三特异性结合分子和其使用方法技术

本发明专利技术涉及三特异性结合分子，其是具备三个结合结构域的多链多肽分子，因此能够介导与三个表位的配位结合。可选择结合结构域，以使得三特异性结合分子能够结合任何三个不同表位。这样的表位可以是相同抗原的表位或两个或三个不同抗原的表位。在优选的实施方式中，一个这样的表位能够结合CD3，第二个这样的表位能够结合CD8，和第三个这样的表位能够结合疾病相关的抗原的表位。本发明专利技术也提供新的ROR1结合抗体，以及其衍生物和这样的组合物的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求美国专利申请号62/008,229(2014年6月5日提交；未决)、62/004,571(2014年5月29日提交；未决)和62/107,824(2015年1月26日提交)的优先权，其每一篇申请均通过引用以其整体并入本文。序列表的引用：根据37C.F.R.1.821以及下面的条款，本申请包括一个或多个序列表，所述序列表以计算机可读介质(文件名：1301_0114PCT_Sequence_Listing_ST25.txt，2015年5月18日创建，并且大小为244,021字节)的形式公开，并且通过引用将所述文件以其整体并入本文文件。本专利技术的背景：
：本专利技术涉及三特异性结合分子，其是具备三个结合结构域的多链多肽分子，因此能够介导与三个表位的配位结合。可选择结合结构域，使得三特异性结合分子能够结合任何三个不同表位。这样的表位可以是相同抗原的表位，或两个或三个不同抗原的表位。在优选的实施方式中，一个这样的表位能够结合CD3，第二个这样的表位能够结合CD8，和第三个这样的表位能够结合疾病相关的抗原的表位。本专利技术也提供新的ROR1结合抗体，以及其衍生物和这样的组合物的用途。相关技术描述：I.哺乳动物免疫系统哺乳动物免疫系统用作抵抗各种病况，包括例如损伤、感染和瘤形成的防御。人和其他哺乳动物发展对病原体、外源物质和癌症抗原的免疫应答的效率取决于两个特征：对抗原识别的免疫应答的精巧的特异性，和当用相同的抗原再激活时允许更快和更强力应答的免疫记忆(Portolés,P.等(2009)“TheTCR/CD3Complex:OpeningtheGatetoSuccessfulVaccination,”CurrentPharmaceuticalDesign15:3290-3300；Guy,C.S.等(2009)“OrganizationofProximalSignalInitiationattheTCR:CD3Complex,”ImmunolRev.232(1):7-21)。哺乳动物免疫系统由下述两个分开但是相互关联的系统介导：细胞和体液免疫系统。一般而言，体液系统由可溶性产物(抗体或免疫球蛋白)介导，所述可溶性产物具有结合并中和被系统识别为身体外源的产物的能力。相反，细胞免疫系统涉及动员某些细胞，称为“T细胞”，其具有各种治疗作用。T细胞是淋巴细胞，其源自胸腺，并且在组织、淋巴系统和循环系统之间循环。响应外源结构(抗原)的存在和识别，T细胞被“激活”，以启动免疫应答。在许多情况下，这些外源抗原由于瘤形成或感染而在宿主细胞上表达。尽管T细胞它们本身不分泌抗体，但是它们对于通过第二类淋巴细胞——B细胞(其源自骨髓)的抗体分泌通常是必要的。关键地，T细胞展示非凡的免疫特异性，以便能够区分一个抗原与另一个抗原)。两种类型的T细胞——“T辅助细胞”和“细胞毒性T细胞”尤其相关。T辅助细胞特征在于它们的糖蛋白，CD4的表达(即，它们是“CD4+”)。CD4+T细胞是大部分哺乳动物免疫和自体免疫应答的主要组织者(Dong,C.等(2003)“ImmuneRegulationbyNovelCostimulatoryMolecules,”Immunolog.Res.28(1):39-48)。已经发现CD4+T细胞的激活通过排列于抗原呈递细胞(比如B细胞、巨噬细胞或树突细胞)的表面上的抗原：II类主要组织相容性(MHCII)分子复合物和排列于初始CD4+T细胞的表面上的两个分子——T细胞受体(“TCR”)和CD3细胞表面受体配体的复合物之间的共刺激相互作用而被介导。激活的T辅助细胞能够增殖成Th1细胞，其能够介导对靶细胞的炎症反应。细胞毒性T细胞特征在于它们对CD8的表达(即，它们是“CD8+”以及CD3+)。已经发现CD8+T细胞的激活通过排列于靶细胞的表面上的抗原：I类主要组织相容性(MHCI)分子复合物和排列于CD8+T细胞表面上的CD8和T细胞受体复合物之间的共刺激相互作用而被介导。与仅仅由某些免疫系统细胞表达的MHCII分子不同，MHCI分子被非常广泛地表达。因此，细胞毒性T细胞能够结合各种细胞类型。激活的细胞毒性T细胞通过它们释放细胞毒素穿孔蛋白、粒酶和粒溶素(granulysin)而介导细胞杀伤。通过穿孔蛋白的作用，粒酶进入靶细胞的细胞质，并且它们的丝氨酸蛋白酶功能触发胱天蛋白酶级联，其是最终导致靶细胞的细胞凋亡(程序性细胞死亡)的一系列半胱氨酸蛋白酶。T细胞受体(“TCR”)是α和β链的共价连接的异源二聚体(“TCRαβ”)。这些链是长度为259(α)和296(β)个氨基酸的I类膜多肽。CD3分子是T细胞共受体，由五条不同的多肽链组成(CD3γ链、CD3δ链、两条CD3ε链和两条ζ链)。独立的多肽链缔合，以形成三个二聚体的复合物(εγ、εδ、ζζ)(Wucherpfennig,K.W.等(2010)“StructuralBiologyOfTheTCellReceptor:InsightsintoReceptorAssembly,LigandRecognition,AndInitiationofSignaling,”ColdSpringHarb.Perspect.Biol.2(4):a005140；1-14页；Chetty,R.等(1994)“CD3:Structure,FunctionAndTheRoleOfImmunostainingInClinicalPractice,”J.Pathol.173:303-307；Guy,C.S.等(2009)“OrganizationofProximalSignalInitiationattheTCR:CD3Complex,”ImmunolRev.232(1):7-21；Call,M.E.等(2007)“CommonThemesInTheAssemblyAndArchitectureOfActivatingImmuneReceptors,”Nat.Rev.Immunol.7:841-850；Weiss,A.(1993)“TCellAntigenReceptorSignalTransduction:ATaleOfTailsAndCytoplasmicProtein-TyrosineKinases,”Cell73:209-212)。CD3复合物与TCR结合以便在T淋巴细胞中产生激活信号。在缺少CD3的情况下，TCR不能适当组装，并被降解(Thomas,S.等(2010)“MolecularImmunologyLessonsFromTherapeuticTCellReceptorGeneTransfer,”Immunology129(2):170–177)。发现CD3结合所有成熟T细胞的膜，并且事实上不结合其他细胞类型的膜(见，Janeway,C.A.等(2005)在以下中：Immunobiology:THEIMMUNESYSTEMINHEALTHANDDISEASE,”第6版，GarlandSciencePublishing,NY,214-216页；Sun,Z.J.等(2001)“MechanismsContributingToTCel本文档来自技高网...

【技术保护点】
能够免疫特异性结合三个不同的表位的三特异性结合分子，其中所述结合分子包括共价复合在一起的四条不同的多肽链并且包括：(I)抗原结合结构域I，其能够免疫特异性结合第一抗原上存在的表位I，和抗原结合结构域II，其能够免疫特异性结合第二抗原上存在的表位II，其中所述抗原结合结构域I和所述抗原结合结构域II都是双抗体型结合结构域；(II)非双抗体型抗原结合结构域III，其能够免疫特异性结合第三抗原上存在的表位III；和(III)Fc结构域，其通过两个CH2‑CH3结构域彼此缔合而形成。其中所述第一抗原、第二抗原和第三抗原是相同的抗原，或独立地与所述抗原中的另一抗原相同或不同。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.29 US 62/004,571;2014.06.05 US 62/008,229;1.能够免疫特异性结合三个不同的表位的三特异性结合分子，其中所述结合分子包括共价复合在一起的四条不同的多肽链并且包括：(I)抗原结合结构域I，其能够免疫特异性结合第一抗原上存在的表位I，和抗原结合结构域II，其能够免疫特异性结合第二抗原上存在的表位II，其中所述抗原结合结构域I和所述抗原结合结构域II都是双抗体型结合结构域；(II)非双抗体型抗原结合结构域III，其能够免疫特异性结合第三抗原上存在的表位III；和(III)Fc结构域，其通过两个CH2-CH3结构域彼此缔合而形成。其中所述第一抗原、第二抗原和第三抗原是相同的抗原，或独立地与所述抗原中的另一抗原相同或不同。2.权利要求1所述的三特异性结合分子，其中所述表位I、表位II或表位III之一是细胞受体的表位。3.权利要求1-2任一项所述的三特异性结合分子，其中所述表位I、表位II或表位III之一是疾病相关的抗原的表位。4.权利要求3所述的三特异性结合分子，其中所述疾病相关的抗原是癌症抗原，其排列于癌症细胞的表面上。5.权利要求3所述的三特异性结合分子，其中所述疾病相关的抗原是病原体抗原，其排列于病原体或感染病原体的细胞的表面上。6.权利要求1-5任一项所述的三特异性结合分子，其中所述Fc结构域能够结合排列在细胞表面上的Fc受体。7.权利要求3-6任一项所述的三特异性结合分子，其中所述表位I、表位II或表位III之一是CD3的表位，表位I、表位II或表位III的第二个表位是CD8的表位，和表位I、表位II或表位III的第三个表位是所述疾病相关的抗原的表位，并且，其中所述三特异性结合分子的所述抗原结合结构域I、II和III介导细胞毒性T细胞和表达所述疾病相关抗原的细胞的配位结合。8.权利要求7所述的三特异性结合分子，其中所述CD3、所述CD8排列在T细胞的表面上，并且其中所述疾病相关的抗原排列在癌症细胞、病原体或感染病原体的细胞的表面上，并且其中所述免疫特异性结合足够共定位所述CD3和所述CD8以及所述疾病相关的抗原，从而针对排列所述疾病相关抗原的细胞促进激活排列所述CD8的T细胞。9.权利要求1-8任一项所述的三特异性结合分子，其中所述非双抗体型结合结构域III包括Fab型结合结构域(VLIII/VHIII)，其能够免疫特异性结合所述表位III，其中所述分子包括：(A)第一多肽链：(I)其在N-末端至C-末端方向包括：(1)能够结合所述三个表位的第一个表位的免疫球蛋白的轻链可变结构域(VLI)；(2)能够结合所述三个表位的第二个表位的免疫球蛋白的重链可变结构域(VHII)；(3)(a)第一包含半胱氨酸的结构域；和异源二聚体-促进结构域；或(b)包含半胱氨酸的异源二聚体-促进结构域；(5)第二包含半胱氨酸的结构域；和(6)IgG的CH2和CH3结构域；或(II)其在N-末端至C-末端方向包括：(1)第一包含半胱氨酸的结构域；(2)IgG的CH2和CH3结构域；(3)能够结合所述三个表位的第一个表位的免疫球蛋白的轻链可变结构域(VLI)；(4)能够结合所述三个表位的第二个表位的免疫球蛋白的重链可变结构域(VHII)；(5)(a)第二包含半胱氨酸的结构域；和异源二聚体-促进结构域；或(b)包含半胱氨酸的异源二聚体-促进结构域；(B)第二多肽链，其在N-末端至C-末端方向包括：(1)能够结合所述所述三个表位的第二个表位的免疫球蛋白的轻链可变结构域(VLII)；(2)能够结合所述所述三个表位的第一个表位的免疫球蛋白的重链可变结构域(VHI)；(3)(a)第一包含半胱氨酸的结构域；和异源二聚体-促进结构域；或(b)包含半胱氨酸的异源二聚体-促进结构域；其中所述第二多肽链的所述异源二聚体-促进结构域与所述第一多肽链的所述异源二聚体-促进结构域互补；(C)第三多肽链，其在N-末端至C-末端方向包括：(1)能够结合所述三个表位的第三个表位的免疫球蛋白的重链可变结构域(VHIII)；和(2)CH1结构域、包含半胱氨酸的铰链结构域和IgG的CH2-CH3结构域；和(D)第四多肽链，其在N-末端至C-末端方向包括：(1)能够结合所述所述三个表...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·S·约翰逊，黄玲，G·R·齐齐利，K·沙哈，郭家颖，S·J·布尔克，刘丽勤，P·A·摩尔，E·波维尼，B·巴拉特，
申请(专利权)人：宏观基因有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US