利用黑曲霉发酵苦荞茎叶制备苦荞茶的方法技术

本发明专利技术提供了利用黑曲霉发酵苦荞茎叶制备苦荞茶的方法，包括以下步骤：（1）黑曲霉的分离纯化；（2）黑曲霉孢子悬液的制备；（3取苦荞茎叶，清洗干燥并粉碎，得苦荞茎叶粉，将该粉灭菌，冷却后按体积分数3%‑8%向灭菌苦荞茎叶粉中加黑曲霉孢子悬液，得混合物，后向混合物中加入等重量无菌水，混匀，于28℃发酵2‑10天，得苦荞茎叶发酵液；（4）将步骤（3）制得的苦荞茎叶发酵液于60℃烘干，得苦荞茎叶发酵物即苦荞茶。本发明专利技术以苦荞籽粒采收后的苦荞茎和叶作为原料，利用普洱茶或黑茶中的优势菌种黑曲霉，对苦荞茎、叶进行发酵，可以有效解决苦荞茎叶被丢弃、焚烧的问题，同时还为苦荞茶增加了新的种类。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于苦荞茶
，具体涉及一种利用黑曲霉发酵苦荞茎叶制备苦荞茶的方法。
技术介绍
苦荞(Fagopyrumtataricum(L.)Gaertn)，属双子叶蓼科一年生植物，是中国占有绝对优势的一种杂粮资源。《本草纲目》、《重修政和证类本草》、《中药大词典》等书中记载，“苦荞麦性味苦，平，寒，有益气力，续精神，利耳目，降气宽肠键胃的作用”；“叶作茹食，下气、利耳目”；“治噎食、痈肿，并能止血，蚀恶肉”。药理和化学成分的研究表明，苦荞含有丰富的营养及较多的芦丁、槲皮素等黄酮类物质，这赋予了苦荞多种生物学功能，如抗氧化、抗肿瘤、降血糖、降血压、降血脂、预防动脉硬化及保护心血管等作用。目前，国内外市场对苦荞及其加工产品的需求日益增大，我国的苦荞资源生产与加工正面临着诸多的机遇与挑战，因而急需对其进行系统的开发和利用，以提高其附加价值，加快产业化开发进程，促进地区经济的提高，使我国苦荞产业健康发展。苦荞传统加工生产主要利用的是苦荞籽，已开发为多种产品，而对苦荞其他部位如苦荞花、叶、茎等，利用较少。相关研究亦表明，苦荞中的活性代表成分芦丁在叶中的含量高于籽粒。但苦荞作为一年生草本植物，以嫩叶作为原材料并不利于其全面开发与利用，而在苦荞栽培地区如中国四川凉山，苦荞叶、茎等作为苦荞籽粒采收后的副产物，常被用作饲料或是焚烧、丢弃，这是一种极大的浪费。
技术实现思路
针对现有技术中存在的上述问题，本专利技术提供一种利用黑曲霉发酵苦荞茎叶制备苦荞茶的方法，可有效解决苦荞茎叶浪费的问题，同时还为苦荞茶增加了新类型。为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：利用黑曲霉发酵苦荞茎叶制备苦荞茶的方法，包括以下步骤：(1)黑曲霉的分离纯化将普洱茶或黑茶烘干，用浓度为0.9％的无菌生理盐水浸泡，以浸泡液作为母液，然后对母液依次进行10倍浓度梯度稀释，直至浓度为10-7g/mL，分别吸取各浓度浸泡液，涂布于PDA平板培养基，于25-30℃条件下培养1-2天，然后挑取菌落，分离、纯化，鉴定，得黑曲霉；(2)黑曲霉孢子悬液的制备将步骤(1)分离纯化得到的黑曲霉接种于PDA试管培养基，在25-30℃条件下培养3-5天，产生成熟的黑曲霉孢子，然后用浓度为0.9％的无菌生理盐水冲洗培养基，并同时将悬液调至OD600值为1.8-2.2，得黑曲霉孢子悬液；(3)苦荞茎叶发酵液的制备取苦荞茎叶，清洗干净后干燥，粉碎至5-10目，得苦荞茎叶粉，将苦荞茎叶粉置于121℃条件下灭菌20min，冷却后按体积分数为3％-8％向灭菌的苦荞茎叶粉中接种黑曲霉孢子悬液，得混合物，然后向混合物中加入等重量的无菌水，搅拌均匀，于25-30℃条件下发酵2-10天，得苦荞茎叶发酵液；(4)苦荞茶的制备将步骤(3)制得的苦荞茎叶发酵液于50-60℃条件下烘干，得苦荞茎叶发酵物即苦荞茶。进一步地，步骤(1)和步骤(2)中培养温度为28℃。进一步地，步骤(2)中用0.9％的无菌生理盐水将悬液调至OD600值为2。进一步地，步骤(3)中所添加的黑曲霉孢子悬液体积分数为5％。进一步地，步骤(3)中发酵温度为28℃。进一步地，步骤(3)中发酵时间为4-6天。通过上述方法制备出的苦荞茶。通过上述方法制备出的苦荞茎叶发酵液。本专利技术提供的利用黑曲霉发酵苦荞茎叶制备苦荞茶的方法，具有以下有益效果：(1)本专利技术以苦荞籽粒采收后的苦荞茎和叶作为原料，利用普洱茶或黑茶中的优势菌种黑曲霉，通过特定的发酵工艺，对苦荞茎、叶进行发酵，可以有效解决苦荞茎和叶被丢弃、焚烧或其他形式的浪费问题，同时还为苦荞茶增加了新的种类。(2)经黑曲霉发酵后制得的苦荞茶，总多酚、总黄酮含量均较高，具有较强的抗氧化活性，此专利技术使得废弃物得以有效利用，变废为宝，可将其用于预防和缓解“三高”以及动脉硬化，还可以起到保护心血管的药效作用。(3)本专利技术制备方法简单，成本低，适用于工业化生产。附图说明图1为不同发酵天数的苦荞茎叶发酵物中多酚含量变化图。图2为不同发酵天数的苦荞茎叶发酵物中黄酮含量变化图。图3为芦丁标准品、槲皮素标准品和发酵样品的色谱图。图4为不同发酵天数的苦荞茎叶发酵物中芦丁、槲皮素和总芦丁含量变化图。图5为不同发酵天数的苦荞茎叶发酵物对DPPH自由基清除率结果。图6为不同发酵天数的苦荞茎叶发酵物铁氰化钾还原实验结果。具体实施方式实施例1利用黑曲霉发酵苦荞茎叶制备苦荞茶的方法，包括以下步骤：(1)黑曲霉的分离纯化将普洱茶烘干，称取1g，用100mL浓度为0.9％的无菌生理盐水浸泡，以浸泡液作为母液，然后对母液依次进行10倍浓度梯度稀释，直至浓度为10-7g/mL，分别吸取各浓度浸泡液100μL，涂布于PDA平板培养基，于25℃条件下培养1-2天，然后挑取菌落，分离、纯化，鉴定，得黑曲霉；(2)黑曲霉孢子悬液的制备将步骤(1)分离纯化得到的黑曲霉接种于PDA试管培养基，在25℃条件下培养3-5天，产生成熟的黑曲霉孢子，然后用浓度为0.9％的无菌生理盐水冲洗培养基，并同时将悬液调至OD600为1.8，得黑曲霉孢子悬液；(3)苦荞茎叶发酵液的制备取苦荞茎叶，清洗干净后干燥，粉碎至5目，得苦荞茎叶粉，将苦荞茎叶粉置于121℃条件下灭菌20min，冷却后按体积分数为3％向灭菌的苦荞茎叶粉中接种黑曲霉孢子悬液，得混合物，然后向混合物中加入等重量的无菌水，搅拌均匀，于25℃条件下发酵1-25天，得苦荞茎叶发酵液；其中每隔24h取样1g，进行化学成分及抗氧化活性的测定；(4)苦荞茶的制备将步骤(3)制得的苦荞茎叶发酵液于60℃条件下烘至恒重，得苦荞茎叶发酵物即苦荞茶。实施例2利用黑曲霉发酵苦荞茎叶制备苦荞茶的方法，包括以下步骤：(1)黑曲霉的分离纯化将黑茶烘干，称取1g，用100mL浓度为0.9％的无菌生理盐水浸泡，以浸泡液作为母液，然后对母液依次进行10倍浓度梯度稀释，直至浓度为10-7g/mL，分别吸取各浓度浸泡液100μL，涂布于PDA平板培养基，于30℃条件下培养1-2天，然后挑取菌落，分离、纯化，鉴定，得黑曲霉；(2)黑曲霉孢子悬液的制备将步骤(1)分离纯化得到的黑曲霉接种于PDA试管培养基，在30℃条件下培养3-5天，产生成熟的黑曲霉孢子，然后用浓度为0.9％的无菌生理盐水冲洗培养基，并同时将悬液调至OD600为2.2，得黑曲霉孢子悬液；(3)苦荞茎叶发酵液的制备取苦荞茎叶，清洗干净后干燥，粉碎至5目，得苦荞茎叶粉，将苦荞茎叶粉置于121℃条件下灭菌20min，冷却后按体积分数为8％向灭菌的苦荞茎叶粉中接种黑曲霉孢子悬液，得混合物，然后向混合物中加入等重量的无菌水，搅拌均匀，于30℃条件下发酵1-25天，得苦荞茎叶发酵液；其中每隔24h取样1g，进行化学成分及抗氧化活性的测定；(4)苦荞茶的制备将步骤(3)制得的苦荞茎叶发酵液于60℃条件下烘至恒重，得苦荞茎叶发酵物即苦荞茶。实施例3利用黑曲霉发酵苦荞茎叶制备苦荞茶的方法，包括以下步骤：(1)黑曲霉的分离纯化将普洱茶烘干，称取1g，用100mL浓度为0.9％的无菌生理盐水浸泡，以浸泡液作为母液，然后对母液依次进行10倍浓度梯度稀释，直至浓度为10-7g/mL，分别吸取各浓度浸泡液100μL，涂布于PDA平板培养基，于28℃条件下培养1-2天本文档来自技高网...

【技术保护点】
利用黑曲霉发酵苦荞茎叶制备苦荞茶的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）黑曲霉的分离纯化将普洱茶或黑茶烘干，用浓度为0.9%的无菌生理盐水浸泡，以浸泡液作为母液，然后对母液依次进行10倍浓度梯度稀释，直至浓度为10‑7g/mL，分别吸取各浓度浸泡液，涂布于PDA平板培养基，于25‑30℃条件下培养1‑2天，然后挑取菌落，分离、纯化，鉴定，得黑曲霉；（2）黑曲霉孢子悬液的制备将步骤（1）分离纯化得到的黑曲霉接种于PDA试管培养基，在25‑30℃条件下培养3‑5天，产生成熟的黑曲霉孢子，然后用浓度为0.9%的无菌生理盐水冲洗培养基，并同时将悬液调至OD600值为1.8‑2.2，得黑曲霉孢子悬液；（3）苦荞茎叶发酵液的制备取苦荞茎叶，清洗干净后干燥，粉碎至5‑10目，得苦荞茎叶粉，将苦荞茎叶粉置于121℃条件下灭菌20min，冷却后按体积分数为3%‑8%向灭菌的苦荞茎叶粉中接种黑曲霉孢子悬液，得混合物，然后向混合物中加入等重量的无菌水，搅拌均匀，于25‑30℃条件下发酵2‑10天，得苦荞茎叶发酵液；（4）苦荞茶的制备将步骤（3）制得的苦荞茎叶发酵液于50‑60℃条件下烘干，得苦荞茎叶发酵物即苦荞茶。...

【技术特征摘要】
1.利用黑曲霉发酵苦荞茎叶制备苦荞茶的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）黑曲霉的分离纯化将普洱茶或黑茶烘干，用浓度为0.9%的无菌生理盐水浸泡，以浸泡液作为母液，然后对母液依次进行10倍浓度梯度稀释，直至浓度为10-7g/mL，分别吸取各浓度浸泡液，涂布于PDA平板培养基，于25-30℃条件下培养1-2天，然后挑取菌落，分离、纯化，鉴定，得黑曲霉；（2）黑曲霉孢子悬液的制备将步骤（1）分离纯化得到的黑曲霉接种于PDA试管培养基，在25-30℃条件下培养3-5天，产生成熟的黑曲霉孢子，然后用浓度为0.9%的无菌生理盐水冲洗培养基，并同时将悬液调至OD600值为1.8-2.2，得黑曲霉孢子悬液；（3）苦荞茎叶发酵液的制备取苦荞茎叶，清洗干净后干燥，粉碎至5-10目，得苦荞茎叶粉，将苦荞茎叶粉置于121℃条件下灭菌20min，冷却后按体积分数为3%-8%向灭菌的苦荞茎叶粉中接种黑曲霉孢子悬液，得混合物，然后向混合物中加入等重量的无菌水，搅拌均匀...

【专利技术属性】
技术研发人员：雨田，陈江，张晓喻，赵钢，邹亮，郑瑾，
申请(专利权)人：成都大学，四川师范大学，
类型：发明
国别省市：四川;51