愈伤组织诱导培养基及其制备方法、使用方法技术

本发明专利技术提供了一种愈伤组织诱导培养基及其制备方法、使用方法。其中愈伤组织诱导培养基，培养基原料包括6‑苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、琼脂粉，以及基础培养基MS培养基。通过愈伤组织一方面可研究植物生长发育及分化的机制、遗传变异规律，对植物遗传育种具有特殊意义。另一方面可用于大规模工厂化生产有用化合物，或用于细胞培养筛选工业、农业、医药生产上有用的无性系，或用于原生质体培养中的原生质体来源等。本发明专利技术利用愈伤组织诱导培养基进行绿萝的生产，通过组织培养技术对绿萝顶芽或带节茎段进行培养与快速繁殖，繁育处的绿萝种苗品质优良，为绿萝规模化生产提供了较好的技术支持。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物组织培养的
，更具体地说，涉及一种愈伤组织诱导培养基及其制备方法、使用方法。
技术介绍
绿萝(学名:Epipremnumaureum)，属于天南星科麒麟叶属植物，大型常绿藤本，生长于热带地区，常攀援生长在雨林的岩石和树干上，其缠绕性强，气根发达，可以水培种植。绿萝是非常优良的室内装饰植物之一，攀藤观叶花卉。萝茎细软，叶片娇秀。在家具的柜顶上高置套盆，任其蔓茎从容下垂，或在蔓茎垂吊过长后圈吊成圆环，宛如翠色浮雕。这样既充分利用了空间，净化了空气，又为呆板的柜面增加了线条活泼、色彩明快的绿饰，极富生机，给居室平添融融情趣。形态特征：绿萝藤长数米，节间有气根，随生长年龄的增加，茎增粗，叶片亦越来越大。叶互生，绿色，少数叶片也会略带黄色斑驳，全缘，心形。它的花语“守望幸福”也增加了其可观赏度。环保学家发现，一盆绿萝在8～10平方米的房间内就相当于一个空气净化器，能有效吸收空气中甲醛、苯和三氯乙烯等有害气体。绿萝不但生命力顽强，而且在室内摆放，其净化空气的能力不亚于常春藤和吊兰。新铺的地板非常容易产生有害物质。由于绿萝能同时净化空气中的苯、三氯乙烯和甲醛，因此非常适合摆放在新装修好的居室中。绿萝还具有很好的药用价值，具有活血散瘀的功效。可以治疗跌打损伤。植物组织培养中要用到各种培养基。培养基是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。不同培养基可根据实际需要，添加一些自身无法合成的化合物，即生长因子。但是目前，还没有专门适合于绿萝组织培养的培养基，严重影响了对绿萝这种经典材料的研究。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术的缺陷，提供了一种愈伤组织诱导培养基，培养基原料包括6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、蔗糖、琼脂粉，以及第一基础培养基MS培养基；第一基础培养基MS培养基pH值为5.5-5.8；第一基础培养基MS培养基以MS培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整大量元素的含量为原量的1/4，微量元素为原量的1/2，调整肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇和烟酸的含量分别为：1～5mg/L、3～6mg/L、0.5～2mg/L、0.5～3mg/L，并添加精氨酸50mg/L、天冬氨酸100mg/L、谷氨酸150mg/L。在某些实施方式中，如权利要求1所述的愈伤组织诱导培养基，所述6-苄氨基腺嘌呤的浓度为2.0mg/L、萘乙酸的浓度为0.2mg/L、蔗糖20-30g/L、琼脂粉7g/L、噻苯隆0.1mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.05mg/L。本专利技术还提供了一种愈伤组织诱导培养基的制备方法，包括以下步骤：步骤一：将6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、琼脂粉分别灭菌，3-5℃保存备用；步骤二：第一基础培养基MS培养基溶解，加入6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、琼脂粉溶液，制得愈伤组织诱导培养基；步骤三：将定容好的的培养基PH调到5.5-5.8。步骤四：将配制好的培养基进行高温灭菌，制得第一愈伤组织诱导培养基。在某些实施方式中，所述步骤一中的灭菌方法为抽滤灭菌或高温灭菌；灭菌完成后20-25℃放置。在某些实施方式中，所述步骤三中高温灭菌的温度为121℃，灭菌时间为30min。本专利技术还提供了一种愈伤组织诱导培养基，培养基原料包括6-苄氨基腺嘌呤、6-糠基氨基嘌呤、萘乙酸、吲哚丁酸、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂粉，以及第二基础培养基MS培养基；第二基础培养基MS培养基pH值为5.5-5.8；第二基础培养基MS培养基是以MS培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整大量元素的含量为原量的1/2，调整肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇和烟酸的含量分别为：1～5mg/L、3～6mg/L、0.5～2mg/L、0.5～3mg/L，并添加精氨酸100mg/L、天冬氨酸50mg/L、谷氨酸200mg/L。在某些实施方式中，所述6-苄氨基腺嘌呤的浓度为3.0mg/L、6-糠基氨基嘌呤0.1mg/L、吲哚丁酸的浓度为0.1mg/L、蔗糖20-30g/L、萘乙酸0.2mg/L、琼脂粉7g/L。本专利技术还提供了一种愈伤组织诱导培养基的使用方法：将绿萝茎段消毒后在无菌条件下切割成小段，将其接种于愈伤组织诱导培养基中诱导形成愈伤组织后接种于愈伤组织的继代培养基中增殖获得致密愈伤组织。在某些实施方式中，所述诱导增殖的步骤包括：步骤一：利用第一愈伤组织诱导培养基在温度为23～25℃、湿度为50～65％的条件下，黑暗培养5～15天后给予1500～20001x光照继续培养，15～25天得到初期绿萝愈伤组织；步骤二：将初期绿萝愈伤组织转接于第二愈伤组织诱导培养基在温度为25～28℃、湿度为50～65％条件下，暗培养一周后给予光照条件20001x，继续培养，加速愈伤组织的形成。在某些实施方式中，所述绿萝茎段消毒后在无菌条件下切割成小段；小段的长度为2～3cm；常规消毒后用可溶性聚乙烯吡硌烷酮2g/L浸泡10～15分钟。本专利技术提供的愈伤组织诱导培养基相对于现有技术的有益效果是：愈伤组织一方面可研究植物生长发育及分化的机制、遗传变异规律，对植物遗传育种具有特殊意义。另一方面可用于大规模工厂化生产有用化合物，或用于细胞培养筛选工业、农业、医药生产上有用的无性系，或用于原生质体培养中的原生质体来源等。实践证明，愈伤组织培养不仅是一种植物快繁的新手段，同时也是植物改良，种质保存和有用化合物生产的理想途径。本专利技术利用愈伤组织诱导培养基进行绿萝的生产，通过组织培养技术对绿萝顶芽或带节茎段进行培养与快速繁殖，繁育处的绿萝种苗品质优良，为绿萝规模化生产提供了较好的技术支持。实验结果表明组织培养的绿萝无菌苗，可大量节约母本地，缩短生产周期，避免或减小天气等不良因素引起的病虫害。同时，以该愈伤组织诱导培养基诱导绿萝顶芽或带节茎段为繁殖材料更容易诱导成功。愈伤组织诱导培养基原料包括6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、琼脂粉，以及基础培养基MS培养基。其中，6-苄氨基腺嘌呤有味6-BA。是人工合成的细胞分裂素。6-BA具有抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质的分解，保绿防老；将氨基酸、生长素、无机盐等向处理部位调运等多种效能。其中，萘乙酸(1-NapHthaleneaceticacid)，简称NAA。萘乙酸是促进植物根系生长的植物生长调节剂，也是萘乙酰胺的中间体。萘乙酸具有促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根，增加坐果，防止落果，改变雌、雄花比率等。萘乙酸可经叶片、树枝的嫩表皮、种子进入到植物体内，随同营养流输导到作用部位。通常用于小麦、水稻、棉花、茶、桑、番茄、苹果、瓜类、马铃薯、林木等，是一种良好的植物生长刺激素。其中，蔗糖为细胞的分裂、扩大、增至提供必要的能量。琼脂粉是从植物里提取出来的藻胶。琼脂因为有特殊的胶凝性质，尤其有显着的稳固性、滞度和滞后性，并且易吸收水分，有特殊的稳定效应；具有增量剂、增稠剂、乳化剂、胶凝剂、稳定剂、赋形剂、助悬剂、水分保持剂等功效。本专利技术还提供了一种愈伤组织诱导培养基，培养基原料包括6-苄氨基腺嘌呤、6-本文档来自技高网...

【技术保护点】
第一愈伤组织诱导培养基，其特征在于：培养基原料包括6‑苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、噻苯隆、2,4‑二氯苯氧乙酸、蔗糖、琼脂粉，以及第一基础培养基MS培养基；第一基础培养基MS培养基pH值为5.5‑5.8；第一基础培养基MS培养基以MS培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整大量元素的含量为原量的1/4，微量元素为原量的1/2，调整肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇和烟酸的含量分别为：1～5mg/L、3～6mg/L、0.5～2mg/L、0.5～3mg/L，并添加精氨酸50mg/L、天冬氨酸100mg/L、谷氨酸150mg/L。

【技术特征摘要】
1.第一愈伤组织诱导培养基，其特征在于：培养基原料包括6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、蔗糖、琼脂粉，以及第一基础培养基MS培养基；第一基础培养基MS培养基pH值为5.5-5.8；第一基础培养基MS培养基以MS培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整大量元素的含量为原量的1/4，微量元素为原量的1/2，调整肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇和烟酸的含量分别为：1～5mg/L、3～6mg/L、0.5～2mg/L、0.5～3mg/L，并添加精氨酸50mg/L、天冬氨酸100mg/L、谷氨酸150mg/L。2.如权利要求1所述的第一愈伤组织诱导培养基，其特征在于：所述6-苄氨基腺嘌呤的浓度为2.0mg/L、萘乙酸的浓度为0.2mg/L、蔗糖20-30g/L、琼脂粉7g/L、噻苯隆0.1mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.05mg/L。3.如权利要求1所述的第一愈伤组织诱导培养基的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：将6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、琼脂粉分别灭菌，3-5℃保存备用；步骤二：第一基础培养基MS培养基溶解，加入6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、琼脂粉溶液，制得愈伤组织诱导培养基；步骤三：将定容好的的培养基PH调到5.5-5.8。步骤四：将配制好的培养基进行高温灭菌，制得第一愈伤组织诱导培养基。4.如权利要求3所述的愈伤组织诱导培养基的制备方法，其特征在于：所述步骤一中的灭菌方法为抽滤灭菌或高温灭菌；灭菌完成后20-25℃放置。5.如权利要求3所述的愈伤组织诱导培养基的制备方法，其特征在于：所述步骤三中高温灭菌的温度为121℃，灭菌时间为30min。6.第二愈伤组织诱导培养基，其特征在于：培...

【专利技术属性】
技术研发人员：王健，刘坤，申亮，郑德助，卢迪浩，包宇飞，李健，施金玉，
申请(专利权)人：东方上彩现代农业有限公司，
类型：发明
国别省市：海南;46