PBMC白膜层快速提取法制造技术

本发明专利技术公开了PBMC白膜层快速提取法，包括如下步骤：从全血中提取灰黄层；将灰黄层加入到淋巴分离液中离心处理，离心转速为1500‑2000rpm，离心力升速设置成5‑8成制动，离心力降速设置成5‑8成制动；离心15‑20min后提取白膜层。本发明专利技术制品白膜层质量好，提取效率高，且方法简单，耗时短，耗材少，成本低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及PBMC白膜层提取
，尤其涉及PBMC白膜层快速提取法。
技术介绍
当前PBMC实验方法主要采用以手动操作配合定时定速离心为主，或辅助一些新开发的特制筛网和离心管进行操作。而PBMC试验方法的单核淋巴细胞(俗称白膜层)提取尤为关键，然而目前常用的实验方法普遍存在离心时间长，辅助的特制耗材又增加了额外的实验成本，使得PBMC实验方法的实验操作难上加难。目前现有的方法中，申请号CN201510768205.9《一种分离PBMC的方法》公开了白膜层提取采用15～18℃，500～1000g，离心力升降速为0的条件下离心20～30min的方法。在申请号CN201510664306《带筛板分离提取PBMC的细胞分离管》和申请号CN201420466315.0《一种用于分离提取PBMC的细胞分离管》的申请专利中，均采用了实验特制耗材，包括特制带筛板的离心管和特制离心管，增加了额外的实验成本。另外PBMC白膜层提取方法也有采用手动操作辅助定时定速离心的形式进行，如在温度20℃，离心力800g，离心时间25min，加减速为0；室温，离心速度2000rpm，离心时间25min，降速设置nobreak，或只有1-2成的制动；室温，离心速度1500rpm，离心时间30min，加减速均为0等的条件下提取薄膜层。纵观以上方法可以发现，当前PBMC白膜层提取方法均存在实验耗时长，白膜层提取困难等诸多缺点，并且白膜层质量很难保证，然而若采用特制筛板或特制离心管以简化实验操作，缩短实验时间，则又增加了额外的实验成本。
技术实现思路
本专利技术提出了PBMC白膜层快速提取法，制品白膜层质量好，提取效率高，且方法简单，耗时短，耗材少，成本低。本专利技术提出的PBMC白膜层快速提取法，包括如下步骤：S1、从全血中提取灰黄层；S2、将灰黄层加入到淋巴分离液中离心处理，离心转速为1500-2000rpm，离心力升速设置成5-8成制动，离心力降速设置成5-8成制动；S3、离心15-20min后提取白膜层。优选地，所述的PBMC白膜层快速提取法，包括如下步骤：S1、将全血离心提取灰黄层；S2、将灰黄层加入到淋巴分离液中离心处理，离心转速为1600-1800rpm，升速、降速均设置为5-7成制动；S3、离心18-20min后提取白膜层。优选地，所述的PBMC白膜层快速提取法，包括如下步骤：S1、将全血离心提取灰黄层；S2、将灰黄层加入到淋巴分离液中离心处理，其离心转速为1600rpm，升速、降速均设置为6成制动；S3、室温下离心20min后提取白膜层。优选地，在S2中，离心处理所采用离心机为ThermoST40R离心机。在现有技术中，在升速、降速采用1-2成制动的前提下，不仅时间长，分离不彻底，而且本领域技术人员认为，超过1-2成制动的速度下，会发生细胞破碎，而专利技术人惊奇的发现采用5-8成制动，不仅细胞不易破碎，且分离更彻底，同时减少了白膜层提取的时间。本专利技术通过合理控制离心转速、离心力升降速、离心时间，可有效缩短了PBMC白膜层获取的离心时间，离心时间可缩短至20min以下，获得的白膜层与下层淋巴分离液分层明显，且质量稳定，淋巴细胞获得率大幅提升，本申请方法的获得率均可达到80％以上，而一般方法的获得率仅在40％～66％。具体实施方式下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。实施例1PBMC白膜层快速提取法，包括如下步骤：S1、从全血中提取灰黄层；S2、将灰黄层加入到淋巴分离液中离心处理，离心转速为1500rpm，离心力升速设置成8成制动，离心力降速设置成5成制动；S3、离心20min后提取白膜层。实施例2PBMC白膜层快速提取法，包括如下步骤：S1、从全血中提取灰黄层；S2、将灰黄层加入到淋巴分离液中离心处理，离心转速为2000rpm，离心力升速设置成5成制动，离心力降速设置成8成制动；S3、离心15min后提取白膜层。实施例3PBMC白膜层快速提取法，包括如下步骤：S1、将全血离心提取灰黄层；S2、将灰黄层加入到淋巴分离液中离心处理，离心转速为1600rpm，升速、降速均设置为7成制动，离心处理所采用离心机为ThermoST40R离心机；S3、离心18min后提取白膜层。实施例4PBMC白膜层快速提取法，包括如下步骤：S1、将全血离心提取灰黄层；S2、将灰黄层加入到淋巴分离液中离心处理，离心转速为1800rpm，升速、降速均设置为5成制动，离心处理所采用离心机为ThermoST40R离心机；S3、离心20min后提取白膜层。实施例5PBMC白膜层快速提取法，包括如下步骤：S1、将全血离心提取灰黄层；S2、将灰黄层加入到淋巴分离液中离心处理，其离心转速为1600rpm，升速、降速均设置为6成制动，离心处理所采用离心机为ThermoST40R离心机；S3、室温下离心20min后提取白膜层。将采用实施例5的方法与普通方法1、2、3的淋巴细胞获得率进行对比，其中：普通方法1：20℃，离心力为800g，离心时间25min，加减速制动均为0；普通方法2：室温，离心速度2000rpm，离心时间25min，加速与降速均为2成制动；普通方法3：室温，离心速度1500rpm，离心时间30min，加减速制动均为0；测试结果如下表1所示；表1不同方法间淋巴细胞获得率的比较其中，离心淋巴细胞数理论值为相关体检指标乘以PBMC实验中所用血量后的结果。上述结果表明，本申请可有效缩短PBMC白膜层获取的离心时间，提高实验效率，且获得的白膜层与下层淋巴分离液分层明显，且质量稳定，淋巴细胞获得率大幅提升。以上所述，仅为本专利技术较佳的具体实施方式，但本专利技术的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术揭露的技术范围内，根据本专利技术的技术方案及其专利技术构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
PBMC白膜层快速提取法，其特征在于，包括如下步骤：S1、从全血中提取灰黄层；S2、将灰黄层加入到淋巴分离液中离心处理，离心转速为1500‑2000rpm，离心力升速设置成5‑8成制动，离心力降速设置成5‑8成制动；S3、离心15‑20min后提取白膜层。

【技术特征摘要】
1.PBMC白膜层快速提取法，其特征在于，包括如下步骤：S1、从全血中提取灰黄层；S2、将灰黄层加入到淋巴分离液中离心处理，离心转速为1500-2000rpm，离心力升速设置成5-8成制动，离心力降速设置成5-8成制动；S3、离心15-20min后提取白膜层。2.根据权利要求1所述的PBMC白膜层快速提取法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将全血离心提取灰黄层；S2、将灰黄层...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱鹏，赵依妮，许国贞，刘振云，
申请(专利权)人：安徽未名细胞治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34