用于检测HBs抗原的样品的预处理方法及其利用技术

本发明专利技术涉及用于检测作为B型肝炎病毒的表面抗原的HBs抗原的样品的预处理方法及利用该方法的HBs抗原的检测方法。另外，本发明专利技术涉及用于检测HBs抗原的预处理用试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2014年1月27日、申请号为201480006278.8的同名申请的分案申请。
本专利技术涉及用于检测作为B型肝炎病毒的表面抗原的HBs抗原的样品的预处理方法及利用该方法的HBs抗原的检测方法。另外，本专利技术涉及用于检测HBs抗原的预处理用试剂盒。
技术介绍
B型肝炎是由B型肝炎病毒(HBV)引起的肝脏的疾病。HBV是主要由包膜部分及核心部分构成的球状的病毒。在包膜部分存在HBs抗原，在核心部分存在基因组DNA、HBc抗原及HBe抗原等。被HBV感染，则HBs抗原被释放到宿主的血液中，其量伴随肝炎的进行而增加。所以，在B型肝炎的检查中，首先测定血液中的HBs抗原。检查的结果，当是HBs抗原阳性时，显示受试者被HBV感染。相反，当是HBs抗原阴性时，显示受试者未被HBV感染。另一方面，B型肝炎发症后，在宿主的体内产生作为HBs抗原的中和抗体的HBs抗体。通过本B型肝炎的检查中也测定HBs抗体，可研究受试者的过去的感染的有无。在临床上，当是HBs抗原阴性并且HBs抗体阳性时，被认为B型肝炎被治愈。但是，根据最近的研究得知，B型肝炎即使被治愈，HBV的基因之一部分残留在肝脏或末梢单核细胞。于是，近年知，对于过去曾被HBV感染的恶性肿瘤患者或类风湿患者使用治疗用免疫抑制剂时，HBV再活化而引起重症肝炎。那样的肝炎被称为“新生B型肝炎”，与通常的B型肝炎比，显示剧症化的频度及死亡率高。在这样的新生B型肝炎的剧症化的预防中，认为发症的初期开始治疗是有效的。为此，在其初期阶段发现病毒的再活化变得重要。但是，在再活化的初期阶段，认为不仅HBV的病毒量尚是微量，也存在患者来源的HBs抗体。患者来源的HBs抗体与HBs抗原结合而是妨碍该抗原的检测的要因，所以为了HBV的再活化的早期发现，需要非常高的灵敏度的检查。作为HBV的检测灵敏度高的检查，已知利用PCR法的检查。在此检查中，通过将HBV的DNA用PCR法扩增来检测HBV。但是，一般而言，此检查多是将待测样品送到可实施该检查的机关而进行，所以至得到检查结果需要时间。另外，检查所耗的成本也高。另一方面，由免疫学方法的HBs抗原的检查与由PCR法的检查比，至得到检查结果的时间短，另外成本也低。作为由那样的免疫学方法的HBs抗原的检测方法，例如，在专利文献1中记载了通过使用碱剂或表面活性剂等的变性剂预处理样品，使患者来源的HBs抗体变性之后，使用检测用的指定的抗HBs抗体检测HBs抗原的方法。【现有技术文献】【专利文献】专利文献1：国际公开第2006/033368号
技术实现思路
【专利技术要解决的技术课题】在由免疫学方法检测样品中的HBs抗原的方法中，受试者来源的HBs抗体成为HBs抗原的检测的妨碍，所以有将其预先灭活的必要。例如，在专利文献1中记载的方法中记载，为了使患者来源的HBs抗体变性，作为处理时的浓度，以0.25～1N的氢氧化钠有效果。另一方面，氢氧化钠也作用于HBs抗原而使变性，所以有该抗原的抗原性丧失，HBs抗原的检测灵敏度降低的情况。如HBV的再活化的初期阶段一样，当不仅HBs抗原是微量，不得不从被认为也存在受试者来源的HBs抗体的样品检测该抗原时，需求可不实质上损害HBs抗原的抗原性，使受试者来源的HBs抗体变性而灭活，并且以高的灵敏度的HBs抗原的检测的方法。本专利技术，鉴于这样的情况，以提供可不实质上损害HBs抗原的抗原性，使受试者来源的HBs抗体变性灭活，并且以高的灵敏度的HBs抗原的检测的样品的预处理方法及HBs抗原的检测方法作为目的。另外，本专利技术以提供可在那样的方法中适宜地使用的样品的预处理用试剂盒作为目的。【解决课题的技术方案】本专利技术人令人惊讶地发现，通过将含HBs抗原和受试者来源的HBs抗体的样品用终浓度0.012～0.15N的极其低的浓度的碱性物质处理，可不实质上受受试者来源的HBs抗体的影响，以高灵敏度检测HBs抗原，从而完成本专利技术。即，本专利技术提供用于检测HBs抗原的样品的预处理方法，其包括：通过将疑似含HBs抗原的样品和含有碱性物质的预处理液混合至该碱性物质的终浓度成0.012～0.15N而处理该样品的工序，将处理工序中得到的样品用含有酸性物质的试剂中和的工序。另外，本专利技术提供HBs抗原的检测方法，其包括：通过将疑似含HBs抗原的样品和含有碱性物质的预处理液混合至该碱性物质的终浓度成0.012～0.15N而处理该样品的工序，将处理工序中得到的样品用含有酸性物质的试剂中和的工序，向中和工序中得到的样品添加与HBs抗原结合的标记抗体、载体粒子、以及与HBs抗原及该载体粒子结合的第1抗体，使在上述的载体粒子上形成含HBs抗原、该标记抗体及该第1抗体的复合物的工序，选择性地回收形成工序中得到的样品中的载体粒子的工序，使回收工序中得到的载体粒子上的复合物游离，转移到与该载体粒子不同的固相的工序，测定转移工序中得到的固相上的复合物中含的标记抗体的标记的工序，基于测定工序的结果，检测疑似含上述的HBs抗原的样品中的HBs抗原的工序。再者，本专利技术提供用于检测HBs抗原的预处理用试剂盒，其含：含有碱性物质的第1试剂，和含有对于中和碱性物质而言充分的量的酸性物质的第2试剂。【专利技术效果】上述的本专利技术的样品的预处理方法及利用该方法的本专利技术的HBs抗原的检测方法可不使样品中含的检测对象的HBs抗原实质上变性而灭活妨碍HBs抗原的检测的HBs抗体。从而，由这些本专利技术的方法，即使HBs抗原是微量，且是也存在受试者来源的HBs抗体的样品，也可以良好的灵敏度检测HBs抗原。另外，本专利技术的样品的预处理用试剂盒可在那样的方法中适宜地使用。【附图说明】【图1】是显示将HBV阳性患者的血清(HBV6290-6)在碱性物质的存在下预处理，将该血清中的HBs抗原使用标记抗体检测时的结果(发光强度)的坐标图。【图2】是显示将HBV阳性患者的血清(HBV11048-6)在碱性物质的存在下预处理，将该血清中的HBs抗原使用标记抗体检测时的结果(发光强度)的坐标图。【图3】是显示将HBV阳性患者的血清(HBV6272-6)在碱性物质的存在下预处理，将该血清中的HBs抗原使用标记抗体检测时的结果(发光强度)的坐标图。【实施方式】在本说明书中，“预处理”是指，在将疑似含HBs抗原的样品供于该抗原的检测方法前，将该样品处理成对于检测适宜的状态。另外，本专利技术的样品的预处理方法，例如，可将以下说明的“处理工序”和“中和工序”用手动方法进行，或者也可将“处理工序”用手动方法进行，将“中和工序”用装置进行。在本专利技术的样品的预处理方法(以下也称为“预处理方法”)中，首先，通过将疑似含HBs抗原的样品和含有碱性物质的预处理液混合至该碱性物质的终浓度成0.012～0.15N而进行处理该样品的工序(以下也称为“处理工序”)。在此处理工序中，由预处理液中含的碱性物质的作用，样品中的HBs抗体被变性而灭活。再有，处理工序中的碱性物质的终浓度只要在上述的范围内，就不特别限定，例如，可举出0.012、0.013、0.014、0.015、0.016、0.017、0.018、0.019、0.020、0.030、0.040、0.050、0.060、0.070、0.080、0.090、0.10、0本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测HBs抗原的预处理用试剂盒，其含：含有浓度为0.024～0.3N的碱性物质的第1试剂，和含有酸性物质的第2试剂。

【技术特征摘要】
2013.01.28 JP 2013-0131671.用于检测HBs抗原的预处理用试剂盒，其含：含有浓度为0.024～0.3N的碱性物质的第1试剂，和含有酸性物质的第2试剂。2.权利要求1所述的试剂盒，其中碱性物质是强碱。3.权利要求2所述的试剂盒，其中强碱选自碱金属及碱土金属的氢氧化物、氢化物及酰胺化物中的至少1种。4.权利要求2所述的试剂盒，其中强碱是选自氢氧化钠、氢氧化钾及氢氧化镁的至少1种。5.权利要求1～4中任一项所述的试剂盒，其中所述第1试剂还含有非离子性表面活性剂。6.权利要求5所述的试剂盒，其中非离子性表面活性剂是聚氧乙烯系非离子性表面活性剂。7.权利要求6所述的试剂盒，其中所述聚氧乙烯系非离子性表面活性剂选自聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基苯基醚和聚氧乙烯山梨坦脂肪酸酯中的至少1种。8.权利要求6所述的试剂盒，其中所述聚氧乙烯系非离子性表面活性剂是聚氧乙烯烷基醚。9.权利要求1所述的试剂盒，其中第1试剂还含有离液剂。10.权利要求9所述的试剂盒，其中所述离液剂选自尿素、胍盐酸盐、水杨酸钠、硫代氰酸钠、过氯酸钠、乙酰胺及甲酰胺中的至少1种。...

【专利技术属性】
技术研发人员：山垣内孝博，高马卓也，丸木麻里，武田和彦，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP