包含因子VIII和冯·维勒布兰德因子肽的制剂制造技术

包含因子VIII与一种或更多种冯·维勒布兰德因子肽之复合物的组合物，其中所述冯·维勒布兰德因子肽包含SEQ ID No.1的至少764至1035和1691至1905位氨基酸，但不包含SEQ ID No.1的2255至2645位氨基酸。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及用于治疗出血性疾病(bleedingdisorder)的药物制剂。
技术介绍
因子VIII(FactorVIII，“FVIII”)是约280kDa分子量的血浆糖蛋白。其参与导致血液凝固的凝血反应级联。最常见的出血性疾病由缺乏功能性因子VIII引起，其称为A型血友病。其用因子VIII的替代(血浆来源的或重组的)治疗。因子VIII用于A型血友病患者出血的急性和预防性治疗。因子VIII的氨基酸序列被组织成三个结构域：330个氨基酸的三重A结构域(triplicatedAdomain)，980个氨基酸的单个B结构域，和150个氨基酸的双重C结构域(duplicatedCdomain)。B结构域与其他蛋白质没有同源性，并提供该蛋白质25个潜在天冬酰胺(N)-连接的糖基化位点中的18个。B结构域在凝血中显然没有作用。与全长因子VIII相比，B结构域缺失的因子VIII分子具有不变的促凝活性。一些重组因子VIII(recombinantFactorVIII，rFVIII)制剂是B结构域缺失的。在血浆中，因子VIII通过与冯·维勒布兰德因子蛋白(VonWillebrandFactor，“vWF”)缔合而稳定，其似乎抑制因子VIII的清除，例如通过蛋白水解或受体介导的通过LRP受体的清除。在循环中，在正常生理条件下，冯·维勒布兰德因子以相对于因子VIII的50倍摩尔过量存在。冯·维勒布兰德因子是存在于哺乳动物血浆中的多聚粘附糖蛋白，其具有多种生理功能。在初级止血期间，冯·维勒布兰德因子充当血小板表面上的特异性受体与胞外基质(例如胶原蛋白)的组分之间的介体。此外，冯·维勒布兰德因子还充当促凝血因子VIII的载体和稳定蛋白。冯·维勒布兰德因子在内皮细胞和巨核细胞中以2813个氨基酸的前体分子合成。该前体多肽(前原冯·维勒布兰德因子)由22残基信号肽、741残基前肽和在成熟血浆冯·维勒布兰德因子中发现的2050残基多肽组成(Fischer等，FEBSLett.351：345-348，1994)。在分泌到血浆中后，冯·维勒布兰德因子以具有不同分子大小的多个种类的形式循环。这些冯·维勒布兰德因子分子由2050个氨基酸残基的成熟亚基的寡聚体和多聚体组成。冯·维勒布兰德因子通常可以大小约500至20,000kDa的多聚体见于血浆中(Furlan，AnnHematol.1996年6月；72(6)：341-8)。人因子VIII在人体循环中的平均体内半衰期为约12小时。当与因子VIII形成复合物时，冯·维勒布兰德因子可以通过针对因子VIII分子上的重链(A2结构域)和轻链(A3/C2结构域)上的已知潜在抑制剂抗体位点(Ragni，JThromb.Haemost.10：2324-2327，2012)或其他潜在抗体抑制剂位点对FVIII进行保护，降低对因子VIII的可能免疫反应。人的另一种出血性疾病是血管性血友病(VonWillebrand′sdisease，vWD)。根据出血症状的严重程度，可以通过用含有冯·维勒布兰德因子的浓缩物进行替代疗法来治疗vWD，所述冯·维勒布兰德因子一般来自血浆，但是重组冯·维勒布兰德因子也在开发中。已知冯·维勒布兰德因子在体内稳定因子VIII，由此在调节因子VIII的血浆水平中起关键作用，因此是控制初级和二级止血的中心因素。直到今天，A型血友病和vWD的标准治疗涉及频繁的静脉内输注因子VIII和因子VIII/冯·维勒布兰德因子浓缩物的制剂。这些替代疗法一般是有效的，然而，例如在经历预防性治疗的严重A型血友病患者中，由于因子VIII约12小时的短血浆半衰期，因此因子VIII必须每周静脉内(i.v.)施用约3次。通过实现高于正常人血浆1％的因子VIII水平(对应于因子VIII水平升高0.01U/ml)，已经将严重的A型血友病转变成中度A型血友病。在预防性治疗中，设计给药方案以使得因子VIII活性的水平不低于非血友病因子VIII活性的2-3％的水平。通过静脉内施用(i.v.)施用因子VIII是麻烦的，其与疼痛相关联并且带来感染的风险，尤其是因为这主要是由患者自己或由被诊断患有A型血友病的儿童的家长在家庭治疗中完成的。此外，频繁的静脉内注射不可避免地导致疤痕形成，从而干扰未来的输注。在紧急情况或手术中(即当立即需要高的因子VIII水平时)可能仍然需要静脉内治疗。已经提出了因子VIII的皮下施用(s.c.)(例如在WO95/01804A1和WO95/026750A1中)。然而，必须施用非常高剂量的因子VIII以实现可接受的生物利用度。在非静脉内施用时改善生物利用度的另一种方法是使用白蛋白融合的因子VIII(WO2011/020866A2)。WO2013/057167A1提出通过非静脉内施用将因子VIII与硫酸化糖胺聚糖组合施用，其任选地与冯·维勒布兰德因子一起施用。WO2008/151817A1描述了未切割的冯·维勒布兰德因子多聚体用于稳定因子VIII(血浆来源的或重组(全长和缺失突变体))的一般用途，旨在用于血管外治疗。WO2013/160005A1描述了重组冯·维勒布兰德因子或重组冯·维勒布兰德因子片段在皮下治疗后改善非常特异性的因子VIII分子的生物利用度的一般用途，其中所述因子VIII分子包含大小为100-400个氨基酸的截短的B结构域。根据WO2013/160005A1，与具有整个B结构域的因子VIII或者不具有或仅具有几个氨基酸的B结构域截短的因子VIII分子相比，具有100至400个氨基酸的截短的B结构域的因子VIII分子具有更高的因子VIII生物利用度。仍然需要表现出改善的生物利用度、稳定性和/或更低抗体产生风险的因子VIII制剂，从而避免现有技术的缺点。本专利技术的目的是提供替代的因子VIII制剂。优选地，这些制剂应表现出改善的稳定性、改善的生物利用度和/或降低的免疫反应的风险。在一个实施方案中，该目的通过包含因子VIII与一种或更多种冯·维勒布兰德因子肽之复合物的组合物实现，其中所述冯·维勒布兰德因子肽包含SEQIDNo.1的至少764至1035和1691至1905位氨基酸，但不包含SEQIDNO1的2255至2645位氨基酸。根据本专利技术，提供了包含冯·维勒布兰德因子肽的因子VIII制剂。因子VIII与所包含的冯·维勒布兰德因子肽形成复合物。本文所用的因子VIII涵盖全长因子VIII、B结构域缺失的因子VIII或这样的因子VIII：其中所述B结构域已被人工接头或天然B结构域的片段或者这两者的组合所替代，即所述B结构域与全长因子VIII相比具有不同的大小。其还涵盖带有有限数目的具有插入、缺失或替换之修饰的因子VIII，特别是适于如K.R.Viel，等NewEnglandJMed2009；360：1618-1627中所述的单倍型的因子VIII。优选地，与因子VIII具有序列同源性(如1986年7月21日SwissProt的P00451的20-2351位氨基酸所限定的)，但是如在FASTA第36版中所执行的，忽略根据FASTA的99％的B结构域中的同源性，其基于W.R.Pearson(1996)“Effectiveproteinsequencecomparison”M本文档来自技高网...

【技术保护点】
组合物，其包含因子VIII与一种或更多种冯·维勒布兰德因子肽的复合物，其中所述冯·维勒布兰德因子肽包含SEQ ID No.1的至少764至1035和1691至1905位氨基酸，但不包含SEQ ID No.1的2255至2645位氨基酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.06 EP 14171579.71.组合物，其包含因子VIII与一种或更多种冯·维勒布兰德因子肽的复合物，其中所述冯·维勒布兰德因子肽包含SEQIDNo.1的至少764至1035和1691至1905位氨基酸，但不包含SEQIDNo.1的2255至2645位氨基酸。2.权利要求1所述的组合物，其中所述冯·维勒布兰德因子肽是冯·维勒布兰德因子的片段。3.权利要求2所述的组合物，其中所述冯·维勒布兰德因子的片段包含SEQIDNo.1的764至1905位氨基酸。4.权利要求2所述的组合物，其中所述冯·维勒布兰德因子的片段具有这样的氨基酸序列，其对应于SEQIDNo.1之起始于764位氨基酸并且在1905和2153位氨基酸之间终止的氨基酸序列并具有多至10个缺失、插入或替换。5.组合物，其包含因子VIII与一种或更多种冯·维勒布兰德因子肽的复合物，其中-所述冯·维勒布兰德因子肽是冯·维勒布兰德因子的片段-相比于单独的因子VIII，所述因子VIII与所述冯·维勒布兰德因子的片段的复合物与磷脂膜的结合降低-相比于因子VIII与全长冯·维勒布兰德因子的复合物，所述因子VIII与所述冯·维勒布兰德因子的片段的复合物与胶原蛋白III的结合降低-相比于因子VIII与全长冯·维勒布兰德因子的复合物，所述因子VIII与所述冯·维勒布兰德因子的片段的复合物与肝素的结合降低。6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述冯·维勒布兰德因子肽的分子量＜500kD，优选＜400kD。7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述冯·维勒布兰德因子肽具有选自以下的至少一种性质：(i)对肝素的亲和结合常数KD＞1nM，优选≥2.43nM(ii)对胶原蛋白III的亲和结合常数KD＞5nM，优选≥17.02nM(iii)对因子VIII的亲和结合常数KD＜100nM，或＜10nM，优选≤6.19nM，以及(iv)抑制至少70％，优选至少80％的因子VIII磷脂结合。8.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯托夫·坎尼希特，巴巴拉·索莱卡，吉多·科拉，斯特凡·温厄，
申请(专利权)人：奥克塔法马股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH