多特异性抗体构建体制造技术

本公开内容涉及多特异性抗体分子，其包含以下部分或由其组成：a)式(I)的多肽链：VH‑CH1‑CH2‑CH3‑X‑(V1)p；和b)式(II)的多肽链：VL‑CL‑Y‑(V2)q，和例如用于治疗的包含其的药物制剂。本公开内容还提供了编码所述多特异性抗体分子的多核苷酸序列，包含所述多核苷酸的载体和包含所述载体和/或多核苷酸序列的宿主细胞。提供了从宿主细胞表达本公开内容的多特异性抗体分子的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本公开内容涉及某些多特异性抗体构建体，包含所述构建体的药物制剂，编码所述构建体的DNA和包含所述DNA的载体。本公开内容还扩展至例如在宿主细胞中表达所述构建体的方法和用于将其配制为药物组合物的方法。本公开内容还涉及多特异性抗体构建体和制剂在治疗中的用途。有许多用于产生双特异性抗体的方法，其中许多基于Morrison等最初描述的形式(Coloma和Morrison1997，NatBiotechnol.15,159-163)，涉及单链可变片段(scFv)与全抗体例如IgG或与抗体片段例如Fab或F(ab’)2的融合。US2008/0050370公开了包含“稳定的”scFv的某些双特异性抗体分子。这种类型的分子对它们特异于的抗原具有良好的结合亲和力，并且在该形式中没有发生抗原结合部位的显著堵塞。用于此类双特异性分子的scFv的VH和VL结构域使用肽接头保持在一起。然而，对于VH和VL可变结构域的某些组合，肽接头不能赋予scFv足够的稳定性，从而导致可变结构域“呼吸”和混杂的与可变结构域的分子间配对，和从而导致分子在表达期间和在纯化后通过其单链Fv部分形成多聚体的趋势。本专利技术人已重新工程化所关注的多特异性抗体分子，以提供具有等同功能性的抗体分子，同时在表达期间和在纯化后使聚集降至最低，这有助于增加获得的“单体”材料的产率，并提供在纯化、浓缩和配制后用于治疗的具有合适稳定性的分子。因此，一方面，本公开内容提供了多特异性抗体分子，其包含以下部分或由其组成：a)式(I)的多肽链:VH-CH1-CH2-CH3-X-(V1)p；和b)式(II)的多肽链:VL-CL-Y-(V2)q；其中：VH表示重链可变结构域；CH1表示重链恒定区的结构域，例如其结构域1；CH2表示重链恒定区的结构域，例如其结构域2；CH3表示重链恒定区的结构域，例如其结构域3；X表示键或接头；Y表示键或接头；V1表示dsFv、sdAb、dsscFv或scFv，例如dsFv、dsscFv或scFv；VL表示可变结构域，例如轻链可变结构域；CL表示来自恒定区的结构域，例如轻链恒定区结构域，例如Cκ；V2表示dsFv、sdAb、dsscFv或scFv，例如dsFv、dsscFv或scFv；p表示0或1；q表示0或1；其中p或q中的至少一个为1，和其中V1或V2中的至少一个是dsFv，和当V1是dsFv并且p是1并且q是0时，该分子被提供为具有两条式(I)的重链和两条缔合的式(II)的轻链的二聚体。在一个实施方案中，当V2是dsFv并且p是0且q是1时，该分子被提供为具有两条式(I)的重链和两条缔合的式(II)的轻链的二聚体。在一个实施方案中，p为1，V1为dsFv并且q为0且存在至少两条式(I)的多肽链，例如作为具有组装在Y形分子中的两条重链(式(I)的)和两条轻链(式(II)的)的全长抗体形式。在一个实施方案中，提供了多特异性抗体分子，其包含以下部分或由其组成：a)式(Ia)的多肽链:VH-CH1-CH2-CH3-X-V1；和b)式(IIa)的多肽链:VL-CL；其中：VH、CH1、CH2、CH3、X、VL、CL和V1如上所定义。当式(Ia)的多肽中的V1是dsFv时，多特异性抗体将包含编码不连接于X的相应的游离VH或VL结构域的第三多肽。该“游离可变结构域”通常在两条重链中是共同的，并且借助于二硫键与连接至X的可变结构域结合。因此，虽然经由X融合或连接至多肽的实际可变结构域在“全长抗体”形式的两条重链中可以是不同的，但是与其配对的游离可变结构域通常将彼此相同。通常，经由X融合或连接至多肽的其余部分的可变结构域在二聚体的两条重链中将是相同的。在一个实施方案中，提供了包含两个式(I)的多肽的二聚体，其中每个多肽中的V1是相同的，并且任选地还包含两个式(II)的多肽。在一个实施方案中，提供了多特异性抗体分子，其包含以下部分或由其组成：a)式(Ib)的多肽链：VH-CH1-CH2-CH3；和b)式(IIb)的多肽链：VL-CL-Y-V2；其中：VH、CH1、CH2、CH3、Y、VL、CL、Y和V2如上所定义。当式(IIb)的多肽中的V2是dsFv时，多特异性抗体将包含编码不连接于Y的相应的游离VH或VL结构域的第三多肽。该“游离可变结构域”通常在两条轻链中是共同的，并且借助于二硫键与连接至Y的可变结构域结合。因此，虽然经由Y融合或连接至多肽的实际可变结构域在“全长抗体”形式的两条轻链中可以是不同的，但是与其配对的游离可变结构域通常将彼此相同。通常，经由X融合或连接至多肽的其余部分的可变结构域在二聚体的两条轻链中将是相同的。在一个实施方案中，提供了多特异性抗体分子，其包含以下部分或由其组成：a)式(Ia)的多肽链：VH-CH1-CH2-CH3-X-V1；和b)式(IIb)的多肽链：VL-CL-Y-V2；其中：VH、CH1、CH2、CH3、Y、VL、CL、X、Y、V1和V2如上所定义。当式(Ia)和(IIb)的多肽中的V1和V2是dsFv时，多特异性抗体将包含编码不连接于Y或X的相应的游离VH或VL结构域的第三多肽。该“游离可变结构域”通常在重链和轻链中是共同的，并且借助于二硫键与连接至Y和X的可变结构域结合。因此，虽然经由X或Y融合或连接至多肽的实际可变结构域在“全长抗体”形式的重链或轻链中可以是不同的，但是与其配对的游离可变结构域通常将彼此相同。在其中p是0的一个实施方案中，X不存在。在其中q是0的一个实施方案中，Y不存在。有利地，本公开内容的多特异性抗体分子使在纯化后看到的聚集的量最小化，并且使药物浓度下的构建体的制剂中单体的量最大化，例如单体可以是50％、60％、70％或75％或更多的，例如80、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％或更多的纯化的蛋白质作为“单体”存在。专利技术详述如本文所用的“多特异性抗体”是指如本文所述的抗体分子，其具有两个或更多个结合结构域，例如两个或三个结合结构域。在一个实施方案中，抗体构建体是三特异性抗体。本文使用的“三特异性抗体”是指具有三个抗原结合部位的抗体分子，其可以独立地结合相同或不同的抗原。在一个实施方案中，构建体是双特异性抗体。本文使用的“双特异性分子”是指具有两个抗原结合部位的分子，其可以结合相同或不同的抗原。在一个实施方案中，所有结构域都结合相同的抗原，包括结合抗原上的相同表位或结合抗原上的不同表位。在一个实施方案中，存在三个结合结构域，并且三个结合结构域中的每一个结合不同(独特)的抗原。在一个实施方案中，存在三个结合结构域，并且两个结合结构域结合相同抗原，包括结合相同抗原上的相同表位或不同表位，并且第三结合结构域结合不同(独特)抗原。在一个实施方案中，本公开内容的多特异性抗体分子仅具有两个抗原结合部位。应当理解，当多特异性抗体分子二聚化以使得存在四个抗原结合部位时，它们将通常仍然仅结合两种不同的抗原。因此，在一个实施方案中，存在四个结合结构域，其中一对结合结构域结合一种抗原，并且另一对结合结构域结合第二种不同的抗原。本文使用的“抗原结合部位”是指分子的一部分，其包含一对可变区，特别是与靶抗原特异性相互作用的同源对。本文使用的结合结构域包括单结构域抗体，即可变区和抗原结合部位。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多特异性抗体分子，包含以下部分或由其组成：a)式(I)的多肽链:VH‑CH1‑CH2‑CH3‑X‑(V1)p；和b)式(II)的多肽链:VL‑CL‑Y‑(V2)q；其中：VH表示重链可变结构域；CH1表示重链恒定区的结构域，例如其结构域1；CH2表示重链恒定区的结构域，例如其结构域2；CH3表示重链恒定区的结构域，例如其结构域3；X表示键或接头；Y表示键或接头；V1表示dsFv、sdAb、dsscFv或scFv；VL表示可变结构域，例如轻链可变结构域；CL表示来自恒定区的结构域，例如轻链恒定区结构域，例如Cκ；V2表示dsFv、sdAb、dsscFv或scFv，；p表示0或1；q表示0或1；其中p或q中的至少一个为1，和其中V1或V2中的至少一个是dsFv，和当V1是dsFv并且p是1并且q是0时，该分子被提供为具有两条式(I)的重链和两条缔合的式(II)的轻链的二聚体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.26 GB 1411420.11.一种多特异性抗体分子，包含以下部分或由其组成：a)式(I)的多肽链:VH-CH1-CH2-CH3-X-(V1)p；和b)式(II)的多肽链:VL-CL-Y-(V2)q；其中：VH表示重链可变结构域；CH1表示重链恒定区的结构域，例如其结构域1；CH2表示重链恒定区的结构域，例如其结构域2；CH3表示重链恒定区的结构域，例如其结构域3；X表示键或接头；Y表示键或接头；V1表示dsFv、sdAb、dsscFv或scFv；VL表示可变结构域，例如轻链可变结构域；CL表示来自恒定区的结构域，例如轻链恒定区结构域，例如Cκ；V2表示dsFv、sdAb、dsscFv或scFv，；p表示0或1；q表示0或1；其中p或q中的至少一个为1，和其中V1或V2中的至少一个是dsFv，和当V1是dsFv并且p是1并且q是0时，该分子被提供为具有两条式(I)的重链和两条缔合的式(II)的轻链的二聚体。2.权利要求1的多特异性抗体分子，其中p是1。3.权利要求1或2的多特异性抗体分子，其中q是0。4.权利要求1或2的多特异性抗体分子，其中q是1。5.权利要求1或4中任一项的多特异性抗体分子，其中V2是dsFv。6.权利要求1或4中任一项的多特异性抗体分子，其中V2是dsscFv。7.权利要求1或6中任一项的多特异性抗体分子，其中V1是dsFv。8.权利要求1或6中任一项的多特异性抗体分子，其中V1是dsscFv。9.权利要求1至8中任一项的多特异性抗体分子，其中X是肽接头，例如SEQIDNO：1或SEQIDNO：2的序列。10.权利要求1至...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·博哈塔，E·达文，S·P·海伍德，D·P·汉弗莱斯，
申请(专利权)人：UCB生物制药私人有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE