此促进创面愈合就成为疾病防治的重要手段。目前用于创面愈合的药物主要有维生素类：维生素C注射液、维生素B12、维生素B2、维生素B6、泛酸等；微量元素类：锌制剂类；中药等有效成分：七叶皂苷钠、壳聚糖等。然而上述产品获得过程复杂，需要不断地提取和纯化，成本高，费用高，人员多。本研究转向从饲养史氏鲟鱼（主要产物鱼子酱）副产物软骨提取物具有消炎镇痛的功效角度出发，利用鲟鱼软骨提取物研究了其促创面愈合的功效，对于进一步开拓鲟鱼软骨素市场及进一步研究利用其生理功能具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种促创面愈合的鲟鱼软骨提取物的提取方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：鲟鱼软骨提取物提取方法：a、将鲟鱼加水煮熟，剔除鲟鱼上的鱼肉等杂质，烘干，将软骨进行粉碎，粉碎后软骨粉末转至烧杯中，加入95%乙醇浸泡24h，去乙醇，软骨重复用95%乙醇浸泡一次；50℃鼓风干燥脱脂后的鲟鱼软骨，备用；b、将上述鲟鱼软骨进行碱解，碱解温度为40℃，碱解时间为3h，碱解溶液用量为鲟鱼软骨重量的6倍，碱解后将溶液调pH至中性，冷却离心，获得碱解液；c、接着对碱解液进行盐解，盐解时间20min，盐解温度90℃，盐解后将其冷却离心；d、接着离心后的盐解液进行酶解，酶解pH8.5-8.9，酶解时间2.5h，酶解温度40±2℃，酶解后，将酶解温度调至80℃，加热15min，使酶失活，冷却离心，获得酶解溶液；e、将酶解溶液加入95％乙醇，体积比为酶解溶液：95%乙醇=1:3，边加入边搅拌；然后静置沉淀1h，去除上清液，加入3wt.%NaCl至沉淀溶解，再按溶液：乙醇=1:3的体积比加入95％乙醇，边加边搅拌；然后静置沉淀1h，去除上清液，所得沉淀物置于50℃减压干燥箱干燥，粉碎，得到鲟鱼软骨提取物。所述的步骤b、c、d中所用离心条件为3000rpm，10min。所述的步骤b中所用碱种类为NaOH，碱浓度为5wt.％。所述的步骤c中所用盐种类为NaCl，加入NaCl使溶液中的盐浓度为4wt.％。所述的步骤d中所用酶为胰蛋白酶，酶活力为200U，加入胰蛋白酶粉使溶液中的胰蛋白酶浓度为0.4wt.%。所述的方法制备获得的鲟鱼软骨提取物。所述的鲟鱼软骨提取物在制备促创面愈合药物中的应用。采用本专利技术后可达到以下的效果：本专利技术将碱解、盐解与酶解工艺结合，促进软骨组织中蛋白质分解，产品颜色为乳白色，粗产品得率为21％左右，其中葡萄糖醛酸的最高含量达34.28％。本专利技术的优点在于：1、提供鲟鱼软骨提取物提取方法，将酶解、盐解与碱解工艺相结合，优化鲟鱼软骨提取物的提取工艺，提高鲟鱼软骨提取物的提取得率及质量，促进其经济效益的提升。2、提供鲟鱼软骨提取物促创面愈合的研究，用鲟鱼软骨提取物水溶液涂抹的小鼠创口比用生理盐水涂抹愈合得早，生成的疤痕不明显，再生皮肤光滑如常，创口的皮肤有毛发新生。3、提供一种养殖鲟鱼副产物—软骨新的利用可能性，对于进一步开拓鲟鱼软骨素市场及进一步研究利用其生理功能具有重要意义。附图说明图1.鲟鱼软骨提取物，其中硫酸软骨素含量约为57%。图2.左侧创面：第5天涂抹红霉素眼膏+生理盐水。图3.右侧创面：第5天涂抹红霉素眼膏+软骨提取物。图4.左侧创面：第10天涂抹红霉素眼膏+生理盐水。图5.右侧创面：第10天涂抹红霉素眼膏+软骨提取物。图6.左侧创面：第15天涂抹红霉素眼膏+生理盐水。图7.右侧创面：第15天涂抹红霉素眼膏+软骨提取物。图8.左侧创面：第20天涂抹红霉素眼膏+生理盐水。图9.右侧创面：第20天涂抹红霉素眼膏+软骨提取物。具体实施方式实施例1将清洗后的鲟鱼软骨进行碱解，碱种类为Na0H，碱浓度为5％，碱解时间3h，碱解温度40℃，碱液用量约为鲟鱼软骨重量的6倍；碱解后将溶液调pH至中性，冷却离心。将调至中性的碱解液用NaCl进行盐解，加入NaCl使溶液中的盐浓度为4％，盐解温度90℃，盐解时间20min，盐解后冷却离心。取上清液加入胰蛋白酶进行酶解，酶活力为200U，加入胰蛋白酶粉使溶液中的胰蛋白酶浓度为0.4%，酶解温度40±2℃，酶解pH为8.5，酶解时间2.5h，酶解后，将酶解温度调至80℃，加热15min，使酶失活，冷却离心。将酶解后的溶液按1:3(v/v)加入95％乙醇，边加入边用玻棒搅拌；然后静置沉淀1h，去除上清液，加入3%NaCl至沉淀溶解，再按1:3的体积比加入95％乙醇，边加入边用玻棒搅拌；然后静置沉淀1h，去除上清液，所得沉淀物置于50℃减压干燥箱干燥，粉碎，得到白色鲟鱼软骨提取物粗品。粗产品得率为34.28％，其中氨基已糖的含量为34.28％。实施例2将清洗后的鲟鱼软骨进行碱解，碱种类为Na0H，碱浓度为6％，碱解时间4h，碱解温度40℃，碱液用量约为鲟鱼软骨重量的7倍；碱解后将溶液调pH至中性，冷却离心。将调至中性的碱解液用NaCl进行盐解，加入NaCl使溶液中的盐浓度为5％，盐解温度90℃，盐解时间20min，盐解后冷却离心。取上清液加入胰蛋白酶进行酶解，酶活力为200U，加入胰蛋白酶粉使溶液中的胰蛋白酶浓度为0.5%，酶解温度50±2℃，酶解pH为8.9，酶解时间3h，酶解后，将酶解温度调至80℃，加热15min，使酶失活，冷却离心。将酶解后的溶液按1:4(v/v)加入95％乙醇，边加入边用玻棒搅拌；然后静置沉淀1h，去除上清液，加入4%NaCl至沉淀溶解，再按1:4的体积比加入95％乙醇，边加入边用玻棒搅拌；然后静置沉淀1h，去除上清液，所得沉淀物置于50℃减压干燥箱干燥，粉碎，得到白色鲟鱼软骨提取物粗品。粗产品得率为28.75％，其中氨基已糖的含量为24.83％。实施例3将清洗后的鲟鱼软骨进行碱解，碱种类为Na0H，碱浓度为7％，碱解时间5h，碱解温度40℃，碱液用量约为鲟鱼软骨重量的6倍；碱解后将溶液调pH至中性，冷却离心。将调至中性的碱解液用NaCl进行盐解，加入NaCl使溶液中的盐浓度为6％，盐解温度90℃，盐解时间20min，盐解后冷却离心。取上清液加入胰蛋白酶进行酶解，酶活力为200U，加入胰蛋白酶粉使溶液中的胰蛋白酶浓度为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鲟鱼软骨提取物的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：a、将鲟鱼加水煮熟，剔除鲟鱼上的鱼肉杂质，烘干，将软骨进行粉碎，粉碎后软骨粉末转至烧杯中，加入95%乙醇浸泡24h，去乙醇，软骨重复用95%乙醇浸泡一次；50℃鼓风干燥脱脂后的鲟鱼软骨，备用；b、将上述鲟鱼软骨进行碱解，碱解温度为40℃，碱解时间为3h，碱解溶液用量为鲟鱼软骨重量的6倍，碱解后将溶液调pH至中性，冷却离心，获得碱解液；c、接着对碱解液进行盐解，盐解时间20min，盐解温度90℃，盐解后将其冷却离心；d、接着离心后的盐解液进行酶解，酶解pH8.5‑8.9，酶解时间2.5h，酶解温度40±2℃，酶解后，将酶解温度调至80℃，加热15min，使酶失活，冷却离心，获得酶解溶液；e、将酶解溶液加入95％乙醇，体积比为酶解溶液：95%乙醇=1:3，边加入边搅拌；然后静置沉淀1h，去除上清液，加入3wt.%NaCl至沉淀溶解，再按溶液：乙醇=1:3的体积比加入95％乙醇，边加边搅拌；然后静置沉淀1h，去除上清液，所得沉淀物置于50℃减压干燥箱干燥，粉碎，得到鲟鱼软骨提取物。

【技术特征摘要】
1.一种鲟鱼软骨提取物的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：a、将鲟鱼加水煮熟，剔除鲟鱼上的鱼肉杂质，烘干，将软骨进行粉碎，粉碎后软骨粉末转至烧杯中，加入95%乙醇浸泡24h，去乙醇，软骨重复用95%乙醇浸泡一次；50℃鼓风干燥脱脂后的鲟鱼软骨，备用；b、将上述鲟鱼软骨进行碱解，碱解温度为40℃，碱解时间为3h，碱解溶液用量为鲟鱼软骨重量的6倍，碱解后将溶液调pH至中性，冷却离心，获得碱解液；c、接着对碱解液进行盐解，盐解时间20min，盐解温度90℃，盐解后将其冷却离心；d、接着离心后的盐解液进行酶解，酶解pH8.5-8.9，酶解时间2.5h，酶解温度40±2℃，酶解后，将酶解温度调至80℃，加热15min，使酶失活，冷却离心，获得酶解溶液；e、将酶解溶液加入95％乙醇，体积比为酶解溶液：95%乙醇=1:3，边加入边搅拌；然后静置沉淀1h，去除上清液，加入3wt.%NaCl至沉淀溶解...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹治云，曾建伟，张志灯，罗土炎，林薇，郑良朴，谢勇，罗钦，饶秋华，陈旭征，李弈君，王少珍，
申请(专利权)人：福建中医药大学，
类型：发明
国别省市：福建;35