受体靶向构造物和其使用制造技术

本文公开药物递送分子，其包括：配体，其靶向细胞表面分子；膜渗透结构域；和有效负载结合结构域；以及公开了包含所述药物递送分子的药物组合物。还公开了在有需要的受试者中治疗癌症、抑制癌症的进展、预防癌症转移、和向脑部递送治疗性化合物，所述方法包括：鉴别需要该方法的受试者；提供包含本文公开的药物递送分子的组合物；以及向所述受试者施用有效量的所述组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请本申请请求LaliK.MEDINA-KAUWE等人于2014年1月17日提交的且名称为“c-METTARGETINGCONSTRUCTANDUSESTHEREOF”的美国临时申请系列号61/928,903，该专利的全部公开内容(包括附图)以引用的方式并入本文。政府权利本文公开的主题是在国家健康研究所/国家癌症研究所授予的基金CA140995和CA129822下由政府支助所进行。政府对所公开主题具有某些权利。专利
本专利技术涉及生物技术的领域。特定而言，本专利技术涉及将治疗剂递送至靶细胞(诸如癌细胞)的组合物。专利技术背景抵抗临床中所用的当前靶向治疗或获得对该其靶向治疗的耐受性的许多肿瘤显示出蛋白质(诸如c-Met)的表面水平升高。例如，肺癌获得对EGF-R抑制剂(诸如Tarceva)的耐受性。诸如Tarceva之类抑制剂旨在阻断受体酪氨酸激酶的活性(称为酪氨酸激酶抑制剂，或TKI's)，但大多数情况对TK抑制不响应。这些肿瘤的特征在于细胞表面蛋白质(诸如c-Met)水平升高，并且因此变成用于本文所述治疗方法的极好候选者，该方法可靶向过表达蛋白质并且渗透肿瘤细胞。本领域中，目前正试图研发出旨在阻断通过c-Met的信号的c-Met抗体或抑制剂。然而，过往历史表明大多数情况将对信号阻断抗体或小分子无响应，因为该肿瘤采用替代性方式来连续增生，而不论信号抑制如何。本文所述组合物规避了使用细胞表面受体(例如c-Met)作为入口来将毒性分子递送至肿瘤细胞中并且从内部杀死肿瘤以便阻断信号的需要。配体导向递送允许靶向结合至对特定细胞表面受体(例如c-Met)呈阳性的肿瘤，并且递送分子中的膜渗透结构域允许在细胞表面受体介导的胞吞作用之后跨体内膜进行渗透和溶解。递送蛋白经改性以通过(例如)离子相互作用来与某些治疗性分子组装并且运送所述某些治疗性分子。专利技术概述本文公开的是药物递送分子，其包括：配体，其靶向细胞表面分子；膜渗透结构域；和有效负载结合结构域；以及包含所述药物递送分子的药物组合物。还公开了在有需要的受试者中治疗癌症、抑制癌症的进展、预防癌症转移、和向脑部递送治疗性化合物，所述方法包括：鉴别需要该方法的受试者；提供包含本文公开的药物递送分子的组合物；以及向受试者施用有效量的所述组合物。附图简述图1示出使用作为对照物的Lipofectamine(图1A)以及HerPBK10(图1B)来摄取单链低聚核苷酸的结果。图2示出PBK10可递送编码GFP的合成mRNA。图2A提供本实验中所用的mRNA的概要。图2B示出来自由Lipofectin递送的mRNA(右)和与其比较的由Lipofectin递送的GFP表达质粒(左)的GFP表达。图2C是PBK10-mRNA复合物的示意图。图2D示出用于PBK10-mRNA复合物的细胞结合数据。图2E示出细胞结合复合物的摄取的结果。图2F示出GFP表达的结果的图像，而图2G以图表形式描绘相同数据。图3是以下的示意图：(A)Inlb321，其涵盖用于c-MET受体结合的最小结构域；(B)InlB321，其结合至c-MET的胞外结构域。图4是示出重组基因构造物被组装以编码新融合蛋白(InlB-PBK10)的示意图。A.pRSET-InlB-PBK10的构造。B.pRSET-GFP-InlB的构造。C.通过限制性消化证实克隆插入物。图5是Western印迹的结果，其表明在细菌中产生了重组蛋白InlB、InlB-PBK10和GFP-InlB。图6是示出在不同肿瘤和非肿瘤细胞系之间c-MET的表面水平变化的图表。示出了通过以96孔格式执行的细胞表面ELISA来测得的在非透化细胞表面上的相对受体水平。ELISA结果表明H1993(肺癌细胞系)和MDA-MB-231(乳腺癌细胞系)是具有c-MET的最高细胞表面水平的细胞。RANKL(前列腺癌细胞系)和MDA-MB-435(乳腺癌细胞系)显示中等水平，而LN-GFP(前列腺癌细胞系)和Cos-7(非洲绿猴肾成纤维细胞)显示细胞表面c-MET的较低水平。图7示出实验结果，该结果表明InlB衍生肽识别出c-MET。A.InlB321肽展示出对c-MET阳性(而不是低c-MET)细胞的优先结合。使用荧光激化细胞分选(FACS)来测量结合至c-MET阳性细胞的InlB(由免疫荧光识别)的相对水平。FACS数据示出与低c-MET细胞(LNGFP)相比，结合至高c-MET细胞(H1993)的InlB的水平相对更高。B.通过竞争性抑制证实c-MET结合。当在结合至细胞之前，采用来源于c-MET(MET)的胞外配体结合结构域的可溶解肽来预培育游离InlB时，可抑制InlB向H1993结合。InlB和MET在1:1摩尔比率(MET:InlB)下培育，如果InlB对MET具有特异性，则预测受体结合降低50％。C.通过InlB-PBK10的细胞结合与c-MET水平成比例。InlB-PBK10表明：如通过细胞表面ELISA所测量，与表达相对低c-MET水平的细胞(Cos-7)相比，具有更高c-MET细胞表面表达的细胞(MDA-MB-231)的结合水平更高。D.通过竞争性配体抑制对c-MET+细胞的结合。当浓度增加的InlB被预结合至细胞时，在添加InlB-PBK10之前，经1h在冰上使浓度逐步升高的游离InlB配体预结合至MDA-MB-231细胞。E.InlB-PBK10在混悬液中经历向c-MET+细胞的受体特异性结合。混悬液中的MDA-MB-435细胞用浓度增加的游离InlB配体来培育，并且在移除未结合InlB之后，用InlB-PBK10培育细胞。选择游离InlB配体的浓度，以使得InlB-PBK10与InlB的摩尔比率为1:1、1:5和1:10。执行Western印迹以测量与细胞团块共沉淀的相对InlB-PBK10水平。免疫印迹条带的密度计测量表明，InlB-PBK10结合的水平随InlB的浓度增加而降低，这与向c-MET结合的InlB-PBK10相一致。图8示出InlB-PBK10内化入c-MET+细胞中。图9示出InlB-PBK10可向c-MET+细胞递送毒性分子。A.制备InlB-PBK10-Ga颗粒。示意图示出在将InlB-PBK10与Ga-咔咯(Ga-corrole)混合以促进非共价组装之后通过超滤作用分离颗粒的程序。B.InlB-PBK10-Ga颗粒的DLS。C.InlB-PBK10介导咔咯(corrole)有效负载的细胞溶质入口。D.I-Dox降低c-MET阳性肿瘤细胞的存活率。E.游离InlB抑制I-Dox毒性。图10示出在携带皮下双侧胁腹MDA-MB-435肿瘤的nu/nu小鼠中全身性(尾静脉)递送之后，InlB-PBK10的生物分布的XenogenSpectum图像。A.在尾静脉注射之后所示时间点处的整个小鼠的图像。蓝色箭头指向肾。白色箭头指向肿瘤。B.从4h时间点之后处死的相同小鼠中收获的肿瘤和组织的图像。图11描绘HerMn的组装。A.HerPBK10蛋白的示意图，突出显示了功能域。B.Mn-咔咯的化学结构(S2Mn)。C非共价组装的示意图。D.溶液中HerMn颗粒的TEM(插入物)和动态光散射(DSL)测量。图12是一组图表，其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药物递送分子，其包括：配体，其靶向细胞表面分子；膜渗透结构域；和有效负载结合结构域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.01.17 US 61/928,9031.一种药物递送分子，其包括：配体，其靶向细胞表面分子；膜渗透结构域；和有效负载结合结构域。2.如权利要求1所述的药物递送分子，其还包括治疗剂。3.如权利要求2所述的药物递送分子，其中该治疗剂形成具有有效负载结合结构域的复合物。4.如权利要求3所述的药物递送分子，其中所述复合物是共价或非共价的。5.如权利要求1所述的药物递送分子，其中所述药物递送分子是直径约5nm至约50nm的纳米颗粒。6.如权利要求1所述的药物递送分子，其中所述细胞表面分子是蛋白质、连接至蛋白质的碳水化合物部分或其组合。7.如权利要求1所述的药物递送分子，其中所述细胞表面分子是受体，并且所述配体靶向癌细胞上的所述受体。8.如权利要求7所述的药物递送分子，其中所述癌细胞是肺、肾、肝脏、胃部、乳房、结肠直肠、胃、卵巢、非小细胞肺癌或脑癌细胞中的任何一种或多种。9.如权利要求7所述的药物递送分子，其中所述受体选自由c-Met、HER2、HER3、CD4、和CD20组成的组。10.如权利要求7所述的药物递送分子，其中所述配体选自由蛋白质、蛋白质片段、多肽、低聚肽、抗体、抗体片段以及有机小分子组成的组11.如权利要求7所述的药物递送分子，其中所述配体选自由肝细胞生长因子(HGF)、内化蛋白B、细菌侵袭素(Inv)蛋白以及具有SEQIDNO:5中所述序列的肽组成的组。12.如权利要求1所述的药物递送分子，其中所述膜渗透结构域是五邻体基底蛋白或其得自腺病毒的片段。13.如权利要求1所述的药物递送分子，其中所述有效负载结合结构域是十赖氨酸基元。14.如权利要求2所述的药物递送分子，其中所述治疗剂是烷基化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗菌素、有丝分裂抑制剂、皮质类固醇、细胞毒素剂或其组合中的任何一种或多种。15.如权利要求2所述的药物递送分子，其中所述治疗剂选自由蛋白质、蛋白片段、多肽、低聚肽、核酸、脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)、mRNA、tRNA、rRNA、ssRNA、siRNA和有机小分子组成的组。16.如权利要求2所述的药物递送分子，其中所述治疗剂选自由咔咯化合物、苏消安、曲洛磷胺、长春花碱、紫杉醇、多西紫杉醇、阿霉素、表柔比星、依托泊苷、喜树碱、托泊替康、依立替康、替尼泊苷、克立那托、丝裂霉素、氨甲喋呤、霉酚酸、羟基脲、5-氟尿嘧啶、去氧氟尿苷、阿糖胞苷、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、2’-脱氧-5-氟尿苷、阿非迪霉素甘氨酸盐、吡唑并咪唑、软海绵素、秋...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·K·麦地那考韦，
申请(专利权)人：席德西奈医疗中心，
类型：发明
国别省市：美国;US