具有改善的药物动力学的抗C5抗体制造技术

本发明专利技术提供尤其适用于抑制末端补体(例如C5b‑9 TCC的组装和/或活性)和C5a过敏毒素介导性发炎且从而治疗补体相关病症的抗体。相对于艾库组单抗(eculizumab)，所述抗体的多种特性改善，包括例如在人体中的血清半衰期延长。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请案本案要求美国临时专利申请案第61/949,932号(2014年3月7日提申)的优先权和权益，所述申请案的披露内容以全文引用的方式并入本文中。
本专利技术的领域为医学、免疫学、分子生物学和蛋白质化学。
技术介绍
补体系统联合身体的其它免疫系统发挥作用以防御细胞和病毒病原体的侵入。存在至少25种补体蛋白质，发现这些蛋白质为一组复杂的血浆蛋白质和膜辅因子。血浆蛋白质在脊椎动物血清的球蛋白中占约10％。补体组分通过在一系列交错但精密的酶裂解和膜结合事件中相互作用来达成其免疫防御功能。所得补体级联引起具有调理素、免疫调节和溶胞功能的产物的产生。与补体活化有关的生物活性的简明概述提供于例如《默克手册(MerckManual)》第16版中。补体级联可经由经典路径(CP)、凝集素路径或替代路径(AP)进展。凝集素路径典型地经由甘露糖结合型凝集素(MBL)结合至高甘露糖底物来起始。AP可不依赖于抗体，且可由病原体表面上的某些分子起始。CP典型地通过抗体识别和结合至靶细胞上的抗原性位点起始。这些路径会合于C3转化酶(补体组分C3通过活性蛋白酶裂解而产生C3a和C3b的点)。APC3转化酶是通过血液的血浆部分中丰裕的补体组分C3的自发性水解而起始。此过程(也称为“空转”)经由C3中的硫酯键的自发性裂解而发生，从而形成C3i或C3(H2O)。支持活化C3的结合和/或具有中性或正电荷特征的表面(例如细菌性细胞表面)的存在有助于空转。C3(H2O)的这一形成允许血浆蛋白质因子B的结合，血浆蛋白质因子B的结合又允许因子D使因子B裂解成Ba和Bb。Bb片段保持结合至C3以形成含有C3(H2O)Bb的复合物(“流体相”或“起始”C3转化酶)。尽管仅少量产生，但流体相C3转化酶可使多种C3蛋白质裂解成C3a和C3b且引起C3b产生和其随后共价结合至表面(例如细菌性表面)。与表面所结合C3b结合的因子B通过因子D裂解，从而形成表面所结合的含有C3b,Bb的APC3转化酶复合物。(参见例如Müller-Eberhard(1988)《生物化学年鉴(AnnRevBiochem)》57:321-347.)。第二C3b单体添加至APC3转化酶中时，形成APC5转化酶((C3b)2,Bb)。(参见例如Medicus等人(1976)《实验医学杂志(JExpMed)》144:1076-1093和Fearon等人(1975)《实验医学杂志》142:856-863.)。第二C3b分子的作用为结合C5且呈递其供Bb裂解。(参见例如Isenman等人(1980)《免疫学杂志(JImmunol)》124:326-331.)。APC3和C5转化酶通过添加三聚体蛋白质备解素(properdin)而稳定化，如例如Medicus等人(1976)(同上)中所述。然而，备解素结合并非形成功能性替代路径C3或C5转化酶所必需。(参见例如Schreiber等人(1978)《美国国家科学院院刊(ProcNatlAcadSciUSA)》75:3948-3952和Sissons等人(1980)《美国国家科学院院刊》77:559-562)。作为C1q、C1r和C1s的复合物的补体组分C1与结合至靶抗原(例如微生物抗原)的抗体相互作用时，形成CPC3转化酶。C1的C1q部分结合至抗体-抗原复合物引起C1发生构形变化，从而活化Clr。活性C1r接着使C1相关性C1s发生裂解，藉此产生活性丝氨酸蛋白酶。活性C1s使补体组分C4裂解成C4b和C4a。如同C3b，新产生的C4b片段含有高度反应性硫醇，其容易与标靶表面(例如微生物细胞表面)上的适合分子形成酰胺或酯键。C1s也使补体组分C2裂解成C2b和C2a。由C4b和C2a形成的复合物为CPC3转化酶，其能够将C3加工成C3a和C3b。C3b单体添加至CPC3转化酶中时，形成CPC5转化酶(C4b,C2a,C3b)。(参见例如Müller-Eberhard(1988),同上；和Cooper等人(1970)《实验医学杂志》132:775-793.)C3b除其在C3和C5转化酶中的作用之外，也经由其与存在于抗原呈递细胞(如巨噬细胞和树突状细胞)表面上的补体受体的相互作用而起调理素作用。C3b的调理素功能通常视为补体系统的最重要抗感染功能之一。患有阻碍C3b功能的遗传性病变的患者倾向于被广泛多种病原性生物体感染，而后来补体级联顺序产生病变的患者(即患有阻碍C5功能的病变的患者)发现仅更倾向于发生奈瑟氏菌感染(Neisseriainfection)，接着仅在某种程度上更具倾向性。AP和CPC5转化酶使C5裂解成C5a和C5b。C5裂解而释放C5a(一种强过敏毒素和趋化因子)和C5b(允许形成溶胞性末端补体复合物C5b-9)。C5b与C6、C7和C8组合而在靶细胞表面上形成C5b-8复合物。若干个C9分子结合时，形成攻膜复合物(MAC、C5b-9、末端补体复合物-TCC)。当足够数目个MAC嵌入靶细胞膜时，其形成的开孔(MAC孔隙)介导靶细胞发生快速渗透性溶解。虽然恰当发挥功能的补体系统提供针对感染性微生物的稳固性防御，但补体路径的不当调控或活化已牵涉多种病症的发病机制，包括例如类风湿性关节炎(RA)；狼疮肾炎；哮喘；缺血再灌注损伤；非典型性溶血性尿毒综合征(aHUS)；致密沉积物疾病(DDD)；阵发性夜间血红素尿症(PNH)；黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性(AMD))；溶血、肝酶提高和低血小板(HELLP)综合征；血栓性血小板减少性紫癜(TTP)；自发性流产；少免疫性血管炎(Pauci-immunevasculitis)；大疱性表皮松解；复发性流产；多发性硬化(MS)；创伤性脑损伤；和由心肌梗塞、心肺绕通和血液透析所致的损伤。(参见例如Holers等人(2008)《免疫学评论(ImmunologicalReviews)》223:300-316.)。补体活化的下调已证明可有效治疗多种动物模型中的若干疾病适应症。参见例如Rother等人(2007)《自然生物技术(NatureBiotechnology)》25(11):1256-1264；Wang等人(1996)《美国国家科学院院刊》93:8563-8568；Wang等人(1995)《美国国家科学院院刊》92:8955-8959；Rinder等人(1995)《临床研究杂志(JClinInvest)》96:1564-1572；Kroshus等人(1995)《移植(Transplantation)》60:1194-1202；Homeister等人(1993)《免疫学杂志》150:1055-1064；Weisman等人(1990)《科学(Science)》249:146-151；Amsterdam等人(1995)《美国生理学杂志(AmJPhysiol)》268:H448-H457；和Rabinovici等人(1992)《免疫学杂志》149:17441750。
技术实现思路
本专利技术是关于具有较大改善(例如相对于用于治疗目的的已知抗C5抗体)的特征之一的抗C5抗体。举例来说，相对于艾库组单抗的血清消除半衰期，本文所述的抗C5抗体展现延长的血清半衰期。本文所述的抗体因其药物动力学特性改善而提供多种优本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的抗体或其抗原结合片段，其：(a)结合至补体组分人类C5；(b)抑制C5裂解成片段C5a和C5b；和(c)包含：(i)包含SEQ ID NO:23中所述的氨基酸序列的重链CDR1，(ii)包含SEQ ID NO:19中所述的氨基酸序列的重链CDR2，(iii)包含SEQ ID NO:3中所述的氨基酸序列的重链CDR3，(iv)包含SEQ ID NO:4中所述的氨基酸序列的轻链CDR1，(v)包含SEQ ID NO:5中所述的氨基酸序列的轻链CDR2，和(vi)包含SEQ ID NO:6中所述的氨基酸序列的轻链CDR3。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.03.07 US 61/949,9321.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其：(a)结合至补体组分人类C5；(b)抑制C5裂解成片段C5a和C5b；和(c)包含：(i)包含SEQIDNO:23中所述的氨基酸序列的重链CDR1，(ii)包含SEQIDNO:19中所述的氨基酸序列的重链CDR2，(iii)包含SEQIDNO:3中所述的氨基酸序列的重链CDR3，(iv)包含SEQIDNO:4中所述的氨基酸序列的轻链CDR1，(v)包含SEQIDNO:5中所述的氨基酸序列的轻链CDR2，和(vi)包含SEQIDNO:6中所述的氨基酸序列的轻链CDR3。2.根据权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含SEQIDNO:12中所述的重链可变区和SEQIDNO:8中所述的轻链可变区。3.根据权利要求1或2所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含变体人类Fc恒定区，所述变体人类Fc恒定区以大于所述变体人类Fc恒定区所来源的天然人类Fc恒定区的亲和力结合至人类新生儿Fc受体(FcRn)。4.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述变体人类Fc恒定区包含位置428的甲硫氨酸和位置434的天冬酰胺，其各依EU编号。5.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含SEQIDNO:13中所述的重链恒定区。6.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含重链多肽和轻链多肽，所述重链多肽包含SEQIDNO:14中所述的氨基酸序列，所述轻链多肽包含SEQIDNO:11中所述的氨基酸序列。7.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体在人体中具有至少25天的血清半衰期。8.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段在pH7.4和25℃以范围为0.1nM≤KD≤1nM的亲和力解离常数(KD)结合至人类C5。9.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段在pH6.0和25℃以≥10nM的KD结合至人类C5。10.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中[(所述抗体或其抗原结合片段在pH6.0和25℃针对人类C5的KD)/(所述抗体或其抗原结合片段在pH7.4和25℃针对人类C5的KD)]大于25。11.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其：(a)结合至补体组分人类C5；(b)抑制人类C5裂解成片段C5a和C5b；和(c)包含：(i)包含SEQIDNO:23中所述的氨基酸序列的重链CDR1，(ii)包含SEQIDNO:19中所述的氨基酸序列的重链CDR2，(iii)包含SEQIDNO:3中所述的氨基酸序列的重链CDR3，(iv)包含SEQIDNO:4中所述的氨基酸序列的轻链CDR1，(v)包含SEQIDNO:5中所述的氨基酸序列的轻链CDR2，和(vi)包含SEQIDNO:6中所述的氨基酸序列的轻链CDR3，其中[(所述抗体或其抗原结合片段在pH6.0和25℃针对人类C5的KD)/(所述抗体或其抗原结合片段在pH7.4和25℃针对人类C5的KD)]大于25，其中变体人类Fc恒定区包含位置428的甲硫氨酸和位置434的天冬酰胺，其各依EU编号，且其中所述抗体在人体中具有至少25天的血清半衰期。12.根据权利要求11所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区多肽和轻链可变区，所述重链可变区多肽包含SEQIDNO:12中所述的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQIDNO:8中所述的氨基酸序列。13.根据权利要求11所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：小布鲁斯·A·安德里安，D·L·谢里丹，P·P·坦布瑞尼，
申请(专利权)人：瑞颂医药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US