本发明专利技术涉及一种源于成熟花狭口蛙皮肤的基因，该基因的核酸序列如SEQ ID NO.5所示。所述的基因可编码氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽，该多肽及其突变体具有抗菌、抗肿瘤以及心血管系统疾病和促肠道收缩的活性，可用于制备相关的药物。
【技术实现步骤摘要】
：本专利技术涉及来自动物的抵抗物质，具有涉及源于花狭口蛙的基因及其编码的多于20个氨基酸的肽。
技术介绍
：抗菌肽是一类分子量小于1万，由10-50个氨基酸组成的、具有杀灭或抑制微生物生长的活性多肽。它们不但具有广谱的抗微生物活性，同时具有“传统抗生素”无法比拟的优越性：如，很难诱导菌株产生耐药性，同时兼有免疫调节、促进回肠肌收缩、抗氧化、促胰岛素分泌、抗肿瘤和抗病毒等多种功能(NatRevMicrobiol,2012,10(4):243-254)。此外，在严重细菌感染时，抗菌肽还能够中和内毒素、减轻脓毒症，在快速杀灭病原微生物的同时迅速停止或限制感染扩散(AntimicrobAgentsChemother,2014,58(9):5363-5371)。因此，抗菌肽有希望成为新一代抗微生物药物。其研究与开发则蕴含着巨大的临床治疗药物的制备价值。两栖动物一直以来都是传统药物的源泉。中华蟾蜍(Bufogargarizans)、大蹼铃蟾(Bombinamaxima)、黑斑蛙(pelophylaxnigromaculata)、沼蛙(Hylaranaguentheri)和泽蛙(Euphlyctislimnocharis)等两栖类动物被作为中国的传统中药材而被广泛的应用。现代研究表明：这些两栖动物的皮肤和内脏具有广泛的药理活性，如，广谱抗菌作用、抗肿瘤、局部麻醉、镇痛、免疫调节、对心血管系统的作用等(DongwuxueYanjiu,2015,36(4):183-222)。传统中药药物成分的复杂性及其炮制方法的局限性造成药物活性成分不能更好发挥作用，从这些传统药物中寻找特定的活性单体化合物是中药现代化的重要内容之一。在国外，两栖类皮肤特定药理活性单体化合物的寻找已经成为新药专利技术的热点。截至目前，至少有20种从不同生物分离得到的活性多肽候选药物进入了临床试验阶段(FutureMedChem,2013,5(3):315-337)。如，Xoma公司研发的用于治疗脑膜炎球菌血症的孤儿药Neuprex和Cutanealifescience公司研发的用于治疗红斑痤疮的Omiganan外用乳膏均进入三期临床研究(CurtProteinPeptSci,2012,13(7):611-619)；另外，Ellceutix公司研发的用于治疗MRSA引起的皮肤感染药物PMX-30063已经进入开发临床前研究(ExpertRevAntiInfectTher,2014,12(12):1477-1486)。肿瘤是危害人类健康的一类主要疾病，统计资料表明，我国从上世纪80年代起，恶性肿瘤的发病率呈明显上升趋势，常见肿瘤的发病率的增长在5-10％之间，年恶性肿瘤发病人数为160万，每年死于恶性肿瘤的患者为130万人，目前肿瘤病人的数目在540万。大中城市中肺癌、乳腺癌发病率最高；农村地区则以胃癌、食管癌发病率最高。可见，我国抗肿瘤药的市场潜力巨大。治疗恶性肿瘤的相关研究工作正在不断取得进展，据了解，目前疗效较好的常用抗肿瘤药物约有50种，WHO公布的常用抗肿瘤药物为49种，我国能够生产其中的40种抗肿瘤药物。由于抗肿瘤药物的研发周期长，我国生产企业大部分只能再单纯依靠仿制国外上市的新型抗肿瘤药物来维持本企业的生存。另外在化疗中所使用的药物，如阿霉素、环磷酰胺、肿瘤坏死因子等均具有较大的人体毒性，副作用非常大，因而肿瘤治疗药物的开发是药物研制的热点。目前从两栖动物皮肤中发现一些带有抗肿瘤活性的多肽，这些多肽大部分是抗菌肽，如，magainins、aureins、citropins、brevinin-1、ranatuerin-2、temporin和dermaseptin等(ChemRev.2015,115(4):1760-1846)。这些多肽是潜在的肿瘤治疗药物。此外，目前也从两栖动物皮肤中鉴定带抗菌活性的bradykinin、bombesin、tachykinin等亲肌肉肽。这些多肽能够促进回肠肌或平滑肌收缩，在动物体内参与了许多病理反应，如血管舒张、血管渗透、血压控制、疼痛产生和炎症反应等。其中的bradykinin及其受体已被证实是血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素AT受体拮抗剂在高血压、心肌梗死、心力衰竭治疗中的作用靶点。因此，从两栖动物皮肤中鉴定的亲肌肉肽可以用作心血管系统药物和促肠道收缩药物应用(ChemRev.2015,115(4):1760-1846)。我国对两栖类药物的应用有悠久的历史，但对其活性成分和药理性质的研究主要集中于生物碱等有机小分子，对其皮肤活性肽类物质研究不多。花狭口蛙(Kaloulapulchra)主要分布于我国分布于福建、广东、广西、海南、云南等地，是国家保护的有益的或者有重要经济、科学研究价值的陆生野生动物。由于其个体小，难于捕捉，对其药理活性物质的研究很少。
技术实现思路
：本专利技术所要解决的技术问题是提供一种源于花狭口蛙皮肤的基因，该基因编码的多肽具有具有多种生物活性。本专利技术解决上述技术问题的方案如下：一种源于成熟花狭口蛙皮肤的基因，该基因的核酸序列如SEQIDNO.5所示。上述基因中第127-216位核苷酸编码的多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。上述多肽为由30个氨基酸组成的环肽，其第二十四位半胱氨酸和第三十位半胱氨酸形成分子内二硫键，分子量为3054.97道尔顿，等电点为9.061。一种SEQIDNO.1所示多肽的突变体，该突变体的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。上述SEQIDNO.2所示突变体由SEQIDNO.1所示序列第5位的丙氨酸和第20位的赖氨酸分别被苏氨酸和精氨酸替代得到，其分子量为3140.22道尔顿，等电点为9.116。上述多肽及其突变体具有抗菌、抗肿瘤以及心血管系统疾病和促肠道收缩的活性，可用于制备相关的药物。本专利技术所述基因中第127-216位核苷酸编码的多肽及其突变体具有结构简单、人工合成方便、活性强等优点。附图说明：图1为本专利技术所述多肽的HPLC色谱图。图2为本专利技术所述突变体的HPLC色谱图。图3为本专利技术所述多肽的质谱图。图4为本专利技术所述突变体的质谱图。图5本专利技术所述多肽和突变体促进豚鼠离体回肠肌收缩的波形图。图6为本专利技术所述多肽及其突变体对高脂模型SD大鼠体重影响结果的条形图。图7为本专利技术所述多肽及其突变体对对高脂模型SD大鼠血清TC、TG、HDL-C影响结果的条形图。具体实施方式：为了便于理解，先将下述实施例中所涉及的基因、肽和突变体名称作如下说明：下述的花狭口蛙多功能抗菌肽即为SEQIDNO.5所示序列第127-216位核苷酸编码的多肽，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；下述花狭口蛙多功能抗菌肽的编码基因即为SEQIDNO.5所示的源于成熟花狭口蛙皮肤的基因；下述花狭口蛙多功能抗菌肽2即为所述的突变体，其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。实施例1(基因克隆)I、花狭口蛙皮肤总RNA提取：取300mg花狭口蛙的皮肤组织，加入10m1美国GIBCOBRL公司产品生产的Trizol溶液，于20m1玻璃匀浆器中匀浆30min。加入等体积酚/氯仿溶液，剧烈混匀，室温放置10min，4℃，12000rpm离心10min，弃除沉淀。向上清中加入等体积的异丙醇，室温放置10m本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种源于成熟花狭口蛙皮肤的基因，该基因的核酸序列如SEQ ID NO.5所示。
【技术特征摘要】
1.一种源于成熟花狭口蛙皮肤的基因，该基因的核酸序列如SEQIDNO.5所示。2.一种多肽，该多肽是由权利要求1所述基因中第127-216位核苷酸编码的，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。3.一种多肽的突变体，该突变体是权利要求2所述多肽氨基酸序列的第5位丙氨酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐学清，陈新，曾白霜，张贝，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。