miR-29及其抑制剂在制备抗器官移植排斥药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体是miR‑29及其抑制剂在制备抗器官移植排斥药物中的应用。本发明专利技术提供了miR‑29的新的医药用途，包括两方面：miR‑29的抑制剂能够显著抑制同种异基因器官移植后T细胞介导的急性排斥反应；miR‑29的抑制剂能够显著影响B细胞发育、诱导B细胞凋亡，减少外周B细胞数量和比例，从而有效抑制同种异基因器官移植后抗体介导的免疫排斥反应。本发明专利技术为同种异体移植后的排斥反应特别是抗体介导的急慢性排斥反应的治疗提供了新的防治手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药
，具体地说，是miR-29的新的医药用途，具体包括miR-29及其抑制剂在制备抗器官移植排斥药物中的应用。
技术介绍
器官移植是治疗终末期疾病的最为有效的临床手段。随着CsA、FK等新型免疫抑制剂的临床应用，有效地降低了急性排斥反应的发生，显著延长了器官移植物的存活期，挽救了众多器官终末期患者的生命。但是，器官移植后的排斥反应仍然是影响移植物长期存活的主要障碍，特别是以移植物纤维化和血管内膜增生病变为病理表现的慢性排斥，已成为移植物远期失功最重要的原因。现有的免疫抑制剂虽能有效控制急性排斥反应的发生率，显著延长移植物的存活时间，但仍然不能解决移植物长期存活的问题，提示移植排斥免疫应答和调控机制的复杂以及现有的抗排斥方法有待于进一步提高和完善；因此，进一步研究移植后免疫细胞活化与耐受调控的新机制、提高治疗排斥反应的效果一直是移植免疫学研究急待解决的热点问题。近年来，有关免疫细胞的活化调控新机制，包括基因选择性表达调控的DNA甲基化、组蛋白修饰以及基因转录后MicroRNA(miRNA)的调控研究，从转录、转录后表观调控等多种层面实现对免疫细胞活化以及基因表达的精细调控，不但揭示免疫细胞调控机制的复杂性及精确性，也为更精确、更有效地防治排斥反应提供了方向和切入点。microRNA(miRNA)是一类长度约为22个核苷酸的非编码小片段RNA，其进化保守，通过与mRNA(messengerRNA)的3’非翻译区(3’untranslationalregion，3’UTR)相互作用从而调控mRNA的翻译，进而广泛作用于发育、肿瘤、炎症、移植排斥等各个生物学过程。miRNA-255等已经被证实在急性排斥中发挥了重要作用。microRNA与排斥反应的关系必将随着研究的深入而逐渐显现。miR-29的研究目前主要集中于肿瘤、炎症、自身免疫病等方面。尚未有其与实体器官移植排斥、抗病毒等方面的报导。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供miR-29的新的医药用途，具体包括miR-29及其抑制剂在制备抗器官移植排斥药物中的应用。本专利技术的第一方面，提供miR-29在制备抗器官移植排斥药物中的应用。所述的miR-29的核苷酸序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示。由于mir-29b-1和mir-29b-2成熟体结构相似，所以一般认为miR-29家族具有三个主要成员：mir-29a、mir-29b、mir-29c，其序列分别如核苷酸序列SEQIDNO.1、SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。miR-29a：5’-UAGCACCAUCUGAAAUCGGUUA-3’，SEQIDNO.1；miR-29b：5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU-3’，SEQIDNO.2；miR-29c：5’-UAGCACCAUUUGAAAUCGGUUA-3’，SEQIDNO.3；所述的抗器官移植排斥药物抑制特异性干扰miR-29基因表达或加工。本专利技术的第二方面，提供miR-29抑制剂在制备抗器官移植排斥药物中的应用。优选的，所述的miR-29抑制剂包括但不限于：特异性结合miR-29的蛋白，特异性干扰miR-29基因表达、加工的小干扰分子，如siRNA分子、miRNA分子、反义核苷酸等。更优选的，所述的miR-29抑制剂选自特异性干扰miR-29基因表达的小干扰RNA分子或反义核苷酸。在本专利技术的一个优选实施例中，所述的miR-29抑制剂为anatogmiR-29。Antagomir是经过特殊化学修饰的miRNA拮抗剂，能够竞争性地结合体内成熟miRNA，阻止miRNA与其靶基因mRNA的互补配对，从而抑制miRNA发挥作用。Antagomir技术最早于2005年发表于《Nature》上(KrützfeldtJ,RajewskyN,BraichR,etal.SilencingofmicroRNAsinvivowith‘antagomirs’[J].Nature,2005,438(7068):685-689.)。其主要步骤包括：1)根据目的microRNA的序列合成寡核苷酸单链；2)3’端进行胆固醇标记；3)5’端两个硫代硫酸位点修饰，3’端四个硫代硫酸位点修饰；4)全链2’-甲基化修饰。本专利技术所用antagomiR-29基于上述已经公开报道的技术设计而成，所用序列为5’-usasaccgauuucagauggugscsusas-Chol-3’，交由广州锐博生物科技有限公司合成。所述的miR-29抑制剂antagomiR-29能够显著影响B细胞发育、诱导B细胞凋亡，减少外周B细胞数量和比例，最终抑制同种异基因器官移植后抗体介导的免疫排斥反应。所述的miR-29抑制剂antagomiR-29能够显著抑制同种异基因器官移植后T细胞介导的急性排斥反应。本专利技术的第三方面，提供一种抗器官移植排斥的药物组合物，所述的抗器官移植排斥的药物组合物是以miR-29抑制剂为唯一活性成份，或者是含有miR-29抑制剂的药物组合物。所述的药物组合物含有有效量的所述的miR-29抑制剂，以及药学上可接受的载体。所述的“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即有合理的效益/风险比的物质。所述的“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。任何适用的给药途径都是可以的，包括但不限于：口服、静脉内注射、皮下注射、肌肉给予、局部给予、植入、缓释给予、心脏内给予等；优选的，所述给药方式是非肠道给予的。本专利技术优点在于：本专利技术提供了miR-29的新的医药用途，包括两方面：1、miR-29的抑制剂能够显著抑制同种异基因器官移植后T细胞介导的急性排斥反应。2、miR-29的抑制剂能够显著影响B细胞发育、诱导B细胞凋亡，减少外周B细胞数量和比例，从而有效抑制同种异基因器官移植后抗体介导的免疫排斥反应。本专利技术为同种异体移植后的排斥反应特别是抗体介导的急慢性排斥反应的治疗提供了新的防治手段。附图说明图1.antagomiR-29对急性排斥反应、生存时间、肿胀程度的影响；其中A、B：与对照组相比，antagomiR-29干预后，能够明显减轻移植心脏、脾脏、胸腺以及淋巴结的肿胀程度；C：antagomiR-29亦能显著抑制急性排斥反应，延长移植物生存时间。图2.antagomiR-29对移植物中免疫细胞浸润的影响；A：antagomiR-29干预后，移植物中免疫细胞浸润明显减少，C、D：与对照组相比，antagomiR-29干预后，移植心脏中CD4+以及CD8+T的浸润显著减少，B：tunel表达增多。图3.antagomiR-29对淋巴结和脾脏中T、B细胞的影响；A、C：与对照组相比，antagomiR-29干预后，淋巴结和脾脏中B细胞比例明显减少；T细胞比例上升；CD4+T比例明显减少，CD8+T细胞比例明显上升；B、D：就细胞总量来说，与对照组相比，antagomiR-29干预后，淋巴结(图3B)以及脾脏(图3D)中，无论是T细胞还是B细胞；无论是CD4+T细胞还是CD8+T细胞均明显低于对照组。图4.antagomiR-29显著本文档来自技高网...

【技术保护点】
miR‑29在制备抗器官移植排斥药物中的应用，所述的miR‑29的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。

【技术特征摘要】
1.miR-29在制备抗器官移植排斥药物中的应用，所述的miR-29的核苷酸序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示。2.根据权利要求1所述的miR-29在制备抗器官移植排斥药物中的应用，其特征在于，所述的抗器官移植排斥药物特异性干扰miR-29基因表达或加工。3.miR-29抑制剂在制备抗器官移植排斥药物中的应用。4.根据权利要求3所述的miR-29抑制剂在制备抗器官移植排斥药物中的应用，其特征在于，所述的miR-29抑制剂包括：特异性结合miR-29的蛋白，特异性干扰miR-29基因表达、加工的siRNA分子、miRNA分子或反义核苷酸。5.根据权利要求4所述的miR-29抑制剂在制备抗器官移植排斥药物中的应用，其特征在于，所述的miR-29抑制剂选自特异性干扰miR-29基因表达的siRNA分子或反义核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：王全兴，丁国善，刘芳，郭猛，张铭健，展洋洋，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31