人源化百日咳抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及结合百日咳毒素蛋白的人源化抗体以及其作为治疗剂的用途。具体地说，本发明专利技术涉及结合百日咳毒素蛋白的改进的人源化1B7和11E6抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求2014年3月31日提交的美国临时申请号61/973,141和2014年9月5日提交的美国临时申请号62/046,403的权益，所述美国临时申请各自的内容以引用的方式整体且出于所有目的并入本文。对以ASCII文件提交的表格或计算机程序列表附件形式的“序列表”的引用书写于文件T9333-522001WO_ST25.TXT中的序列表据此以引用的方式并入，该文件创建于2015年3月31日、26,452字节、机器格式IBM-PC、MSWindows操作系统。专利
本专利技术部分涉及结合百日咳毒素蛋白的人源化抗体以及其作为治疗剂的用途。具体地说，本专利技术部分涉及源自鼠抗体1B7和11E6的结合百日咳毒素蛋白的人源化抗体。背景百日咳博德特氏杆菌(Bordetellapertussis，B.pertussis)是感染上呼吸道、引起不可控制的剧烈咳嗽的革兰氏阴性细菌。根据世界卫生组织，百日咳博德特氏杆菌感染每年造成全世界估计300,000例死亡，主要在年幼的未接种的婴儿中。患有百日咳的婴儿往往需要在儿科重症监护病房住院，并且他们的治疗通常涉及机械通气。成人中的百日咳通常导致被称为“百日咳(coughof100days)”的慢性咳嗽。百日咳的发病率由于未接种疫苗和疫苗接种不足的个体(包括尚未完全接种的婴儿)、免疫力已随时间推移减弱的个体以及无症状携带者的暴露而增加。整个美国最近的新闻报道表明，在20世纪90年代引入的百日咳疫苗不提供长期保护。不存在用于百日咳的批准的治疗。抗生素治疗对百日咳的病程不具有主要作用，因为虽然治疗可从呼吸道消除百日咳博德特氏杆菌细菌，但它不中和百日咳毒素蛋白。因此，仍然需要针对百日咳的更有效的疗法。此外，在发展中世界，获得现有百日咳疫苗(然而有缺陷的)是不一致的和非常困难的。天然存在的抗体是包含四条多肽链的多聚体蛋白。所述多肽链中的两个被称为重链(H链)，并且所述多肽链中的两个被称为轻链(L链)。免疫球蛋白重链和轻链通过链间二硫键连接。免疫球蛋白重链通过链间二硫键连接。轻链由一个可变区(VL)和一个恒定区(CL)组成。重链由一个可变区(VH)和至少三个恒定区(CH1、CH2和CH3)组成。可变区决定抗体的特异性。每个可变区包含由四个相对保守的框架区(FR)侧接的三个高变区(还称为互补决定区(CDR))。被称为CDR1、CDR2和CDR3的三个CDR促进抗体结合特异性。天然存在的抗体已被用作工程化抗体如人源化抗体的起始材料。已经开发了结合百日咳毒素蛋白的抗体，但是这些抗体在患者中的有效性是最小的或不明确的。仍然需要针对百日咳毒素蛋白的具有增加的功效和减少的副作用的改进的抗体以用作治疗剂。概述因此，在不同方面，本专利技术涉及一种或多种结合和/或中和百日咳毒素蛋白的人源化抗体以及所述抗体在治疗或预防百日咳中的用途。一方面，本专利技术涉及一种结合百日咳毒素蛋白的人源化1B7抗体。所述人源化1B7抗体包含免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区。在不同实施方案中，所述人源化1B7抗体包含免疫球蛋白重链可变区，其包含选自SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6的氨基酸序列；以及免疫球蛋白轻链可变区，其包含选自SEQIDNO：7、SEQIDNO：8、SEQIDNO：9、SEQIDNO：10、SEQIDNO：11和SEQIDNO：12的氨基酸序列。另一方面，本专利技术涉及一种结合百日咳毒素蛋白的人源化11E6抗体。所述人源化11E6抗体包含免疫球蛋白重链可变区，其包含选自SEQIDNO：13、SEQIDNO：14、SEQIDNO：15、SEQIDNO：16、SEQIDNO：17和SEQIDNO：18的氨基酸序列；以及免疫球蛋白轻链可变区，其包含选自SEQIDNO：19、SEQIDNO：20、SEQIDNO：21、SEQIDNO：22、SEQIDNO：23和SEQIDNO：24的氨基酸序列。在不同实施方案中，所述人源化1B7和11E6抗体显示改进的特性。在一个实施方案中，所述人源化1B7抗体结合百日咳毒素蛋白的KD为小于约3nM、或约2nM、或约1nM、或约0.5nM。在另一个实施方案中，所述人源化11E6抗体结合百日咳毒素蛋白的KD为小于约12nM、或约10nM、或约8nM、或约6nM、或4nM、或2nM、或约1nM、或约0.5nM。在不同实施方案中，本专利技术还提供用于制备所述人源化1B7和11E6抗体的核酸、表达载体、宿主细胞以及方法。本专利技术还提供包含所述人源化1B7和/或11E6抗体的药物组合物。一方面，本专利技术的方法涉及治疗具有百日咳博德特氏杆菌的患者，所述方法包括向所述患者施用人源化1B7抗体和/或人源化11E6抗体或包含所述一种或多种抗体的药物组合物。在一个实施方案中，人源化1B7抗体和人源化11E6抗体被共同施用至患者，从而产生协同作用。在另一个实施方案中，所述方法包括向所述患者施用人源化1B7抗体和/或人源化11E6抗体连同抗微生物剂。在另一实施方案中，本专利技术的方法涉及通过向受试者施用人源化1B7抗体和/或人源化11E6抗体或包含所述一种或多种抗体的药物组合物来在所述受试者中预防百日咳博德特氏杆菌感染。在一些实施方案中，本专利技术的方法涉及通过针对患者、包括尚待疫苗接种的婴儿预防性地施用人源化1B7抗体和/或人源化11E6抗体或包含所述一种或多种抗体的药物组合物来预防百日咳的发作。在一个实施方案中，本专利技术的方法包括降低患者中的白血细胞计数。在另一个实施方案中，本专利技术的方法包括降低患者中咳嗽的持续时间和/或频率。在另一实施方案中，本专利技术的方法包括降低患者的鼻咽和肺中百日咳博德特氏杆菌的水平。在另一个实施方案中，本专利技术的方法中和百日咳毒素蛋白。另一方面，本专利技术的方法涉及治疗具有副百日咳博德特氏杆菌的患者，所述方法包括向所述患者施用人源化1B7抗体和/或人源化11E6抗体或包含所述一种或多种抗体的药物组合物。另一方面，本专利技术的方法涉及通过向受试者施用人源化1B7抗体和/或人源化11E6抗体或包含所述一种或多种抗体的药物组合物来在所述受试者中预防副百日咳博德特氏杆菌感染。本专利技术的其他方面和实施方案将由以下详述和实施例而显而易见。附图描述图1示出在还原和非还原条件下人源化hu1B7抗体的SDSPAGE凝胶。图2示出人源化hu1B7抗体的尺寸排阻色谱。图3示出在还原和非还原条件下人源化hu11E6抗体的SDSPAGE凝胶。图4示出人源化hu11E6抗体的尺寸排阻色谱。图5示出(从左至右)人源化hu1B7A抗体(第三条线)、hu11E6A(第一条线)和两种抗体的混合物(第二条线)的尺寸排阻色谱。结果以mL对mAu进行测量，并且将所有线与预期分子量(MW，垂直黑线)进行比较。图6A至图6D示出人源化hu11E6抗体、人源化hu1B7抗体、鼠m11E6抗体和鼠m1B7抗体的绘制为温度(℃)对荧光的热解折叠。图6A示出hu11E6抗体(hu11E6-15x)的热解折叠。顶部线对应于10uMhu11E6-15x，从顶部的第二条线对应于20uMhu11E6-15x，从底部的第二条线对应于5uMhu1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合百日咳毒素蛋白的人源化1B7抗体，所述人源化1B7抗体包含免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列；以及所述免疫球蛋白轻链可变区包含选自SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.03.31 US 61/973,141;2014.09.05 US 62/046,4031.一种结合百日咳毒素蛋白的人源化1B7抗体，所述人源化1B7抗体包含免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6的氨基酸序列；以及所述免疫球蛋白轻链可变区包含选自SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12的氨基酸序列。2.一种结合百日咳毒素蛋白的人源化1B7抗体，所述人源化1B7抗体包含选自以下各项的免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区：(a)包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区和包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区；(b)包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区和包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区；(c)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区和包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区；(d)包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区和包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区；以及(e)包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区和包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。3.一种结合百日咳毒素蛋白的人源化11E6抗体，所述人源化11E6抗体包含免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含选自SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17和SEQIDNO:18的氨基酸序列；以及所述免疫球蛋白轻链可变区包含选自SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23和SEQIDNO:24的氨基酸序列。4.一种结合百日咳毒素蛋白的人源化11E6抗体，所述人源化11E6抗体包含选自以下各项的免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区：(a)包含SEQIDNO:14的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区和包含SEQIDNO:20的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区；(b)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区和包含SEQIDNO:21的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区；(c)包含SEQIDNO:16的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区和包含SEQIDNO:22的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区；(d)包含SEQIDNO:17的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区和包含SEQIDNO:23的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区；以及(e)包含SEQIDNO:18的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区和包含SEQIDNO:24的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。5.如权力要求1或2所述的抗体，其中所述抗体结合所述百日咳毒素蛋白的KD为3nM或更低。6.如权力要求3或4所述的抗体，其中所述抗体结合所述百日咳毒素蛋白的KD为12nM或更低。7.一种结合百日咳毒素蛋白的人源化1B7抗体，其中所述抗体结合所述百日咳毒素蛋白的KD为3nM或更低。8.如权利要求7所述的抗体，其中所述KD是约3nM、或约2nM、或约1nM、或约0.5nM。9.一种结合百日咳毒素蛋白的人源化11E6抗体，其中所述抗体结合所述百日咳毒素蛋白的KD为12nM或更低。10.如权利要求9所述的抗体，其中所述KD是约12nM、或约10nM、或约8nM、或约6nM、或4nM、或2nM、或约1nM、或约0.5nM。11.一种分离的核酸，其包含编码如权利要求1-10中任一项所述的免疫球蛋白重链可变区的核苷酸序列。12.一种分离的核酸，其包含编码如权利要求1-10中任一项所述的免疫球蛋白轻链可变区的核苷酸序列。13.一种表达载体，其含有如权利要求11所述的核酸。14.一种表达载体，其含有如权利要求12所述的核酸。15.如权利要求14所述的表达载体，其还包含如权利要求11所述的核酸。16.一种宿主细胞，其包含如权利要求13所述的表达载体。17.一种宿主细胞，其包含如权利要求14所述的表达载体。18.一种宿主细胞，其包含如权利要求15所述的表达载体。...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·梅纳德，A·阮，E·帕德兰，E·瓦格纳，
申请(专利权)人：德克萨斯大学系统董事会，合成生物制品公司，
类型：发明
国别省市：美国;US