胀果甘草提取物及甘草查耳酮A的保肝活性及药物新用途制造技术

本发明专利技术公开了胀果甘草乙醇提取物及甘草查耳酮A的医药新用途。发明专利技术人发现胀果甘草与其他药用甘草存在明显的化学成分差异，继而对胀果甘草乙醇提取物及其中重要成分甘草查耳酮A的系统研究，发现其具有保护氧化型细胞损伤、组织损伤及急性化学性肝损伤的显著活性。基于以上发现，这一提取物及该活性化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药以及其混合物可用于制备治疗/预防氧化性损伤和/或急性化学性肝损伤药物及保健品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及胀果甘草乙醇提取物及甘草查耳酮A的提取方法，以及胀果甘草提取物与甘草查耳酮A的保肝药物新用途，具体涉及它们在保护氧化性肝损伤、急性肝炎导致的急性肝损伤中的应用。
技术介绍
肝脏是人体内脏中最大的实质性器官，担负解毒、储存肝糖、代谢脂质等重要生理功能，为维持机体生命活动发挥至关重要的作用。诸多因素都会对肝脏造成损伤，常见的有药物损伤、肝炎等病毒感染、酒精摄取过量、黄曲霉毒素等有毒化学物质摄入，等等。长期的肝损伤往往会导致不同程度的肝细胞坏死、脂肪变性、肝硬化甚至肝癌。因此，预防和治疗肝损伤是临床上肝病治疗的重要环节之一，是减少肝纤维化、肝坏死、肝硬化以及肝癌等疾病发生和发展的基础。临床上有许多保肝药物及方法，但由于目前的治疗手段常常存在毒副作用，各类保肝药的使用受到限制。因此，从传统天然药物中发现有效的新型保肝药物具有重要的现实意义和良好的应用前景。四氯化碳(CCl4)是一种常用的肝毒性试剂，研究表明，四氯化碳进入体内经过肝微粒体细胞色素P450酶代谢，形成三氯甲基自由基，造成脂质过氧化、氨基酸功能基团受损、核酸转化和突变，致使细胞的正常生命活动受到破坏。四氯化碳造成的急性损伤严重时可能导致动物死亡，长期的慢性损伤会造成明显的肝纤维化症状。四氯化碳造成的急性和慢性肝损伤模型广泛用于保肝药物研究。甘草(GlycyrrhizaeRadixetRhizoma)是常用中药，具有保肝、抗溃疡、抗病毒、抗氧化、抗炎、抗菌、抗疟等药理活性，含有黄酮、黄酮苷、三萜皂苷等化学成分。中国药典(2015年版)规定甘草来源于豆科植物乌拉尔甘草GlycyrrhizauralensisFisch.、胀果甘草G.inflataBat.和光果甘草G.glabraL.的干燥根和根茎。我国甘草的主流品种为乌拉尔甘草，研究较多。胀果甘草的化学成分与药理活性研究相对较少。我们的研究表明，胀果甘草与光果甘草、乌拉尔甘草提取物的低极性部位存在明显的化学成分差异，且对于一些药理模型，其活性明显优于光果甘草和乌拉尔甘草。甘草及其制剂在临床广泛地应用于保肝。然而，大多数文献并未明确地标明甘草的原植物品种(即三种甘草属植物不予区分)；少量研究虽然明确了甘草的种属，但大多来自乌拉尔甘草和光果甘草(Jung等，BMCComplemAlternM,2016,16,DOI:10.1186/s12906-016-0997-0；YinG等，FishPhysiolBiochem,2011,37,209-216)。胀果甘草提取物的保肝活性少有报道，仅有6个三萜皂苷类成分被报道在细胞模型上有较好的保肝活性(ZhengYF等，Molecules,2015,20,6273-6283)。对于胀果甘草的低极性提取物及单体成分，主要是游离酚类化合物，其保肝活性未见报道。甘草查耳酮A是胀果甘草中含量最高的游离酚类成分之一，是一种连有异戊烯基的查耳酮类化合物，被报道具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗真菌、调节免疫等多种药理活性，并经小鼠和细胞实验证实有调节肝脂质代谢的活性(QuanHY等,Fitoterapia2013,86,208-216)。甘草查耳酮A保护氧化性损伤和化学性肝损伤的活性未见报道。本专利技术公开胀果甘草提取物及甘草查耳酮A的多种保肝药理活性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有的技术及资源局限，提供了胀果甘草乙醇提取物及甘草查耳酮A保肝新用途。本专利技术之胀果甘草提取物，其特征在于，提取对象为胀果甘草的根和根茎。本专利技术之胀果甘草提取物，其特征在于，提取过程为：称取胀果甘草，粉碎。加入5～10倍体积的95％乙醇，加热回流3～4h，抽滤。滤渣按上法分别再用95％和75％乙醇提取1次。合并提取液，减压浓缩至无醇味，得总浸膏，即为胀果甘草乙醇提取物。浸膏用适量的去离子水混悬，用2～3倍量乙酸乙酯萃取4遍。回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯部位浸膏，即为胀果甘草提取物乙酸乙酯相浸膏。本专利技术人在对胀果甘草进行提取后，研究了其对Nrf2的激活作用，以及其在动物体内保护CCl4造成的急性肝损伤活性，结果显示胀果甘草提取物具有激活Nrf2的抗氧化作用，以及降低CCl4造成的急性肝炎肝损伤作用，并且降低肝损伤导致的转氨酶升高的保肝活性。本专利技术之胀果甘草提取物可用于制备具有保肝作用的药物和保健食品，在剂型方面可采用各种剂型，如片剂、颗粒剂、散剂、胶囊或丸剂等剂型。本专利技术之胀果甘草提取物可用于制备具有保肝作用的药物和保健食品，在形状方面可采用各种形状。本专利技术提供了甘草中化合物甘草查耳酮A的保肝新用途。此化合物的结构式如下：本专利技术所提供的化合物的药物新用途指化合物本身或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种，以及其混合物在制备具有如下(1)-(2)中至少一种功能的药物中的应用：(1)用于预防和治疗氧化造成的细胞损伤、组织损伤；(2)预防和治疗化学性肝损伤。以上述活性化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药以及它的混合物为有效成分制备的药物也属于本专利技术的保护范围。需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体或辅料。所述载体或辅料包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。利用上述活性化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体以及前药作为活性成分，单独或组合使用，或与其它药物、辅料等配合制备成各种剂型，包括但不限于片剂、散剂、丸剂、注射剂、胶囊剂、膜剂、栓剂、膏剂、冲剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。附图说明图1为胀果甘草药材的DNA品种鉴定结果。图2为胀果甘草、光果甘草、乌拉尔甘草乙醇提取物乙酸乙酯相浸膏的指纹图谱。图3为甘草查耳酮A的氢谱。图4为甘草查耳酮A的碳谱。图5为胀果甘草提取物和甘草查耳酮A的Nrf2激活活性。图6为胀果甘草、光果甘草、乌拉尔甘草乙醇提取物的Nrf2激活活性，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与第一批胀果甘草组比较。图7为甘草查耳酮A对HepG2、MCF7、SW480、A549四种细胞的细胞毒性。图8为胀果甘草提取物和甘草查耳酮A对四氯化碳造成的HepG2细胞急性损伤的保护活性，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组比较。图9为胀果甘草提取物和甘草查耳酮A对四氯化碳造成的小鼠急性肝损伤的保护活性，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组比较。图10为胀果甘草提取物和甘草查耳酮A对四氯化碳造成的小鼠急性肝损伤的保护活性中各组动物肝脏HE染色病理切片，其中1)对照组，2)模型组，3)阳性药组，4)甘草查耳酮A高剂量保护组，5)甘草查耳酮A低剂量保护组，6)甘草提取物高剂量保护组，7)甘草提取物低剂量保护组。具体实施方式下面结合实施例进一步阐述本专利技术，应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的保护范围。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、胀果甘草本文档来自技高网...

【技术保护点】
下式所示的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种或混合物在制备保肝药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.下式所示的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种或混合物在制备保肝药物中的应用。2.权利要求1中所述应用，其特征在于所述保护保肝活性为治疗/预防氧化性肝损伤和/或化学性肝损伤。3.权利要求2中所述应用，其特征在于，所述治疗/预防氧化性肝损伤和/或化学性肝损伤，其进一步包含医药上可接受的载体。4.具有保肝作用的胀果甘草乙醇提取物。5.权利要求4中所述应用，其特征在于，使用原料为胀果甘草的根和根茎。6.权利要求4中所述应用，其特征在于，该提取物提取方法具体步骤如下：称取胀果甘草，粉碎。加入5～10倍体积的95％乙醇，加热回流3～4h，抽滤。滤渣按上法分别再用95％和75％乙醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶敏，林燕，匡易，乔雪，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11