本文中报告的一个方面是使用一种包括给实验动物三次免疫接种原代食蟹猴PBL的步骤的方法来生成特异性结合SEQ ID NO：02的人CD3ε且特异性结合SEQ ID NO：01的多肽的人食蟹猴交叉反应性抗体，其中该PBL任选富集了T细胞，没有使用原代人PBL作为免疫原且没有使用变性剂，其中该人食蟹猴交叉反应性抗体特异性结合人和食蟹猴T细胞，活化人T细胞且不与抗体OKT3，抗体UCHT1和/或抗体SP34结合相同表位。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术属于交叉反应性抗体领域。本文中报告的是一种方法和它用于产生人食蟹猴交叉反应性抗体的用途。专利技术背景T细胞是获得性免疫应答的关键效应器，在消除病原体中和在自身免疫性疾病中有多种重要作用。T细胞有数种子集，每一种具有独特的功能。在T细胞的表面上找到的TCR(T细胞受体)是由α和β多肽链一种组合物，构成TCR群体的大约95％，或γ和δ多肽链任一构成的异二聚体(PitcherandvanOers,2003；Malissen,2008)。每种多肽含有恒定(C)和可变(V)区。恒定区锚定在细胞膜中，而可变区延伸到胞外且负责结合抗原。TCR的短胞质尾缺少发信号的能力。胞内信号传导是由CD3蛋白质复合物发动的，其包含胞内免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)。CD3(分化簇3)T-细胞共同受体是一种蛋白质复合物且由四条独特链构成。在哺乳动物中，该复合物含有一条CD3γ(伽马)链，一条CD3δ(德耳塔)链，和两条CD3ε(厄普西隆)链。在T淋巴细胞中这些链与TCR和ζ链(泽塔链)联合以生成活化信号。TCR，ζ链，和CD3分子一起构成TCR复合物。CD3γ，CD3δ，和CD3ε链是含有单个胞外免疫球蛋白域的免疫球蛋白超家族的高度相关的细胞表面蛋白质。TCR不能结合游离表位/抗原，而是TCR结合与主要组织相容性复合物(MHC)(其在人中与人白细胞抗原(HLA)系统同义)联合的更大多肽的酶促切割片段(Rudd1990；Gaoetal.,2002)。这种相互作用在已经成为称作免疫突触(immunologicalsynapse)的空间中发生。MHCI类分子在身体的所有有核细胞上表达且将抗原呈递给细胞毒性T细胞，而这些细胞上的CD8稳定化MHC/TCR相互作用。细胞毒性T细胞的活化随后导致(病毒)感染细胞的毁灭。MHCII类在巨噬细胞，B细胞和树突细胞上找到。这些免疫细胞将抗原呈递给辅助T细胞，其中CD4稳定化MHC/TCR相互作用。MHCII类和TCR之间的相互作用最终导致抗体介导的免疫应答。其它共刺激分子(诸如CD45，CD28和CD2)帮助免疫突触中的T细胞活化且发动TCR信号体(一种负责胞内信号传导的大分子蛋白质复合物)的形成。本领域知道数种结合人CD3ε的抗体，例如抗体OKT3(参见例如Kung,P.etal.,Science206(1979)347-349；Salmeron,A.etal.,JImmunol147(1991)3047-3052)，抗体UCHT1(参见例如Callard,R.E.etal.,ClinExpImmunol43(1981)497-505)或抗体SP34(参见例如Pessano,S.etal.,EMBOJ4(1985)337-344)。从这些看来只有抗体SP34是人食蟹猴交叉反应性的(ConradM.L.,et.al.,CytometryA71(2007)925-933)。WO2007/042261报告了包含跨物种特异性抗体的组合物及其用途。在SooYoungYang,etal.,LNUSA137(1986)1097-1100中报告了涉及CD3-Ti复合物和CD2绵羊红细胞受体决定簇二者的T淋巴细胞活化的一种共同途径。WO2012/158818报告了多特异性Fab融合蛋白和使用方法。在DD272473中报告了一种用于生成针对人T淋巴细胞的CD3抗原的ε链的单克隆抗体的方法。专利技术概述本专利技术提供一种方法和它用于生成人食蟹猴交叉反应性抗体的用途。已经发现，通过给非人实验动物唯一免疫接种食蟹猴抗原，即之前或之后没有给该实验动物免疫接种人同系物，能获得人食蟹猴交叉反应性抗体。本文中报告的一个方面是一种包括给非人实验动物免疫接种作为唯一抗原的天然食蟹猴抗原的步骤的方法用于生成/产生/获得人食蟹猴交叉反应性抗体的用途。在一个实施方案中，该天然食蟹猴抗原缺少相应的人抗原中存在的一个或多个(连续)氨基酸区段，其中该缺少的相应的人抗原中的(连续)氨基酸区段之一是该人抗原的主要免疫原性位点/表位。在一个实施方案中，该(天然食蟹猴)抗原是CD3ε且该人食蟹猴交叉反应性抗体特异性结合SEQIDNO：02的(天然)人CD3ε且特异性结合SEQIDNO：01的多肽。在一个实施方案中，该非人实验动物一次或多次免疫接种原代食蟹猴PBL，其中该PBL(任选)富集了T细胞。在一个实施方案中，该免疫接种包括作为第一步(注射)的皮内应用，作为第二步(注射)的肌肉内应用和作为第三步(注射)的皮下应用。在一个实施方案中，该方法没有使用变性剂。在一个实施方案中，该人食蟹猴交叉反应性抗体特异性结合人和食蟹猴CD3ε，SEQIDNO：01的多肽且活化人T细胞。本文中报告的另一个方面是一种包括给非人实验动物三次免疫接种(任选)富集了T细胞的原代食蟹猴PBL的步骤的方法用于生成/产生/获得特异性结合SEQIDNO：02的人CD3ε且特异性结合SEQIDNO：01的多肽的人食蟹猴交叉反应性抗体的用途，没有使用原代人PBL作为免疫原且没有使用变性剂，其中该抗体特异性结合人和食蟹猴T细胞，活化人T细胞，且不与抗体OKT3(参见例如Kung,P.etal.,Science206(1979)347-349；Salmeron,A.etal.,JImmunol147(1991)3047-3052)，抗体UCHT1(参见例如Callard,R.E.etal.,ClinExpImmunol43(1981)497-505)或抗体SP34(参见例如Pessano,S.etal.,EMBOJ4(1985)337-344)结合相同表位。在一个实施方案中，本文中报告的抗体不与WO2007/042261中报告的抗体结合相同表位。在一个实施方案中，本文中报告的抗体不与WO2007/042261中报告的抗体结合相同表位且特异性结合人和食蟹猴T细胞且(/或)活化人T细胞。本文中报告的另一个方面是一种用于生成人食蟹猴交叉反应性抗体的方法，其包括给非人实验动物免疫接种作为唯一抗原的天然食蟹猴抗原的步骤。在一个实施方案中，该天然食蟹猴抗原缺少相应的人抗原中存在的一个或多个(连续)氨基酸区段，其中该缺少的相应的人抗原中的(连续)氨基酸区段之一是该人抗原的主要免疫原性表位。在一个实施方案中，该非人实验动物一次或多次免疫接种原代食蟹猴PBL，其中该PBL(任选)富集了T细胞。在一个实施方案中，该免疫接种包括作为第一步的皮内应用，作为第二步的肌肉内应用和作为第三步的皮下应用。本文中报告的另一个方面是一种用于生成特异性结合SEQIDNO：02的人CD3ε且特异性结合SEQIDNO：01的多肽的人食蟹猴交叉反应性抗体的方法，其包括给非人实验动物三次免疫接种原代食蟹猴PBL的步骤，其中该PBL(任选)富集了T细胞，没有使用原代人PBL作为免疫原且没有使用变性剂，其中该人食蟹猴交叉反应性抗体特异性结合人和食蟹猴T细胞，活化人T细胞，且不与抗体OKT3，抗体UCHT1和/或抗体SP34结合相同表位。本文中报告的另一个方面是一种特异性结合SEQIDNO：02的人CD3ε且特异性结合SEQIDNO：01的多肽的人食蟹猴交叉反应性抗体，其中该人食蟹猴交叉反应性抗体特异性结本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种包括给非人实验动物免疫接种作为唯一抗原的天然食蟹猴抗原的步骤的方法用于生成人食蟹猴交叉反应性抗体的用途。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.28 EP 14170140.9;2014.08.11 EP 14180572.11.一种包括给非人实验动物免疫接种作为唯一抗原的天然食蟹猴抗原的步骤的方法用于生成人食蟹猴交叉反应性抗体的用途。2.依照权利要求1的用途，其中该天然食蟹猴抗原缺少相应的人抗原中存在的一个或多个(连续)氨基酸区段，其中该缺少的相应的人抗原中的(连续)氨基酸区段之一是该人抗原的主要免疫原性表位。3.依照权利要求1至2的用途，其中该天然食蟹猴抗原是CD3ε且该人食蟹猴交叉反应性抗体特异性结合SEQIDNO:02的(天然)人CD3ε且特异性结合SEQIDNO:01的多肽。4.依照权利要求1至3的用途，其中给该非人实验动物一次或多次免疫接种原代食蟹猴PBL，其中该PBL任选富集了T细胞。5.依照权利要求1至4的用途，其中该免疫接种包括作为第一步的皮内应用，作为第二步的肌肉内应用和作为第三步的皮下应用。6.依照权利要求1至5的用途，其中该方法没有使用变性剂。7.依照权利要求1至6的用途，其中该人食蟹猴交叉反应性抗体特异性结合人和食蟹猴CD3ε，SEQIDNO:01的多肽且活化人T细胞。8.一种包括给非人实验动物三次免疫接种原代食蟹猴PBL的步骤的方法用于生成特异性结合SEQIDNO:02的人CD3ε且特异性结合SEQIDNO:01的多肽的人食蟹猴交叉反应性抗体的用途，其中该PBL任选富集了T细胞，没有使用原代人PBL作为免疫原且没有使用变性剂，其中该人食蟹猴交叉反应性抗体特异性结合人和食蟹猴T细胞，活化人T细胞且不与抗体OKT3，抗体UCHT1和/或抗体SP34结合相同表位。9...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·蒂芬塔勒，E·默斯纳，V·利夫克，J·普拉策，S·奥夫纳，C·耶格，M·里特尔，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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