一种RNA抑制剂及其在肿瘤中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种RNA抑制剂及其在肿瘤中的应用。所述RNA抑制剂具有SEQ ID NO.1所示的RNA序列。本发明专利技术提供所述的RNA抑制剂，可以用于预防肿瘤、治疗肿瘤、减小肿瘤重量、诱导肿瘤细胞凋亡和/或抑制肿瘤细胞增殖，具有治疗效果好等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，尤其涉及一种RNA抑制剂及其在肿瘤中的应用。
技术介绍
乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤,在欧美国家的发病率占女性恶性肿瘤的首位。我国虽然属乳腺癌相对低发地区,但发病率正逐年上升,在某些大城市已升至女性恶性肿瘤的首位,严重威胁着广大妇女身体健康和生活质量。乳腺癌的治疗包括手术治疗，内分泌治疗，化疗，放疗及分子靶向治疗，目前仍以根治性手术为基础。乳腺癌的靶向治疗研究已经成为乳腺癌治疗领域研究的热点。目前，乳腺癌的靶向药物主要包括两大类：HER2受体家族为靶点的药物(如曲妥珠单抗/赫赛汀、拉帕替尼等)和血管生成抑制剂(贝伐单抗/阿瓦斯汀)，其他靶向药物如法尼基转移酶抑制剂、泛素-蛋白酶通路等也相继问世。曲妥珠单抗适于HER2阳性乳腺癌的一线治疗。针对HER2新的靶向治疗药物越来越多地进入临床中，但仍有许多问题尚需解决，如HER2靶向治疗与放疗、化疗及内分泌治疗的相关性，靶向药物的耐药性、心脏毒性等。因此，迫切需要开发新的乳腺癌治疗性药物以补充或替代现有的乳腺癌治疗。MicroRNA(miRNA)是一类大约22个核苷酸的非编码小RNA，其功能主要是负调控靶基因表达，通常与目标基因的mRNA3'端非编码区互补配对诱导目标基因的翻译抑制，mRNA脱腺苷化和降解。MicroRNA-17-5p在包括乳腺癌在内的多种肿瘤中高表达，与肿瘤的发生、发展有密切关系。
技术实现思路
鉴于现有技术所存在的问题，本专利技术提供一种RNA抑制剂及其在肿瘤中的应用，可以用于预防肿瘤、治疗肿瘤、减小肿瘤重量、诱导肿瘤细胞凋亡和/或抑制肿瘤细胞增殖，具有预防和治疗效果好等优点。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种RNA抑制剂，具有SEQIDNO.1所示的RNA序列。与SEQIDNO.1所示的RNA序列具有90％同源性且具有相同或相近功能的RNA序列也在本专利技术的保护范围内。本专利技术的有益效果是：上述的RNA序列通过促进肿瘤细胞凋亡，从而具有预防和治疗肿瘤效果好等优点。在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。进一步，所述RNA抑制剂为经胆固醇修饰的且甲基化的miR-17-5p抑制剂。采取上述方案的有益效果为：通过修饰后，可以提高RNA抑制剂的稳定性，有利于效果的发挥。本专利技术提供一种编码上述的RNA抑制剂的DNA序列。本专利技术提供一种表达载体，所述表达载体包含上述的DNA序列。本专利技术提供一种宿主细胞，所述宿主细胞是一种可表达上述的RNA抑制剂的细胞。进一步，所述宿主细胞包含上述的表达载体。本专利技术提供一种上述的RNA抑制剂在预防肿瘤、治疗肿瘤、减小肿瘤重量、诱导肿瘤细胞凋亡和/或抑制肿瘤细胞增殖中的应用。所述肿瘤包括乳腺癌。尤其对乳腺癌的作用效果显著。进一步，所述肿瘤细胞为所述肿瘤细胞为MDA-MB-231细胞。本专利技术提供一种用于预防肿瘤、治疗肿瘤、减小肿瘤重量、诱导肿瘤细胞凋亡和/或抑制肿瘤细胞增殖的药物，所述药物含有上述的RNA抑制剂；或所述药物含有上述的RNA抑制剂以及药学上可接受的载体。该药物可以采用常规方法制备成相应的制剂，如可制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。针剂、溶液等可以在无菌条件下制造。本专利技术所述药物的用量和疗程可根据剂型、患者的年龄、疾病的轻重程度作适当调整，即具体施用剂量取决于多种因素，如给药方式、用药者健康状况等因素，这些都是在熟练医师技能范围内。附图说明图1为在MDA-MB-231荷瘤BALB/c-nu裸鼠肿瘤内注射合成的miR-17-5p的抑制剂，检测乳腺肿瘤生长情况，图1包括图1A和图1B。图2为miR-17-5p的抑制剂在小鼠体内抑制miR-17-5p表达，促进caspase3的活化的结果,图2包括图2A和图2B。图3为miR-17-5p的抑制剂抑制乳腺癌细胞增殖结果。图4为miR-17-5p的抑制剂促进乳腺癌细胞凋亡结果，图4包括图4A和图4B。图5为miR-17-5p的抑制剂促进乳腺癌细胞caspase-3和caspase-8活化的结果。图6为miR-17-5p促进乳腺癌细胞增殖结果。图7为miR-17-5p抑制乳腺癌细胞凋亡结果，图7包括图7A和图7B。图8为miR-17-5p抑制乳腺癌细胞caspase-3和caspase-8活化的结果。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。例如：Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。反转录试剂盒购自宝生物工程有限公司，产品目录号BK3802；CCK-8试剂盒购自日本同仁化学公司，货号：jk06642；细胞凋亡检测试剂盒购自invitrogen公司，货号：V13241；定量检测引物均在invitrogen公司合成。转染试剂lipo2000购自invitrogen，产品目录号11668019；人乳腺癌细胞MDA-MB-231(ATCCnumber：HTB-26TM)购自ATCC；BALB/c-nu裸鼠：购自北京维通利华实验动物技术有限公司。实施例1、miR-17-5p的抑制剂在抑制乳腺癌的生长中的应用一、miR-17-5p的抑制剂的获得人工合成miR-17-5p抑制剂，具有胆固醇修饰和甲基化修饰，该miR-17-5p抑制剂(包括序列的合成以及胆固醇修饰和甲基化修饰)由在广州锐博生物科技有限公司完成。miR-17-5p抑制剂的核苷酸序列为序列表中SEQIDNO.1，即cuaccugcacuguaagcacuuug。miR-17-5p抑制剂的阴性对照RNA(具有胆固醇修饰和甲基化修饰)购自广州锐博生物科技有限公司，为miRNAmimicNcontrol#22，产品信息为：基本信息：人、小鼠、大鼠通用的miRNAmimicNcontrol#22。成熟miRNA名称：cel-miR-239b-5p；成熟miRNA编号：MIMAT0000295；成熟miRNA序列：UUUGUACUACACAAAAGUACUG。miR-17-5p抑制剂与miR-17-5p抑制剂的阴性对照RNA的修饰方法相同。二、miR-17-5p的抑制剂在小鼠体内对乳腺癌生长的作用将6-8周龄的雌性BALB/c-nu裸鼠；体重相近，小鼠均约为16g，在15只小鼠右后背部皮下注射用含有7X106个MDA-MB-231细胞的0.1mlPBS悬液，当肿瘤体积达到约150mm3时，选取肿瘤大小相差不大的10只小鼠，随机分成2组，每组5只。第一组(对照组)：每只小鼠瘤内注射20nmmiR-17-5p的抑制剂的阴性对照RNA溶液50ul；每三天注射一次，共注射5次。第二组(miR-17-5p的抑制剂组)：每只小鼠瘤内注射20nmmiR-17-5p的抑制剂RNA溶液50ul；每三天注射一次，共注射5次。同时每三天用游标卡尺测量肿瘤的长径和短径，并按照公式计本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种RNA抑制剂，其特征在于，具有SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

【技术特征摘要】
1.一种RNA抑制剂，其特征在于，具有SEQIDNO.1所示的RNA序列。2.根据权利要求1所述一种RNA抑制剂，其特征在于，所述RNA抑制剂为经胆固醇修饰的且甲基化的miR-17-5p抑制剂。3.一种编码权利要求1或2所述的RNA抑制剂的DNA序列。4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包含权利要求3所述的DNA序列。5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是一种可表达权利要求1或2所述的RNA抑制剂的细胞。6.根据权利要求5所述一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求4所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟颂东，李长菲，王刚，吴博，
申请(专利权)人：和泓厦门生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35