一种制作非人灵长类动物急性缺血性脑梗死模型的方法技术

本发明专利技术涉及医疗技术领域，特别是涉及一种制作非人灵长类动物急性缺血性脑梗死模型的方法。特别的涉及一种在非人灵长类动物上建立与人类脑梗死疾病高度相似的动物疾病模型，该模型可用于脑梗死疾病的病理学，病因学，药学评价，新药研发评价，转化医学研究，影像学研究，细胞治疗研究等领域。在对人类脑梗死发病机制的研究、新药开发以及细胞生物医疗研究中具有极高的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医疗
，特别是涉及一种制作非人灵长类动物急性缺血性脑梗死模型的建立方法。
技术介绍
急性缺血性脑梗死疾病是目前全世界发病率和死亡率占首位的脑血管疾病。中国每年发病率在700万例或更多。目前除溶栓剂(tPA)之外尚未有确切有效的治疗性药物。一种简单易行、有效、零死亡率的非人灵长类动物的急性脑梗死模型是目前该类疾病的病因学、病理学、药理学以及新药开发和细胞生物医疗研究所急需和必需的。目前所采用的啮齿类动物及非人灵长类动物的相关模型均存在以下问题：(1)以往的啮齿类动物模型虽然提供了一定程度上的临床前实验研究和药物研发的动物模型。但由于模型建立的复杂性，不稳定性和高死亡率，特别是较低的人类急性脑梗死的模拟性等因素导致该模型的实际应用受到不同程度的限制。(2)特别是2009年国际脑卒中协会圆桌会议提出了新的急性脑梗死药物研发指南，指出对于急性脑梗死药物研究需要两种不同种系的动物实验模型，特别是有脑回动物模型。非人灵长类动物脑组织不论是解剖结构还是功能区域分布是最接近人类脑组织的。(3)目前常用的非人灵长类动物脑梗死模型一是通过单侧眼球摘除，暴露颅底大脑中动脉，实行动脉结扎诱导脑梗死。对动物而言模型操作显得残忍，死亡率高，并且越来越受到动物保护组织的否定，不可能成为长期使用的方法。(4)目前常用的非人灵长类动物脑梗死模型二是经过单侧颈内动脉介入方法阻塞局部大脑中动脉建立永久性缺血，建立脑梗死模型。缺点是整个操作过程需要在X-光机的条件下操作，对工作人员以及动物产生过多的负伤害，对实验场所条件要求高，极不利广泛使用。就模型本身来说不利于建立缺血再灌注诱发的脑梗死模型，与人类实际脑梗死疾病存在一定的差距。为此，我们的团队建立了一种制作非人灵长类动物的急性脑梗死模型，简便、有效、零死亡率，弥补了现有啮齿类动物及非人灵长类动物模型的诸多弊端，达到模型和病变的均一性和人类临床疾病的可转化性。为急性脑梗死疾病诸多领域的研究提供了一个稳定、可靠、有效的动物模型。同时，我们还首创了适用于中枢神经系统各类疾病的动物上肢运动和协调性的功能检测方法和模具。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题是提供一种制作非人灵长类动物急性脑梗死的模型的方法，在试验非人灵长类动物上建立与人类急性脑梗死疾病高度相似的疾病模型用于脑梗死疾病的病因学，病理学和药学评价的模型。开发一种简单易行、能广泛推广、有效、零死亡率及模型稳定的方法。本专利技术同时解决了一项客观评价中枢神经系统疾病中上肢运动能力，上肢运动协调能力的检测模具和方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用的一个技术方案是：提供一种制作非人灵长类动物急性脑梗死模型的方法，包括步骤为：(1)2-5％异氟烷吸入麻醉方式麻醉动物；(2)左(或右)侧颅骨颞叶区域外科手术备皮；(3)左侧开颅；(4)暴露左侧大脑中动脉；(5)使用外科血管夹钳夹左侧大脑中动脉，完全阻断大脑中动脉远端血流；(6)特定缺血时间后解除血管夹实现大脑中动脉再通，再建血流；(7)左侧颅腔闭合，逐层缝合皮肤以及术后护理；(8)建立动物上肢采食功能检测的行为学检测方法，对脑梗死后动物上肢的运动行为进行定性和定量检测。步骤(3)左侧开颅；(4)暴露左侧大脑中动脉；(5)使用外科血管夹钳夹左侧大脑中动脉，完全阻断大脑中动脉远端血流；(6)特定时间后解除血管夹实现大脑中动脉再通，再建血流是建立脑梗死模型的关键。在本专利技术一个较佳实施例中，步骤(6)中所述特定缺血时间为4小时，然后通过将血管夹解除实现大脑中动脉再通，实现血流再建。特定缺血时间不限定为4小时，可随实验要求更改为1小时至6小时不等。步骤(8)建立动物上肢采食功能检测的行为学检测方法是首创的应用于非人灵长类动物脑梗死以及其它的中枢神经系统疾病模型的行为学检测方法。在本专利技术一个较佳实施例中，所述动物为非人灵长类的食蟹猴和猕猴，雌雄不限，年龄不限，动物健康条件不限，即可在代谢异常的动物建立本模型。下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。以健康雄性食蟹猴为例，提供一种制作非人灵长类动物脑梗死模型的方法，包括步骤为：(1)用30mg/kg氯胺酮诱导麻醉动物；(2)动物气管插管，2.5-5％异氟烷吸入麻醉，链接人工呼吸麻醉机，建立呼吸麻醉条件下的人工呼吸管理系统，呼吸比为1∶2，频率为20次/分钟，潮气量为约300ml/kg。(3)动物左侧头部剃毛，消毒，左颅部外科手术标准备皮，逐层切开皮肤，暴露左颅骨。使用颅脑外科开颅锯在左颞叶打开直径为3-4厘米的圆窗。打开硬脑膜暴露左大脑侧裂，延裂沟钝性分离，暴露大脑中动脉。采用外科血管夹阻断大脑中动脉远端血流，实现脑缺血诱导的急性脑梗死。缺血四小时后解除血管夹，实行大脑中动脉再通，再建血流。(4)采用MoorFLPI2imagesystem(MoorInstruments，UK)设备择时扫描左侧大脑局部脑组织血流变化，记录脑组织缺血状态和血管再通后局部脑组织的血流恢复状态。血管再通30分钟后逐层关闭颅腔和闭合皮肤，恢复自主呼吸。(5)术后动物安置在37度温控毯，时时观察，直至完全清醒，返回饲养房。动物接受青霉素肌注，20万单位，每天两次，持续3天。(6)脑梗死后12，、24、48、72小时分别安乐死动物，采集脑组织，进行TTC染色，确定脑梗死部位和范围，组织病理学检测、分析。(7)脑梗梗死后24小时开始进行动物行为学检测，包括感觉神经元，运动神经元的功能检测以及上肢采食功能检测，一周内每天一次；一周后每周一次，至第四周结束，动态观察急性脑梗死后行为学变化。(8)脑梗死后72小时内外周血白细胞总数及分类监测，动态观察脑梗死后外周血各类白细胞的变化规律。(9)脑梗死后一周实行MRI检测，观察脑梗死的影响变化规律。(10)脑梗死后四周动物安乐死，进行脑组织大体和组织学病理检测。本专利技术的有益效果是：本专利技术的制作非人灵长类急性脑梗死动物模型的方法，该方法制作过程简单，限定动物的副损伤，避免长时间暴露在X-线条件下，可广泛推广，实验成果率高，病变分布均匀，结果稳定，变异小，死亡率低。在对脑梗死疾病的病因学，病理学和药学评价中具有及其重要意义。急性脑梗死动物模型广泛应用于人类脑梗死研究的模型之一，是公认的药效评价模型。非人灵长类脑梗死模型尤为重要，特别是对新兴的和正在进行的各种化学药、生物药以及细胞治疗都是不可缺少的模型。本专利技术采用外科手术方式造成大脑中动脉缺血建立急性脑梗死动物模型，符合目前脑梗死物模型制作的基本理念以及人类脑梗死发病机制。能真实模拟人类脑梗死后的各个不同时期的病理过程，特别是脑梗死后的行为学观察内容是其它啮齿类动物不可能实现的实验观察方式。模型成功率百分之百，稳定性好，死亡率为零。模型可完整的观察到脑梗死后的行为变化变化，影像学变化，脑血流变化和病理学变化。改变了目前啮齿类动物模型的诸多弊端。本专利技术具有的优点有：在实验非人灵长类动物上建立与人类脑梗死疾病高度相似的疾病模型可用于脑梗死疾病的病理学，药学评价，新药研发评价，转化医学研究本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制作非人灵长类动物急性缺血性脑梗死模型的方法，其特征为：2‑5％异氟烷吸入麻醉方式麻醉动物；左(或右)侧颅骨颞叶区域外科手术备皮；左侧开颅；暴露左侧大脑中动脉；使用外科血管夹钳夹左侧大脑中动脉，完全阻断大脑中动脉远端血流；特定缺血时间后解除血管夹实现大脑中动脉再通，再建血流；左侧颅腔闭合，逐层缝合皮肤以及术后护理；建立动物上肢采食功能检测的行为学检测方法，对脑梗死后动物上肢的运动行为进行定性和定量检测。

【技术特征摘要】
1.一种制作非人灵长类动物急性缺血性脑梗死模型的方法，其特征为：2-5％异氟烷吸入麻醉方式麻醉动物；左(或右)侧颅骨颞叶区域外科手术备皮；左侧开颅；暴露左侧大脑中动脉；使用外科血管夹钳夹左侧大脑中动脉，完全阻断大脑中动脉远端血流；特定缺血时间后解除血管夹实现大脑中动脉再通，再建血流；左侧颅腔闭合，逐层缝合皮肤以及术后护理；建立动物上肢采食功能检测的行为学检测方法，对脑梗死后动物上肢的运动行为进行定性和定量检测。2.根据权利要求1所述的制作非人灵长类动物急性缺血性脑梗死模型的方法，其特征为：左侧开颅，暴露左侧大脑中动脉，使用外科血管夹钳夹左侧大脑中动脉，完全阻断大脑中动脉远端血流，特定时间后解除血管夹实现大脑中动脉再通，再建血流。3.根据权利要求1所述的制作非人灵长类动物急性缺血性脑梗死模型的方法，其特征为：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄永杰，陈继巧，杨祖经，邹筱芳，王瑶，李骥，施婷，李敏，苏子龙，刘俊勇，唐艳红，
申请(专利权)人：南京凯斯艾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32