本发明专利技术提供一株新分离的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)HEW‑A490，该菌具有显著的益生性以及抗逆性，由其制备的微生态制剂进入动物肠道，迅速活化、增殖，并能够形成有益优势菌群，维持肠道平衡，不但可以提高动物的饲料利用效率，节约成本，而且改善了动物体内消化道内环境的稳态，促进营养的吸收利用，促进动物生长，提高经济效益等功效，有着良好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及畜牧饲用益生菌，特别涉及一株植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)HEW-A490及其应用。
技术介绍
植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)是人和动物肠道的正常菌群，广泛存在于传统发酵食品中，已有众多研究证明植物乳杆菌在抑制病原菌生长繁殖，促进机体对营养物质消化吸收，提高机体免疫力等方面具有重要的生物学功能。植物乳杆菌通过与病原菌对限制性营养素的能力竞争，来抑制病原菌的生长，调节肠道微生态的组成，形成生物学屏障。同时，通过其代谢所产生的代谢产物乳酸、细菌素、以及双乙酰对其它细菌的作用，调整菌群之间的关系，维持和保证菌群最佳优势组合以及这种组合的稳定，阻止了致病菌的定殖和入侵，拮抗致病菌和有害微生物的生长及其毒素的粘附，是一种理想的微生物饲料添加剂。同时植物乳杆菌的中β葡萄糖苷酶具有较高的活性，能降解饲料中的植物性原料常含有毒性和抗营养化合物。因此，植物乳杆菌在畜牧生产中有广泛的应用前景。但大多益生菌对饲料加工中的制粒工艺的高温、运输及胃肠液和胆汁的耐受性较差，进入肠道的活植物乳杆菌的种类和数量不多，因此筛选获得耐高温、耐胃肠液和胆汁的植物乳杆菌可以解决这一系列的问题。植物乳杆菌的来源很多，可购买工业菌株和标准菌株，也可以从自然环境、土壤、酸奶、泡菜等分离。然而益生菌最终是要饲喂动物，因此相对其他来源的菌株，动物无疑是最好的来源。来源于动物肠道的植物乳杆菌能够适应动物肠道环境，耐受胃酸和胆盐的消化。筛选功能植物乳杆菌对开发多功能性的微生物饲料添加剂具有现实意义，同时多功能性微生物饲料添加剂也是发展生态农业，提高畜牧业经济效益，保障畜产品品质和畜产食品安全的重要发展方向。现有的植物乳杆菌耐热性、耐酸碱性、抑菌性能及发酵性能等都不理想，不能适应日益发展的工业化需求，尤其离目前饲料工业及畜牧养殖业目标还有一定差距。为了弥补上述领域的不足，并更好地适应日益发展的工业化需求，分离、纯化更加适合畜牧业发展需求的益生植物乳杆菌菌株仍是本领域技术人员的责任和追求。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株抗逆性和益生性强的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)HEW-A490及其应用。本专利技术的另一目的是提供由植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)HEW-A490制备的微生态制剂及动物饲料。为了实现本专利技术目的，本专利技术提供的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)HEW-A490是从健康鸡肠道内容物中分离的乳酸杆菌菌株，通过菌落形态观察、生理生化特征、分子生物学鉴定等确定其为植物乳杆菌。该菌株具有耐酸碱、耐高温性能，抗逆性强，且对腐败菌有抑制作用等。本专利技术提供的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)HEW-A490已于2016年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)，保藏编号为CGMCCNO.12554，分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。本专利技术提供的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)HEW-A490具有以下微生物学特征：在MRS培养基生菌落呈乳白色、圆形且边缘规则、湿润且光滑，易挑起，菌落直径为2～3mm，菌落形态见图1；显微形态见图2；其菌体呈短杆状，无鞭毛，无芽孢，革兰氏阳性；植物乳杆菌HEW-A490兼性厌氧菌，生长适宜温度范围：4℃-65℃，最适生长温度：25℃-45℃；生长适宜pH2.5-10，最适pH值为5-8；部分生理生化特性见表1。表1植物乳杆菌HEW-A490部分生理生化特性注：“+”表示反应阳性；“－”表示反应阴性。将菌株HEW-A490的16SrDNA的序列与GenBank中已知序列进行Blast比对，从数据库中获得相关的种属的16SrDNA，构建系统发育树，并通过菌种的细胞形态、生理生化特征和16SrDNA序列等实验数据综合确定该菌株属于乳杆菌属，最终确定为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。本专利技术植物乳杆菌HEW-A490具有显著的抑菌性能，可有效抑制肠炎沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、空肠弯曲杆菌及大肠杆菌等腐败菌的生长繁殖。本专利技术植物乳杆菌HEW-A490具有较强的抗逆性，可以耐高温、耐模拟胃液、耐胆盐性，且能保持90％以上的存活率。本专利技术植物乳杆菌HEW-A490对肠上皮细胞株HT-29细胞有较强的粘附作用，粘附率达54％。本专利技术还提供植物乳杆菌HEW-A490的培养方法，其中，种子培养基由下述组分组成：葡萄糖0.5-2％，蔗糖0.5-2.5％，酵母膏0.5-2％，胰蛋白胨0.5-1.5％，磷酸氢二钾0.02-0.10％，硫酸镁0.01-0.15％，氯化钠0.1-0.5％，碳酸钙0.1-0.5％，余量为水，pH6.8±0.2；优选地，上述种子培养基由下述组分组成：葡萄糖0.5％，蔗糖1.2％，酵母膏0.8％，胰蛋白胨1.0％，磷酸氢二钾0.05％，硫酸镁0.05％，氯化钠0.25％，碳酸钙0.17％，余量为水，pH6.8±0.2。其中摇瓶发酵的条件为：发酵温度30-45℃，转速为150-220r/m，发酵时间5-20h；优选为：发酵温度37℃，转速为180r/m，发酵时间15h。发酵培养基(包括二级发酵培养基和三级扩大培养基)由下述组分组成：蔗糖1-4％，玉米淀粉0.5-2.0％，玉米浆干粉1-3％，酵母提取物0.5-3％，磷酸氢二钾0.01-0.15％，硫酸镁0.01-0.2％，氯化钠0.1-0.5％，碳酸钙0.05-0.4％，硫酸锰0.01-0.05，余量为水，pH6.8±0.2；优选地，由下述组分组成：蔗糖1.5％，玉米淀粉2.0％，玉米浆干粉1.2％，酵母提取物1.4％，磷酸氢二钾0.08％，硫酸镁0.05％，氯化钠0.2％，碳酸钙0.15％，硫酸锰0.03％，余量为水，pH6.8±0.2。发酵条件(包括二级发酵和三级扩大培养)包括：发酵温度为30-45℃，发酵时间5-20h，搅拌转速100-220r/min；优选为发酵温度为37℃，搅拌转速120r/min，发酵时间10h。二级发酵培养以50L发酵罐中试发酵条件为例：装液量为20-40L培养基，接种量为200-600mL摇瓶种子液；优选为：装液量为30L培养基，接种量为300mL摇瓶种子液。三级发酵培养以5T发酵罐培养为例，5T发酵罐培养基与二级发酵培养基相同。5T发酵罐发酵条件为：装液量为2T-4T培养基，接种量为20-40L二级培养液，发酵温度为30-45℃，发酵时间10-25h，搅拌转速100-220r/min。其中，优选为：装液量为3.5T培养基，接种量为30L，发酵温度为37℃，搅拌转速110r/min，发酵时间20h。活菌数可达2.5×1010CFU/mL具体地，上述植物乳杆菌HEW-A490的培养方法，包括将植物乳杆菌HEW-A490在MRS斜面上划线，37℃培养20h，将斜面加入2mL灭菌生理盐水制成菌悬液，将菌悬液转接于300mL种子培养本文档来自技高网...
【技术保护点】
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)HEW‑A490，其保藏编号为CGMCC NO.12554。
【技术特征摘要】
1.植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)HEW-A490，其保藏编号为CGMCCNO.12554。2.权利要求1所述的植物乳杆菌HEW-A490的培养方法，其特征在于，种子培养基由下述组分组成：葡萄糖0.5-2％，蔗糖0.5-2.5％，酵母膏0.5-2％，胰蛋白胨0.5-1.5％，磷酸氢二钾0.02-0.10％，硫酸镁0.01-0.15％，氯化钠0.1-0.5％，碳酸钙0.1-0.5％，余量为水，pH6.8±0.2；优选地，所述种子培养基由下述组分组成：葡萄糖0.5％，蔗糖1.2％，酵母膏0.8％，胰蛋白胨1.0％，磷酸氢二钾0.05％，硫酸镁0.05％，氯化钠0.25％，碳酸钙0.17％，余量为水，pH6.8±0.2。3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，摇瓶发酵的条件为：发酵温度30-45℃，转速为150-220r/m，发酵时间5-20h；优选为：发酵温度37℃，转速为180r/m，发酵时间15h。4.根据权利要求2或3所述的培养方法，其特征在于，发酵培养基由下述组分组成：蔗糖1-4％，玉米淀粉0.5-2.0％，玉米浆干粉1-3％，酵母提取物0.5-3％，磷酸氢二钾0.01-0.15％，硫酸镁0.01-0.2％，氯化钠0.1-0.5％，碳酸钙0.05-0.4％，硫酸锰0.01-0.05，余量为水，pH6.8±0.2；优选由下述组分组成：蔗糖1.5％，玉米淀粉2.0％，玉米浆干粉1.2％，酵母提取物1.4％，磷酸氢二钾0.08％，硫酸镁0.05％，氯化钠0.2％，碳酸钙0.15％，硫酸锰0.03％，余量为水，pH6.8±0.2；和/或，发酵条件包括：发酵温度为30-45℃，发酵时间5-20h，搅拌转速100-220r/min；优选为：发酵温度为37℃，搅拌转速120r/min，发酵时间10h。5.由权利要求1所述的植物乳杆菌HEW-A490制备的微生态制剂。6.权利要求5所述微生态制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)发酵培养：将植物乳杆菌HEW-A490的种子液接种于发酵培养基中发酵培养得到发酵液；2)将发酵液经离心获得菌泥，将菌泥和保护剂按比例混合均匀，加适量水制成微囊湿粉，然后与...
【专利技术属性】
技术研发人员：李雪平，
申请(专利权)人：北京好实沃生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。