含氟邻苯二酚结构化合物作为结核分枝杆菌抑制剂的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种含氟邻苯二酚结构化合物作为结核分枝杆菌抑制剂的应用。本发明专利技术所提供的应用具体为具有含氟邻苯二酚结构的化合物在制备治疗和/或预防因结核分枝杆菌感染引起的疾病的药物中的应用。实验证明，具有含氟邻苯二酚结构的化合物(如3-氟邻苯二酚)对结核分枝杆菌的生长具有直接的抑制作用，能够抑制巨噬细胞内结核分枝杆菌的增殖，能够提高结核杆菌感染巨噬细胞内一氧化氮的表达水平。另外，细胞毒性试验还表明，具有含氟邻苯二酚结构的化合物(如3-氟邻苯二酚)未见明显毒副作用，细胞药效学试验中，在有效剂量范围内，细胞未出现明显的毒性变化。因此，本发明专利技术将对于研发新的抗结核药物具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药及化学领域，涉及一种含氟邻苯二酚结构化合物作为结核分枝杆菌抑制剂的应用。
技术介绍
肺结核疾病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌Mycobacteriumtuberculosis(MTB)引起的呼吸道传染性疾病。我国现在是全球22个结核病高负担国家之一，结核病人数居世界第二位。多药耐药和广泛药耐药是制约抗菌药物临床使用的关键因素。抗结核药物也同样存在这些现象。最新的流行病学调查显示，在肺结核感染病例中有超过40％的结核菌对至少一种二线药物耐药。耐药结核病的治疗所需治疗周期长于普通患者，治疗费用是普通患者的100倍。因此，发现并研发新的抗结核药物对患者及其家庭、社会都有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种含氟邻苯二酚结构化合物作为结核分枝杆菌抑制剂的应用。具有含氟邻苯二酚结构的化合物在制备治疗和/或预防因结核分枝杆菌感染引起的疾病(如肺结核)的药物中的应用属于本专利技术的保护范围。具有含氟邻苯二酚结构的化合物在如下任一中的应用也属于本专利技术的保护范围：(a)制备能抑制结核分枝杆菌生长的制剂；(b)制备能抑制哺乳动物细胞内结核分枝杆菌增殖的制剂；(c)制备能提高结核分枝杆菌感染的哺乳动物细胞内一氧化氮诱导率的制剂。在本专利技术的实施例中，所述具有含氟邻苯二酚结构的化合物具体可为3-氟邻苯二酚或其可药用盐。本专利技术还请求保护一种治疗和/或预防因结核分枝杆菌感染引起的疾病的药物。所述治疗和/或预防因结核分枝杆菌感染引起的疾病(如肺结核)的药物的有效成分具体为具有含氟邻苯二酚结构的化合物(如3-氟邻苯二酚或其可药用盐)。本专利技术还请求保护具有如下功能中的至少一种的制剂；(1)能抑制结核分枝杆菌生长；(2)能抑制哺乳动物细胞内结核分枝杆菌增殖；(3)能提高结核分枝杆菌感染的哺乳动物细胞内一氧化氮诱导率的制剂。所述制剂的有效成分具体为具有含氟邻苯二酚结构的化合物。在本专利技术的实施例中，所述具有含氟邻苯二酚结构的化合物具体可为3-氟邻苯二酚或其可药用盐。在本专利技术中，所述结核分枝杆菌为牛型结核分枝杆菌，具体为牛型结核分枝杆菌BCG1173P2。在本专利技术中，所述药物或所述制剂的剂型可为乳剂、油剂、粉剂、水剂、悬浮剂、片剂、颗粒剂或胶囊剂。在本专利技术中，所述哺乳动物细胞为巨噬细胞，具体为THP-1细胞来源的巨噬细胞。在本专利技术中，所述能抑制结核分枝杆菌生长具体体现为：所述具有含氟邻苯二酚结构的化合物的浓度大于312.256μM(如312.256～624.512μM)时能抑制1.5×105CFU/mL的所述结核分枝杆菌的生长。在本专利技术中，所述能抑制巨噬细胞内结核分枝杆菌增殖具体体现为：所述具有含氟邻苯二酚结构的化合物的浓度大于4.879μM时能抑制所述巨噬细胞内所述结核分枝杆菌的增殖。在本专利技术中，所述提高结核分枝杆菌感染的巨噬细胞内一氧化氮诱导率具体体现为：所述具有含氟邻苯二酚结构的化合物的浓度大于5.0μM(如5.0-312μM)时能提高被所述结核分枝杆菌感染的所述巨噬细胞内一氧化氮的诱导率。药理试验表明，本专利技术所提供的具有含氟邻苯二酚结构的化合物——3-氟邻苯二酚具有以下药效：对结核分枝杆菌的生长具有直接的抑制作用；能够抑制巨噬细胞内结核分枝杆菌的增殖；能够提高结核杆菌感染巨噬细胞内一氧化氮的表达水平。另外，细胞毒性试验还表明，本专利技术所提供的具有含氟邻苯二酚结构的化合物——3-氟邻苯二酚未见明显毒副作用，细胞药效学试验中，在有效剂量范围内，细胞未出现明显的毒性变化。因此，本专利技术将对于研发新的抗结核药物具有重要意义。附图说明图1为供试药对结核分枝杆菌的直接抑制作用。其中，1-12依次表示浓度为624.512μM、312.256μM、156.128μM、78.064μM、39.032μM、19.516μM、9.758μM、4.879μM、2.440μM、1.220μM、0.610μM、0.305μM的化合物作用于牛型结核分枝杆菌(Mycobacteriumbovis)BCG1173P2。图中每个孔上的数值表示的是荧光值。图2为供试药对巨噬细胞内结核分枝杆菌的抑制作用。图3为供试药对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞胞内一氧化氮诱导效应的测试结果。3-FC表示3-氟邻苯二酚。图4为供试药对巨噬细胞的细胞毒性测试结果。3-FC表示3-氟邻苯二酚。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。牛型结核分枝杆菌(Mycobacteriumbovis)BCG1173P2：由哈佛医学院DeborahTanHung馈赠，BCG1173P2菌株中携带有pUV3583c-gfp质粒，能够表达绿色荧光蛋白(GFP)(参考文献：Abdel-MageedWM,RenB,etal.EndophyticStreptomycessp.Y3111fromtraditionalChinesemedicineproducedantitubercularpluramycins.ApplMicrobiolBiotechnol,2014,98:1077-85.)。THP-1细胞：ATCC编号为TIB-202。改良型1640培养基(Hyclone公司)。胎牛血清(SeraPro，USA)。Middlebrook7H9Broth(Becton,DickinsonandCompany)。佛波酯(phorbol-12-myristateacetate，PMA，碧云天生物技术研究所)。MTT(Sigma-Aldrich，USA)。DMSO(Amersico公司)。3-氟邻苯二酚(纯度>99％，Sigma-Aldrich，USA)。DAF-FMDA(NO荧光探针，碧云天生物技术研究所)。MultilabelReader(PerkinElmer，USA)。Multi-modedetectionplatform(SpectraMaxParadigm，MolecularDevices，USA)。实施例1、供试药对结核分枝杆菌的直接抑制作用供试药：3-氟邻苯二酚，Sigma-Aldrich产品，货号344656。将牛型结核分枝杆菌(Mycobacteriumbovis)BCG1173P2调整菌液浓度至OD600的读值为0.05(对应为1.5×107CFU/mL)，接种于96孔板，每孔99μL。每孔加入供试药的2倍浓度梯度稀释液1.0μL，37℃共孵育72h，系列孵育体系中供试药的终浓度由小到大依次为0.305μM、0.610μM、1.220μM、2.440μM、4.879μM、9.758μM、19.516μM、39.032μM、78.064μM、156.128μM、312.256μM、624.512μM；同时设置阳性对照利福平组(即孵育体系中有BCG1173P2菌株，但是不加入供试药，而是加入利福平)，阴性对照二甲基亚砜组(DMSO组，仅加入DMSO1μL)。将各组于MultilabelReader荧光酶标仪下检测GFP荧光值，激发波长为480nm，发射波长为535nm。实验重复三次。结果如图1所示。从图中可以看出，阴性对照二甲基亚砜组和0.305～15本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有含氟邻苯二酚结构的化合物在制备治疗和/或预防因结核分枝杆菌感染引起的疾病的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.具有含氟邻苯二酚结构的化合物在制备治疗和/或预防因结核分枝杆菌感染引起的疾病的药物中的应用。2.具有含氟邻苯二酚结构的化合物在如下任一中的应用：（a）制备能抑制结核分枝杆菌生长的制剂；（b）制备能抑制哺乳动物细胞内结核分枝杆菌增殖的制剂；（c）制备能提高结核分枝杆菌感染的哺乳动物细胞内一氧化氮诱导率的制剂。3.治疗和/或预防因结核分枝杆菌感染引起的疾病的药物，其有效成分为具有含氟邻苯二酚结构的化合物。4.具有如下功能中的至少一种的制剂，其有效成分为具有含氟邻苯二酚结构的化合物：（1）能抑制结核分枝杆菌生长；（2）能抑制哺乳动物细胞内结核分枝杆菌增殖；（3）能提高结...

【专利技术属性】
技术研发人员：张立新，马荣，代焕琴，纪增春，崔金辉，王钦钦，宋福行，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11