本发明专利技术公开了一种针对MALAT‑1基因的asRNA及其应用，该asRNA的序列如SEQ ID NO:2所示。应用时，利用与Dicer酶高效亲和的适配体Oligomer RNA定向诱导Dicer酶切割反义RNA‑靶RNA杂交分子，高效实现降解靶RNA，有效提高基因调控作用。MALAT‑1在癌细胞中高表达，通过在癌细胞中转染asRNA，可以有效敲低MALAT‑1的表达，抑制癌细胞增殖和迁移，促进癌细胞凋亡。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学领域，尤其是关于一种针对MALAT-1基因的RNA干扰技术。
技术介绍
反义技术(Antisensetechnology)是指反义DNA或者RNA以序列特异性的方式抑制基因表达的技术，其已在基因功能解析、靶标确定和疾病治疗等方面得到了广泛运用。至今，人们运用的反义技术主要有三种：反义寡聚核苷酸(Antisenseoligonucleotides，AS-ONs)、核酶(Ribozyme)与脱氧核酶(Deoxyribozyme)以及RNA干扰(RNAinference，RNAi)。AS-ONs和其互补配对的RNA结合，人们已经成功地用新颖的化学修饰方法来增强AS-ONs的稳定性和靶标亲和性；而核酶和脱氧核酶是本身具有催化活性的寡聚核苷酸，它们不仅可以和互补配对的靶序列结合，还能剪切这些靶序列。作为第三种高效的反义技术，RNAi技术利用21-23个核苷酸的小干扰RNA(SmallinterferingRNA，siRNA)分子就能够有效地抑制细胞中靶基因的表达。Dicer酶是RNA干扰(RNAinterference，RNAi)机制中的核心组成之一，其属于RNaseIII超级家族中特异识别双链RNA中的一员。Dicer酶以二聚体的形式切割长双链RNA(DoublestrandRNA，dsRNA)前体，产生22nt左右的小干扰RNA(SmallinterferenceRNA，siRNA)；其还可以作用于Drosha(RNaseIII超级家族另一成员)下游，产生成熟的microRNA(miRNA)，随后siRNA或miRNA进入RNA诱导的沉默复合物(RNA-inducedsilencingcomplexes，RISC)中，通过碱基互补配对的方式和靶mRNA结合，进而降解靶mRNA或者阻止其翻译。
技术实现思路
本专利技术提供一种新的针对MALAT-1基因的asRNA及其应用。本专利技术提一种针对MALAT-1基因的asRNA，其序列如SEQIDNO:2所示。所述的asRNA在制备治疗癌症的药物中的应用。癌症如宫颈癌和乳腺癌。所述的asRNA在制备抑制癌细胞中MALAT-1基因表达的试剂中的应用。癌细胞如人宫颈癌细胞系Hela和人乳腺癌细胞系MDA-MB-231。所述的asRNA在制备促进癌细胞凋亡的药物中的应用。所述的asRNA在调控癌细胞中MALAT-1基因表达的应用。一种治疗癌症的药物，所述药物包括针对MALAT-1基因的asRNA，所述asRNA的序列如SEQIDNO:2所示。所述asRNA干扰的靶序列是指MALAT-1基因转录本RNA的一段序列，该段RNA序列如下：5’-AUAAAUCCCUUUACACCUC-3’(SEQIDNO:3)，对应的是完整序列的第3099个碱基到第3117个碱基。利用与Dicer酶高效亲和的适配体OligomerRNA定向诱导Dicer切割反义RNA-靶RNA杂交分子，高效实现降解靶RNA，有效地提高基因调控作用。本专利技术的有益效果是：MALAT-1在癌细胞中高表达，通过在癌细胞中转染asRNA，可以有效敲低MALAT-1的表达，抑制癌细胞增殖和迁移，促进癌细胞凋亡。附图说明图1是GPU6-GFP-Neo质粒的物理图谱；图2是Hela细胞和MDA-MB-231细胞中MALAT-1表达水平的检测结果图，其中左边一组方柱显示转染asRNA后，Hela细胞中MALAT-1的表达水平显著下降；右边一组方柱显示转染asRNA后，MDA-MB-231细胞中MALAT-1的表达水平显著下降；图3是CCK-8法检测Hela细胞和MDA-MB-231细胞增殖能力的变化的曲线图，其中，A部分，实线表示针对Hela细胞的对照组，虚线表示针对Hela细胞的实验组；B部分，实线表示针对MDA-MB-231细胞的对照组，虚线表示针对MDA-MB-231细胞的实验组；图4是EdU法检测Hela细胞和MDA-MB-231细胞增殖能力的变化的曲线图，其中，A部分，上方一排是针对Hela细胞的对照组，下方一排是针对Hela细胞的实验组；B部分，上方一排是针对MDA-MB-231细胞的对照组，下方一排是针对MDA-MB-231细胞的实验组；C部分，左边一组方柱显示转染asRNA后，Hela细胞的增殖能力明显下降；右边一组方柱显示转染asRNA后，MDA-MB-231细胞的增殖能力明显下降；图5是划痕法检测Hela细胞和MDA-MB-231细胞迁移能力的变化的结果图；其中，A部分，上方是针对Hela细胞的对照组分别在0h、16h的划痕图，下方是针对Hela细胞的实验组分别在0h、16h的划痕图；B部分，上方是针对MDA-MB-231细胞的对照组分别在0h、16h的划痕图，下方是针对MDA-MB-231细胞的实验组分别在0h、16h的划痕图；C部分，左边一组方柱显示转染asRNA后，Hela细胞的迁移能力被显著抑制；右边一组方柱显示转染asRNA后，MDA-MB-231细胞的迁移能力被显著抑制；图6是Transwell法检测Hela细胞和MDA-MB-231细胞迁移能力的变化的结果图，其中，A部分，左边是针对Hela细胞的对照组，右边是针对Hela细胞的实验组；B部分，左边是针对MDA-MB-231细胞的对照组，右边是针对MDA-MB-231的实验组；C部分，左边一组方柱显示转染asRNA后，Hela细胞的迁移能力被显著抑制；右边一组方柱显示转染asRNA后，MDA-MB-231细胞的迁移能力被显著抑制；图7是ELISA法检测Hela细胞和MDA-MB-231细胞凋亡能力的变化的结果图，其中，左边一组方柱显示转染asRNA后，Hela细胞的凋亡能力显著提高；右边一组方柱显示转染asRNA后，MDA-MB-231细胞的凋亡能力显著提高；图8是Hoechst法检测Hela细胞和MDA-MB-231细胞凋亡能力的变化的结果图。其中，A部分，左边分别是针对Hela细胞和MDA-MB-231细胞的对照组，右边分别是针对Hela细胞和MDA-MB-231细胞的实验组；B部分，左边一组方柱显示转染asRNA后，Hela细胞的凋亡能力显著提高；右边一组方柱显示转染asRNA后，MDA-MB-231细胞的凋亡能力显著提高。具体实施方式下面通过具体实施方式结合附图对本专利技术作进一步详细说明。技术与方法1实验细胞系人宫颈癌细胞系Hela和人乳腺癌细胞系MDA-MB-231均购自上海生化所细胞库。2质粒构建用GPU6-GFP-Neo质粒构建表达和Dicer酶高度结合的寡聚核苷酸OligomerRNA载体，并经过阳性克隆测序验证，即获得OligomerRNA表达质粒，这也是本研究中对照组(Negativecontrol)实验所用质粒。Oligomer序列如下：5’-GGGAGAAUCAUAAGUAGCGGUGUGUGAGUCGUGGUGCCCCAUGUUAACAGUUAGCC-3’(SEQIDNO:1)用GPU6-GFP-Neo质粒构建表达asRNA的载体(本实验所用靶标为MALAT-1基因)，并经过阳性克隆测序验证，即获得asRNA表达质粒，这也是本研究中实验组实验所用质粒。asRNA序列如下：5’-GGGAGAAUCAU本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种针对MALAT‑1基因的asRNA，其特征在于，其序列如SEQ ID NO:2所示。
【技术特征摘要】
1.一种针对MALAT-1基因的asRNA，其特征在于，其序列如SEQIDNO:2所示。2.如权利要求1所述的asRNA在制备治疗癌症的药物中的应用。3.如权利要求1所述的asRNA在制备抑制癌细胞中MALAT-1基因表达的试剂中的应用。4.如权利要求1所述的asRNA在制备促进癌细胞凋亡的...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄卫人，刘宇辰，蔡志明，许文，陈志聪，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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