结合CD147的抗体疗法制造技术

本文公开了与抗‑CD147抗体相关或源自抗‑CD147抗体的组合物和方法。更具体地，本文公开了结合CD147的全人抗体、这类抗体的CD147‑结合片段和衍生物及包含这类片段的CD147‑结合多肽。再进一步地，本文公开了编码这类抗体、抗体片段和衍生物及多肽的核酸，包含这类多核苷酸的细胞，制备这类抗体、抗体片段和衍生物及多肽的方法，和使用这类抗体、抗体片段和衍生物及多肽的方法，包括治疗或诊断患有CD147相关障碍或病症的受试者的方法。本文还公开了用于治疗CD147‑表达肿瘤(包括肝细胞癌和和鳞状细胞癌)及选自类风湿性关节炎、实验性肺损伤、动脉粥样硬化、丙型肝炎病毒引起的慢性肝病、缺血性心肌损伤和心力衰竭的非肿瘤疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开提供了与抗-CD147抗体相关或源自抗-CD147抗体的组合物和方法。更具体地，本公开提供了结合CD147的全人抗体、这类抗体的CD147-结合片段和衍生物及包含这类片段的CD147-结合多肽。再进一步地，本公开提供了编码这类抗体、抗体片段和衍生物及多肽的核酸，包含这类多核苷酸的细胞，制备这类抗体、抗体片段和衍生物及多肽的方法，及使用这类抗体、抗体片段和衍生物及多肽的方法，包括治疗或诊断患有CD147相关障碍或病症的受试者的方法。本公开还提供了用于治疗CD147-表达肿瘤，(包括肝细胞癌和和鳞状细胞癌)及选自类风湿性关节炎、实验性肺损伤、动脉粥样硬化、丙型肝炎病毒引起的慢性肝病、缺血性心肌损伤和心力衰竭的非肿瘤疾病的方法。
技术介绍
CD147涉及许多生理功能，如淋巴细胞反应性、精子发生、移植、受精和发育早期的神经功能。CD147是受体的免疫球蛋白家族的成员。这一家族的成员在涉及许多免疫相关功能、分化和发育的细胞间通讯中发挥作用。CD147在精子发生、淋巴细胞激活、单羧酸转运蛋白(MCT)的表达中发挥作用且已经鉴别为阿尔兹海默病淀粉样β-肽产生中的γ-分泌酶复合物的调控亚基(Gabison和MourahConnectTissueRes.49:175-179,2008；Inacono等，Exp.Mol.Pathol.83:283-295,2007；Nabeshima等，Pathol.Int.56:359-367,2006；Gabison等，Biochimie87:361-368,2005和Muramatsu等，Histol.Histopathol.18:981-987,2003)。这些见解中的一些从cd147-/-小鼠的研究获得。这些动物在基质金属蛋白酶(MMP)调节、精子发生、淋巴细胞反应性和发育早期的神经功能中是缺陷的。这样的雌性小鼠由于移植和受精的失败而是不育的(Muramatsu等，Histol.Histopathol.18:981-987,2003)。CD147参与MCT-1和MCT-3至质膜的转运，因为这些转运蛋白累积的降低已经在cd147敲除小鼠的视网膜中观察到。CD147在细胞粘附中的功能作用通过其参与血脑屏障及其与整合素的相互作用支持。CD147牵涉到许多病理过程，如类风湿性关节炎、实验性肺损伤、动脉粥样硬化、丙型肝炎病毒诱导的慢性肝病、缺血性心肌损伤和心力衰竭(Gabison等Biochimie87:361-368,2005)。移植患者用CD147抗体的治疗由于T-细胞活化的抑制而是有效的(Deeg等,Blood98:2052-2058,2001)。CD147，一种免疫球蛋白(Ig)超家族的跨膜蛋白在不同物种中独立地鉴别并在不同物种之间具有许多命名，如M6、Neurothelin、5A11、HT7、OX-47、CE9、EMMPRIN、Basigin和gp42(Kasinrerk等J.Immunol.149:847-854,1992；Altruda等Gene85:445-451,1989；Miyauchi等,J.Biochem.107:316-323,1990；Seulberger等EMBOJ.9:2151-2158,1990和Fossum等,Eur.J.Immunol.21:671-679,1991)。最常见的标准异形体是由21氨基酸的信号序列、186残基长的细胞外结构域(由两个Ig样结构域组成)、21氨基酸的跨膜结构域和41残基的胞质结构域构成的单链I型跨膜分子。跨膜区带有亮氨酸拉链和带电残基(谷氨酸)。对应基因位于染色体19p13.3上并编码29kDa骨架蛋白。已经鉴别了三个N糖基化位点，且在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上的迁移根据糖基化程度在39和65kDa之间发生。CD147在造血和非造血细胞如单核细胞、粒细胞、上皮细胞和内皮细胞上具有宽表达谱。弱表达在静息T淋巴细胞上注意到，而表达在激活的T淋巴细胞和单核细胞上增加(Kasinrerk等J.Immunol.149:847-854,1992；Altruda等Gene85:445-451,1989；Miyauchi等J.Biochem.107:316-323,1990；Seulberger等EMBOJ.9:2151-2158,1990；Fossum等,Eur.J.Immunol.21:671-679,1991和Ochrietor等Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.44:4086-4096,2003)。跨膜序列的氨基酸序列如上所述在所有列出的物种之间的完美保守性(Iacono等Exp.Mol.Pathol.83:283-295,2007)是显著的特征，其包括保守的谷氨酸残基的存在。这一发现表明跨膜氨基酸参与质膜内的蛋白质-蛋白质相互作用。胞质结构域比细胞外结构域更保守，指出了关于与位于胞质中的蛋白质的保守蛋白质-蛋白质相互作用的类似考虑。CD147表达通过RNAi的抑制导致体外显著降低的血管生成。CD147可以通过几种机制(包括增殖、存活、MMP分泌和磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B(PBK/Akt)激活)调节血管生成。在几种癌细胞系中，CD147鉴别为抗凋亡功能和化疗抗性的介质。在HO-8910卵巢癌细胞中，CD147RNAi减少肿瘤细胞侵入、致肿瘤性和对紫杉醇的化疗敏感性(Zou等CancerLett.248:211-218,2007)。CD147的上调在几种多药抗性癌细胞系中观察到(Toole等DrugResist.Update11:110-121,2008)。独立地，报告了CD147参与癌细胞对多种化疗剂的抗性(Li等Cell.Mol.LifeSci.66:504-515,2009)。另外，CD147鉴别为以透明质酸依赖性的方式促进肿瘤细胞的非雄激素依赖性生长的受体(Marieb等CancerRes.64:1229-1232,2004)。在人口腔鳞状细胞癌细胞(SCC)中，CD147-指导的RNAi减少X-染色体连锁凋亡蛋白抑制剂(XIAP)表达和提高对5-氟尿嘧啶的化疗敏感性(Kuang等CancerLett.276:189-195,2009)。在乳腺癌细胞素中，其显示CD147赋予对失巢凋亡(anoikis)的抗性，如通过半胱天冬酶的激活证明的。针对与不同表位的CD147相互作用的许多mAb已经建立(Koch等Int.Immunol.11:777-786,1999)。大多数抗体仅结合植物凝集素(PHA)刺激的T-细胞，不结合静息T-细胞。这一现象通过低亲和力抗体对激活的T-细胞上的簇集CD147分子的二价结合而不是通过在激活的T-细胞上特别展示的新表位(neoepitopes)来解释。高亲和力抗体能够在单价方式结合静息T-细胞，其是CD147的低表达者。通过低亲和力抗体的二聚化诱导导致CD3-介导的T-细胞激活的抑制。高亲和力mAbMEM-M6/6(识别独特表位)抑制T细胞激活80％，且如前节中概述的，也抑制结肠癌和黑素瘤细胞而不是非转化的成纤维细胞的增殖(Baba等Biochem.Biophys.Res.Commun.374:111-116,200本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以至少10‑6M的结合亲和力结合CD147表位的IgG类的全人抗体，其具有与选自以下的氨基酸序列至少95％相同的重链可变域：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其组合，且具有与以下的氨基酸序列至少95％相同的轻链可变域：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其组合。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.16 US 61/980,5441.一种以至少10-6M的结合亲和力结合CD147表位的IgG类的全人抗体，其具有与选自以下的氨基酸序列至少95％相同的重链可变域：SEQIDNO.1、SEQIDNO.3、SEQIDNO.5、SEQIDNO.7、SEQIDNO.9、SEQIDNO.11、SEQIDNO.13、SEQIDNO.15、SEQIDNO.17、SEQIDNO.19、SEQIDNO.21、SEQIDNO.23、SEQIDNO.26、SEQIDNO.28、SEQIDNO.30、SEQIDNO.34、SEQIDNO.36、SEQIDNO.38、SEQIDNO.41、SEQIDNO.43、SEQIDNO.46、SEQIDNO.48、SEQIDNO.50、SEQIDNO.53、SEQIDNO.56、SEQIDNO.59、SEQIDNO.62及其组合，且具有与以下的氨基酸序列至少95％相同的轻链可变域：SEQIDNO.2、SEQIDNO.4、SEQIDNO.6、SEQIDNO.8、SEQIDNO.10、SEQIDNO.12、SEQIDNO.14、SEQIDNO.16、SEQIDNO.18、SEQIDNO.20、SEQIDNO.22、SEQIDNO.24、SEQIDNO.25、SEQIDNO.27、SEQIDNO.29、SEQIDNO.31、SEQIDNO.32、SEQIDNO.33、SEQIDNO.35、SEQIDNO.37、SEQIDNO.39、SEQIDNO.40、SEQIDNO.42、SEQIDNO.44、SEQIDNO.45、SEQIDNO.47、SEQIDNO.49、SEQIDNO.51、SEQIDNO.52、SEQIDNO.54、SEQIDNO.55、SEQIDNO.57、SEQIDNO.58、SEQIDNO.60、SEQIDNO.61、SEQIDNO.63及其组合。2.如权利要求1所述的全人抗体，其中所述抗体具有选自以下的重链/轻链可变域序列：SEQIDNO.1/SEQIDNO.2(本文中称为C4R1A2)、SEQIDNO.3/SEQIDNO.4(本文中称为C4R1A5)、SEQIDNO.5/SEQIDNO.6(本文中称为C4R1A6)、SEQIDNO.7/SEQIDNO.8(本文中称为C4R1A8)、SEQIDNO.9/SEQIDNO.10(本文中称为C4R1A9)、SEQIDNO.11/SEQIDNO.12(本文中称为C4R1B2)、SEQIDNO.13/SEQIDNO.14(本文中称为C4R1C10)、SEQIDNO.15/SEQIDNO.16(本文中称为C4R1C11)、SEQIDNO.17/SEQIDNO.18(本文中称为C4R1C3)、SEQIDNO.19/SEQIDNO.20(本文中称为C4R1D11)、SEQIDNO.21/SEQIDNO.22(本文中称为C4R1F12)、SEQIDNO.13/SEQIDNO.25(本文中称为C4R1G1)、SEQIDNO.26/SEQIDNO.27(本文中称为C4R1G4)、SEQIDNO.28/SEQIDNO.29(本文中称为C4R1G7)、SEQIDNO.30/SEQIDNO.31(本文中称为C4R1H10)、SEQIDNO.13/SEQIDNO.32(本文中称为C4R1H11)、SEQIDNO.13/SEQIDNO.33(本文中称为C4R1H4)、SEQIDNO.34/SEQIDNO.35(本文中称为C4sh1Al)、SEQIDNO.36/SEQIDNO.37(本文中称为C4sh1A2)、SEQIDNO.38/SEQIDNO.39(本文中称为C4sh1A3)、SEQIDNO.38/SEQIDNO.40(本文中称为C4sh1A4)、SEQIDNO.41/SEQIDNO.42(本文中称为C4sh1A5)、SEQIDNO.43/SEQIDNO.44(本文中称为C4sh1A6)、SEQIDNO.38/SEQIDNO.45(本文中称为C4sh1A9)、SEQIDNO.46/SEQIDNO.47(本文中称为C4sh1B10)、SEQIDNO.48/SEQIDNO.49(本文中称为C4sh1B11)、SEQIDNO.50/SEQIDNO.51(本文中称为C4sh1B2)、SEQIDNO.38/SEQIDNO.52(本文中称为C4sh1C10)、SEQIDNO.53/SEQIDNO.54(本文中称为C4sh1C5)、SEQIDNO.41/SEQIDNO.54(本文中称为C4sh1C6)、SEQIDNO.56/SEQIDNO.57(C4sh1E10)、SEQIDNO.38/SEQIDNO.58(本文中称为C4sh1E12)、SEQIDNO.59/SEQIDNO.60(本文中称为C4sh1F11)、SEQIDNO.38/SEQIDNO.61(本文中称为C4sh1G4)、SEQIDNO.62/SEQIDNO.63(本文中称为C4sh1H9)及其组合。3.一种Fab全人抗体片段，具有来自重链的可变域区域和来自轻链的可变域区域，其中所述重链可变域序列与选自以下的氨基酸序列至少95％同一：SEQIDNO.1、SEQIDNO.3、SEQIDNO.5、SEQIDNO.7、SEQIDNO.9、SEQIDNO.11、SEQIDNO.13、SEQIDNO.15、SEQIDNO.17、SEQIDNO.19、SEQIDNO.21、SEQIDNO.23、SEQIDNO.26、SEQIDNO.28、SEQIDNO.30、SEQIDNO.34、SEQIDNO.36、SEQIDNO.38、SEQIDNO.41、SEQIDNO.43、SEQIDNO.46、SEQIDNO.48、SEQIDNO.50、SEQIDNO.53、SEQIDNO.56、SEQIDNO.59、SEQIDNO.62及其组合，且具有与由以下组成的氨基酸序列至少95％同一的轻链可变域序列：SEQIDNO.2、SEQIDNO.4、SEQIDNO.6、SEQIDNO.8、SEQIDNO.10、SEQIDNO.12、SEQIDNO.14、SEQIDNO.16、SEQIDNO.18、SEQIDNO.20、SEQIDNO.22、SEQIDNO.24、SEQIDNO.25、SEQIDNO.27、SEQIDNO.29、SEQIDNO.31、SEQIDNO.32、SEQIDNO.33、SEQIDNO.35、SEQIDNO.37、SEQIDNO.39、SEQIDNO.40、SEQIDNO.42、SEQIDNO.44、SEQIDNO.45、SEQIDNO.47、SEQIDNO.49、SEQIDNO.51、SEQIDNO.52、SEQIDNO.54、SEQIDNO.55、SEQIDNO.57、SEQIDNO.58、SEQIDNO.60、SEQIDNO.61、SEQIDNO.63及其组合。4.权利要求3所述的全人抗体Fab片段，其中所述抗体具有选自以下的重链/轻链可变域序列：SEQIDNO.1/SEQIDNO.2、SEQIDNO.3/SEQIDNO.4、SEQIDNO.5/SEQIDNO.6、SEQIDNO.7/SEQIDNO.8、SEQIDNO.9/SEQIDNO.10、SEQIDNO.11/SEQIDNO.12、SEQIDNO.13/SEQIDNO.14、SEQIDNO.15/SEQIDNO.16、SEQIDNO.17/SEQIDNO.18、SEQIDNO.19/SEQIDNO.20、SEQIDNO.21/SEQIDNO.22、SEQIDNO.13/SEQIDNO.25、SEQIDNO.26/SEQIDNO.27、SEQIDNO.28/SEQIDNO.29、SEQIDNO.30/SEQIDNO.31、SEQIDNO.13/SEQIDNO.32、SEQIDNO.13/SEQIDNO.33、SEQIDNO.34/SEQIDNO.35、SEQIDNO.36/SEQIDNO.37、SEQIDNO.38/SEQIDNO.39、SEQIDNO.38/SEQIDNO.40、SEQIDNO.41/SEQIDNO.42、SEQIDNO.43/SEQIDNO.44、SEQIDNO.38/SEQIDNO.45、SEQIDNO.46/SEQIDNO.47、SEQIDNO.48/SEQIDNO.49、SEQIDNO.50/SEQIDNO.51、SEQIDNO.38/SEQIDNO.52、SEQIDNO.53/SEQIDNO.54、SEQIDNO.41/SEQIDNO.54、SEQIDNO.56/SEQIDNO.57、SEQIDNO.38/SEQIDNO.58、SEQIDNO.59/SEQIDNO.60、SEQIDNO.38/SEQIDNO.61、SEQIDNO.62/SEQIDNO.63及其组合。5.一种单链人抗体，其具有来自重链的可变域区域和来自轻链的可变域区域及连接所述重链和轻链可变域区域的肽接头，其中所述重链可变域序列与选自以下的氨基酸序列至少95％同一：SEQIDNO.1、SEQIDNO.3、SEQIDNO.5、SEQIDNO.7、SEQIDNO.9、SEQIDNO.11、SEQIDNO.13、SEQIDNO.15、SEQIDNO.17、SEQIDNO.19、SEQIDNO.21、SEQIDNO.23、SEQIDNO.26、SEQIDNO.28、SEQIDNO.30、SEQIDNO.34、SEQIDNO.36、SEQIDNO.38、SEQIDNO.41、SEQIDNO.43、SEQIDNO.46、SEQIDNO.48、SEQIDNO.50、SEQIDNO.53、SEQIDNO.56、SEQIDNO.59、SEQIDNO.62及其组合，且具有与由以下组成的氨基酸序列至少95％同一的轻链可变域序列：SEQIDNO.2、SEQIDNO.4、SEQIDNO.6、SEQIDNO.8、SEQIDNO.10、SEQIDNO.12、SEQIDNO.14、SEQIDNO.16、SEQIDNO.18、SEQIDNO.20、SEQIDNO.22、SEQIDNO.24、SEQIDNO.25、SEQIDNO.27、SEQIDNO.29、SEQIDNO.31、SEQIDNO.32、SEQIDNO.33、SEQIDNO.35、SEQIDNO.37、SEQIDNO.39、SEQIDNO.40、SEQIDNO.42、SEQIDNO.44、SEQIDNO.45、SEQIDNO.47、SEQIDNO.49、SEQIDNO.51、SEQIDNO.52、SEQIDNO.54、SEQIDNO.55、SEQIDNO.57、SEQIDNO.58、SEQIDNO.60、SEQIDNO.61、SEQIDNO.63及其组合。6.权利要求5所述的全人单链抗体，其中所述单链全人抗体具有选自以下的重链/轻链可变域序列：SEQIDNO.1/SEQIDNO.2、SEQIDNO.3/SEQIDNO.4、SEQIDNO.5/SEQIDNO.6、SEQIDNO.7/SEQIDNO.8、SEQIDNO.9/SEQIDNO.10、SEQIDNO.11/SEQIDNO.12、SEQIDNO.13/SEQIDNO.14、SEQIDNO.15/SEQIDNO.16、SEQIDNO.17/SEQIDNO.18、SEQIDNO.19/SEQIDNO.20、SEQIDNO.21/SEQIDNO.22、SEQIDNO.13/SEQIDNO.25、SEQIDNO.26/SEQIDNO.27、SEQIDNO.28/SEQIDNO.29、SEQIDNO.30/SEQIDNO.31、SEQIDNO.13/SEQIDNO.32、SEQIDNO.13/SEQIDNO.33、SEQIDNO.34/SEQIDNO.35、SEQIDNO.36/SEQIDNO.37、SEQIDNO.38/SEQIDNO.39、SEQIDNO.38/SEQIDNO.40、SEQIDNO.41/SEQIDNO.42、SEQIDNO.43/SEQIDNO.44、SEQIDNO.38/SEQIDNO.45、SEQIDNO.46/SEQIDNO.47、SEQIDNO.48/SEQIDNO.49、SEQIDNO.50/SEQIDNO.51、SEQIDNO.38/SEQIDNO.52、SEQIDNO.53/SEQIDNO.54、SEQIDNO.41/SEQIDNO.54、SEQIDNO.56/SEQIDNO.57、SEQIDNO.38/SEQIDNO.58、SEQIDNO.59/SEQIDNO.60、SEQIDNO.38/SEQIDNO.61、SEQIDNO.62/SEQIDNO.63及其组合。7.权利要求5所述的全人单链抗体，其中所述全人单链抗体具有重链可变域区域和轻链可变域区域两者，其中所述单链全人抗体具有选自以下的重链/轻链可变域序列：SEQIDNO.1/SEQIDNO.2、SEQIDNO.3/SEQIDNO.4、SEQIDNO.5/SEQIDNO.6、SEQIDNO.7/SEQIDNO.8、SEQIDNO.9/SEQIDNO.10、SEQIDNO.11/SEQIDNO.12、SEQIDNO.13/SEQIDNO.14、SEQIDNO.15/SEQIDNO.16、SEQIDNO.17/SEQIDNO.18、SEQIDNO.19/SEQIDNO.20、SEQIDNO.21/SEQIDNO.22、SEQIDNO.13/SEQIDNO.25、SEQIDNO.26/SEQIDNO.27、SEQIDNO.28/SEQIDNO.29、SEQIDNO.30/SEQIDNO.31、SEQIDNO.13/SEQIDNO.32、SEQIDNO.13/SEQIDNO.33、SEQIDNO.34/SEQIDNO.35、SEQIDNO.36/SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·格罗斯，H·周，
申请(专利权)人：索伦托治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US