用于扩增细胞群的方法、试剂盒及装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及扩增细胞群诸如淋巴细胞的体外方法，其包括使包含细胞群的样品与多聚化剂接触。所述多聚化剂具有可逆固定(结合)于其上的、向细胞提供初级激活信号的第一试剂，以及任选地，具有提供共刺激信号的第二试剂。本发明专利技术还提供了用于扩增细胞的多聚化剂、试剂盒、排布和装置。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本专利技术要求于2014年4月16日向美国专利商标局提交的美国临时专利申请61/980,506“用于扩增细胞群的方法、试剂盒及装置(Methods,KitsAndApparatusForExpandingAPopulationOfCells)”的优先权权益，其内容特此出于所有目的通过引用整体并入本文。专利
本专利技术涉及细胞群诸如淋巴细胞群的扩增(增殖)。本专利技术大体上提供了一种用于细胞群扩增(增殖)的新方法及试剂，其需要受体结合分子(诸如文本所述的第一试剂)与细胞表面的受体分子结合，从而向细胞提供初级激活信号。本专利技术采用一种多聚化剂，其具有固定(结合)结合于其上的、向细胞提供初级激活信号的第一试剂。这种初级激活信号可足以激活细胞以扩增/增殖。此种第一试剂能可逆或不可逆地与多聚化剂结合。该多聚化剂还可以具有固定(结合)于其上的、刺激细胞表面辅助分子的第二试剂。该第二试剂当与细胞表面的辅助分子结合时，可由此刺激已激活的细胞扩增。此外，第二试剂能可逆或不可逆地与多聚化剂结合。多聚化剂可以被固定在固体载体上或是可溶的。一方面，本文所公开的方法是细胞群的连续扩增，其中一个完整的淋巴细胞群被刺激/扩增，然后在适合的固定相中通过层析除去扩增所必需的试剂，被扩增/刺激的细胞任选地用如T细胞受体或嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，CAR)进行转染，并用与所引入的T细胞受体或嵌合抗原受体结合的不同刺激分子进行二次刺激扩增。本专利技术还涉及一种用于选定细胞群扩增的装置。
技术介绍
体外增殖T细胞群技术的发展对T细胞识别抗原和T细胞激活理解方面的许多进展是至关重要的。用于人抗原特异性T细胞克隆繁殖的培养方法的开发已经用于界定被T细胞识别的由病原体和肿瘤表达的抗原，从而建立免疫疗法以治疗多种人类疾病。抗原特异性T细胞可在体外扩增用于过继性细胞免疫疗法或癌症疗法，其中输注这样的T细胞已在荷瘤宿主中显示出抗肿瘤活性。此外，过继性免疫疗法也被用于治疗免疫妥协个体的病毒感染。近几年已建立的在缺乏外源性生长因子和佐细胞的情况下体外扩增人T细胞的方法在美国专利US6,352,694B1和欧洲专利EP0700430B1中有所描述。这些专利中公开了一种用于诱导T细胞群增殖的体外方法。该方法包括使T细胞群与固体表面接触，所述固体表面具有直接固定于其上的：(a)第一试剂，其向T细胞提供初级激活信号，从而激活T细胞；和(b)第二试剂，其刺激T细胞表面的辅助分子，从而刺激已激活的T细胞。第一试剂和第二试剂与T细胞的结合诱导T细胞增殖/扩增。在美国专利US6,352,694B1和欧洲专利EP0700430B1中所述的优选第一试剂是单克隆抗CD3抗体，其在T细胞中与TCR/CD3(TCR＝T细胞受体(Tcellreceptor))复合物结合，从而刺激TCR/CD3复合物相关的信号。根据这两篇专利所述的优选第二试剂是与T细胞呈递的辅助分子CD28结合的单克隆抗CD28抗体。该第二试剂与CD28辅助分子的结合提供了对激活的T细胞扩增/增殖所必需的必要共刺激。同时，市售的CD3/CD28(Invitrogen)可用于T细胞扩增。CD3/CD28CTSTM是均质的、4.5μm超顺磁性无菌无热原的、涂覆有抗人T细胞的CD3和CD28细胞表面分子的经亲和纯化的单克隆抗体混合物的聚苯乙烯珠。然而，这种磁珠，例如，在临床试验或治疗目的所要求的条件下，难以整合到扩增细胞的方法中，因为必须保证这些磁珠在向患者施用扩增的T细胞于之前被完全去除。因此，本专利技术的目的在于为研究、诊断特别是治疗的目的提供一种用于扩增细胞群诸如调节性T细胞或中枢记忆T细胞的替代方法。理想地，这种新方法也应当适于整合到可用于快速简便扩增为治疗应用所需的细胞群的自动化过程中。这一目的是通过独立权利要求的主题，尤其是独立权利要求中所述的方法、试剂盒、排布和装置实现的。专利技术概述本专利技术提供了用于体外扩增所需细胞群的方法、试剂盒、排布和装置，所述细胞表面具有受体分子，其一旦与合适的试剂结合便会向细胞群提供初级激活信号，并从而激活细胞群扩增(增殖)。因此，本专利技术的方法也可用于诱导细胞群增殖。第一方面，本专利技术提供了一种扩增细胞群的体外方法，其包括使包含细胞群的样品与多聚化剂接触，其中所述多聚化剂具有可逆固定(结合)于其上的、向细胞提供初级激活信号的第一试剂；其中所述多聚化剂包含至少一个结合位点Z1用于第一试剂的可逆结合，其中所述第一试剂包含至少一个结合配偶体C1，其中所述结合配偶体C1能够可逆地与多聚化剂的结合位点Z1结合，其中所述第一试剂通过结合配偶体C1和结合位点Z1之间形成的可逆键与多聚化剂相结合，以及其中所述第一试剂与细胞表面的受体分子结合，由此向细胞提供初级激活信号从而激活细胞。第二方面，本专利技术提供了一种扩增细胞群的体外方法，其包括使包含细胞群的样品与多聚化剂接触，其中所述多聚化剂是可溶形式的，并且具有固定(结合)于其上的、向细胞提供初级激活信号的第一试剂；其中所述多聚化剂包含至少一个结合位点Z1用于第一试剂的结合，其中所述第一试剂包含至少一个结合配偶体C1，其中所述结合配偶体C1能够与多聚化剂的结合位点Z1结合，其中所述第一试剂通过结合配偶体C1和结合位点Z1之间形成的键与多聚化剂相结合，以及其中所述第一试剂与细胞表面的受体分子结合，由此向细胞提供初级激活信号从而激活细胞。第三方面，本专利技术提供了用于扩增细胞群的试剂盒，所述试剂盒包括：(i)多聚化剂，其中，所述多聚化剂包含至少一个结合位点Z用于第一试剂的可逆结合，(ii)第一试剂，其与细胞表面受体分子结合，由此向细胞提供初级激活信号从而激活细胞，其中所述第一试剂包含至少一个结合配偶体C1，其中所述结合配偶体C1能够可逆地与多聚化剂的结合位点Z1结合，其中所述第一试剂通过结合配偶体C1和结合位点Z1之间形成的可逆键与多聚化剂相结合，以及(iii)第二试剂，其刺激细胞表面的辅助分子，其中所述第二试剂包含结合配偶体C2，其中所述结合配偶体C2能够可逆地与多聚化剂的结合位点Z2结合，其中所述第二试剂通过结合配偶体C2和结合位点Z2之间形成的键与多聚化剂相结合，其中所述第二试剂与细胞表面的辅助分子结合，从而刺激已激活的细胞。第四方面，本专利技术提供了一种用于扩增细胞群的试剂盒，所述试剂盒包括：(i)多聚化剂，其中所述多聚化剂是可溶形式的，并且包含至少一个结合位点Z用于第一试剂的可逆结合,(ii)第一试剂，其与细胞表面的受体分子结合，由此向细胞提供初级激活信号从而激活细胞，其中所述第一试剂包含至少一个结合配偶体C1，其中所述结合配偶体C1能够与多聚化剂的结合位点Z1结合，其中所述第一试剂通过结合配偶体C1和结合位点Z1之间形成的可逆键与多聚化剂相结合。第五方面，本专利技术提供了一种连续扩增淋巴细胞群的体外方法，其中所述淋巴细胞群包含T细胞，所述方法包括：使含有包含T细胞的淋巴细胞群样品与多聚化剂接触，其中所述多聚化剂是可溶形式，并且具有可逆固定于其上的(i)向T细胞提供初级激活信号的第一试剂和(ii)刺激T细胞表面辅助分子的第二试剂，其中所述多聚化剂包含至少一个结合位点Z1用于第一试剂的可逆结合,其中所述第一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种扩增细胞群的体外方法，其包括使包含细胞群的样品与多聚化剂接触，其中，所述多聚化剂具有可逆固定(结合)于其上的、向细胞提供初级激活信号的第一试剂；其中，所述多聚化剂包含至少一个结合位点Z1用于第一试剂的可逆结合，其中，所述第一试剂包含至少一个结合配偶体C1，其中所述结合配偶体C1能够与多聚化剂的结合位点Z1可逆结合，其中所述第一试剂通过结合配偶体C1和结合位点Z1之间形成的可逆键与多聚化剂相结合，以及其中，所述第一试剂与细胞表面的受体分子结合，由此向细胞提供初级激活信号从而激活细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.16 US 61/980,5061.一种扩增细胞群的体外方法，其包括使包含细胞群的样品与多聚化剂接触，其中，所述多聚化剂具有可逆固定(结合)于其上的、向细胞提供初级激活信号的第一试剂；其中，所述多聚化剂包含至少一个结合位点Z1用于第一试剂的可逆结合，其中，所述第一试剂包含至少一个结合配偶体C1，其中所述结合配偶体C1能够与多聚化剂的结合位点Z1可逆结合，其中所述第一试剂通过结合配偶体C1和结合位点Z1之间形成的可逆键与多聚化剂相结合，以及其中，所述第一试剂与细胞表面的受体分子结合，由此向细胞提供初级激活信号从而激活细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多聚化剂具有可逆固定(结合)于其上的、刺激细胞表面辅助分子的第二试剂，其中，所述第二试剂包含结合配偶体C2，其中所述结合配偶体C2能够与多聚化剂的结合位点Z2可逆结合，其中所述第二试剂通过结合配偶体C2与结合位点Z2之间形成的可逆键与多聚化剂相结合，其中，所述第二试剂与细胞表面辅助分子结合，由此刺激已激活的细胞。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述细胞群是淋巴细胞群。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述淋巴细胞群是B细胞群、T细胞群、天然杀伤细胞群或其混合物。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述T细胞群是抗原特异性T细胞群、辅助T细胞群、细胞毒性T细胞、记忆T细胞、调节性T细胞群或天然杀伤T细胞群。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述第一试剂包括MHCI:肽复合物，或者，其特征在于，所述第一试剂刺激T细胞中的TCR/CD3复合物相关信号。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第一试剂是与CD3特异性结合的结合剂。8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述T细胞上的辅助分子是CD28或者CD137。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述与辅助分子的结合第二试剂是与CD28或CD137特异性结合的结合剂，或者，其特征在于，所述第二试剂是两种均能与CD28或CD137特异性结合的不同结合剂的混合物。10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其特征在于，所述与CD3特异性结合的第一试剂选自抗CD3抗体、抗CD3抗体的二价抗体片段、抗CD3抗体的单价抗体片段和具有抗体样结合特性的蛋白质CD3结合分子，和/或，其特征在于，所述与CD28特异性结合的第二试剂选自抗CD28抗体、抗CD28抗体的二价抗体片段、抗CD28抗体的单价抗体片段、具有抗体样结合特性的蛋白质CD28结合分子、抗CD137抗体、抗CD137抗体的二价抗体片段、抗CD137抗体的单价抗体片段、具有抗体样结合特性的蛋白质CD137结合分子、4-1BB配体及其任意混合物。11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述二价抗体片段是(Fab)2’片段或二价单链Fv片段。12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述单价抗体片段选自Fab片段、Fv片段和单链Fv片段(scFv)。13.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述具有抗体样结合特性的蛋白质CD3、CD28或CD137结合分子选自适体、基于脂质运载蛋白家族多肽的突变蛋白、glubody、基于锚蛋白支架的蛋白质、基于晶体支架的蛋白质、adnectin和亲和多聚体(avimer)。14.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述细胞群是B细胞群，以及所述第一试剂是与CD40或CD137特异性结合的结合剂。15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述与CD40或CD137特异性结合的第一结合剂选自抗CD40抗体、抗CD40抗体的二价抗体片段、抗CD40抗体的单价抗体片段和具有抗体样结合特性的蛋白质CD40结合分子，或者抗CD137抗体、抗CD137抗体二价抗体片段、抗CD137抗体的单价抗体片段、具有抗体样结合特性的蛋白质CD137结合分子和CD40配体(CD154)。16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述二价抗体片段是(Fab)2’片段或二价单链Fv片段。17.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述单价抗体片段选自Fab片段、Fv片段和单链Fv片段(scFv)。18.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述具有抗体样结合特性的蛋白质CD40结合分子或蛋白质CD137结合分子选自适体、基于脂质运载蛋白家族多肽的突变蛋白、glubody、基于锚蛋白支架的蛋白质、基于晶体支架的蛋白质、adnectin和亲和多聚体。19.根据权利要求3以及14至18中的任一项所述的方法，其特征在于，所述B细胞上的辅助分子是CD40。20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述第二试剂是CD40配体(CD154)或CD137。21.根据权利要求2至20中任一项所述的方法，其特征在于，所述多聚化剂的结合位点Z1和Z2是相同的。22.根据权利要求21所述的方法，其特征在于，使用的是单一多聚化剂。23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其特征在于，所述多聚化剂被固定在固体表面上。24.根据权利要求23所述的方法，其特征在于，所述固体表面选自磁珠、聚合珠、细胞培养板、微量滴定板、膜、中空纤维及其混合物。25.根据权利要求24所述的方法，其特征在于，所述多聚化剂选自链霉亲和素、亲和素、与生物素可逆结合的链霉亲和素类似物、与生物素可逆结合的亲和素类似物、包含至少两个螯合基团K的试剂，其中所述至少两个螯合基团能够与过渡金属离子结合，由此使A部分能够与寡聚组氨酸亲和标记物、多聚谷胱甘肽-S-转移酶、多聚钙调蛋白和生物素化的载体蛋白结合。26.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其特征在于，所述多聚化剂是可溶形式的。27.根据权利要求26所述的方法，其特征在于，所述多聚化剂包括链霉亲和素的寡聚物或聚合物、亲和素的寡聚物或聚合物、与生物素可逆结合的链霉亲和素类似物的寡聚物或聚合物、与生物素可逆结合的亲和素类似物的寡聚物或聚合物、包含至少两个螯合基团K的试剂，其中所述至少两个螯合基团能够与过渡金属离子结合，由此使所述试剂能够与寡聚组氨酸亲和标记物、多聚谷胱甘肽-S-转移酶、多聚钙调蛋白和生物素化的载体蛋白结合。28.根据权利要求27所述的方法，其特征在于，所述链霉亲和素、亲和素、或与生物素可逆结合的链霉亲和素类似物或与生物素可逆结合的亲和素类似物通过多糖相交联，或者，其特征在于，所述链霉亲和素、亲和素的交联寡聚物或聚合物的交联寡聚物或聚合物、或所述与生物素可逆结合的链霉亲和素类似物或亲和素类似物的交联寡聚物或聚合物经由双功能接头通过交联获得。29.根据权利要求27或28所述的方法，其特征在于，所述链霉亲和素或亲和素的交联寡聚物或聚合物、或所述与生物素可逆结合的链霉亲和素类似物或亲和素类似物的交联寡聚物或聚合物包括三个或更多个链霉亲和素单体。30.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，其特征在于，(a)所述结合配偶体C1和C2相互独立地包括生物素，并且所述多聚化剂包含与生物素可逆结合的链霉亲和素类似物或亲和素类似物，(b)所述结合配偶体C1和C2相互独立地包括与链霉亲和素或亲和素可逆结合的生物素类似物，并且所述多聚化剂包括链霉亲和素、或亲和素、或与所述生物素似物可逆结合的链霉亲和素类似物或亲和素类似物，或者(c)所述结合配偶体C1和C2相互独立地包括链霉亲和素或亲和素结合肽，并且所述多聚化剂包括链霉亲和素、或亲和素、或与所述链霉亲和素或亲和素结合肽可逆结合的链霉亲和素类似物或亲和素类似物。31.根据权利要求30所述的方法，其特征在于，所述结合配偶体C1和C2相互独立地包括链霉亲和素结合肽Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys，并且所述多聚化剂包括在野生型链霉亲和素序列位点第44至47位上包含氨基酸序列Va144-Thr45-Ala46-Arg47的链霉亲和素类似物，或者在野生型链霉亲和素序列位点第44至47位上包含氨基酸序列lle44-Gly45-Ala46-Arg47的链霉亲和素类似物。32.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其特征在于，所述结合配偶体C1和结合配偶体C2分别与所述多聚化剂分别的结合位点Z1和Z2之间的结合在二价阳离子存在下发生。33.根据权利要求32所述的方法，其特征在于，所述结合配偶体C1和结合配偶体C2相互独立地包括钙调蛋白结合肽，并且所述多聚化剂包括钙调蛋白，或者其特征在于，所述结合配偶体C包括FLAG肽，并且所述多聚化剂包括与FLAG肽结合的抗体，或者其特征在于，所述第一结合配偶体C包括寡聚组氨酸标记物，并且所述多聚化剂包括与寡聚组氨酸标记物结合的抗体。根据权利要求11或12所述的方法，其特征在于，所述结合配偶体C与所述多聚化剂的所述结合位点Z之间的结合被金属离子螯合作用破坏。34.根据权利要求33所述的方法，其特征在于，所述金属鳌合作用通过加入EDTA或EGTA完成。35.根据权利要求2至30中任一项所述的方法，其特征在于，所述结合配偶体C1和C2是不同的。36.根据权利要求2至30中任一项所述的方法，其特征在于，所述结合配偶体C1和C2是相同的。37.根据任一前述权利要求所述的方法，其进一步包括破坏所述第一试剂的结合配偶体C1和/或所述第二试剂的结合配偶体C2和所述多聚化剂的结合位点Z1和/或Z2之间的结合。38.根据权利要求37所述的方法，其特征在于，破坏所述第一试剂的结合配偶体C1和/或所述第二试剂的结合配偶体C2和所述多聚化剂的所述结合位点Z1和/或Z2之间的结合导致细胞刺激的终止。39.根据权利要求1至38中任一项所述的方法，其特征在于，所述结合位点Z1和所述结合配偶体C1之间的可逆结合和/或所述结合位点Z2和所述结合配偶体C2之间的可逆结合的解离常数(Kd)在10-2M至10-13M的范围内。40.根据权利要求1至39中任一项所述的方法，其特征在于，所述第一试剂的结合配偶体C1和/或所述第二试剂的结合配偶体C2与所述多聚化剂的所述结合位点Z1和/或结合位点Z2之间的可逆键通过使所述细胞群与以下项接触而被破坏：游离第一结合配偶体C1或能够破坏第一结合配偶体C1和结合位点Z1之间的键的所述第一结合配偶体C1类似物，和/或所述第二结合配偶体C2的游离配偶体或能够破坏第二结合配偶体C2和结合位点Z2之间的键的所述第二结合配偶体C2类似物。41.根据权利要求40所述的方法，其特征在于，所述第一游离配偶体和/或第二游离配偶体是对细胞无害的化合物。42.根据权利要求25至41中任一项所述的方法，其特征在于，所述可逆键通过使细胞与生物素或生物素类似物接触而被破坏，当(a)所述结合配偶体C1和C2相互独立地包括生物素，并且所述多聚化剂包括与生物素可逆结合的链霉亲和素类似物或亲和素类似物，(b)所述结合配偶体C1和C2相互独立地包括与链霉亲和素或亲和素可逆结合的生物素类似物，并且所述多聚化剂包括链霉亲和素、或亲和素、或与所述生物素类似物可逆结合的链霉亲和素类似物或亲和素类似物，或者(c)所述结合配偶体C1和C2相互独立地包括链霉亲和素或亲和素结合肽，并且所述多聚化剂包括链霉亲和素、或亲和素、或与所述链霉亲和素或亲和素结合肽可逆结合的链霉亲和素类似物或亲和素类似物。43.根据权利要求25至39中任一项所述的方法，其特征在于，当所述结合配偶体C1和结合配偶体C2分别与所述多聚化剂分别的结合位点Z1和Z2之间的结合在二价阳离子存在下发生时，所述可逆键通过使细胞与金属螯合剂接触而被破坏。44.一种扩增细胞群的体外方法，其包括使包含细胞群的样品与多聚化剂接触，其中，所述多聚化剂是可溶形式的，并且具有固定(结合)于其上的、向细胞提供初级激活信号的第一试剂；其中，所述多聚化剂包含至少一个结合位点Z1用于第一试剂的可逆结合，其中，所述第一试剂包含至少一个结合配偶体C1，其中所述结合配偶体C1能够与多聚化剂的结合位点Z1结合，其中，所述第一试剂通过结合配偶体C1和结合位点Z1之间形成的键与多聚化剂相结合，以及其中，所述第一试剂与细胞表面的受体分子结合，由此向细胞提供初级激活信号从而激活细胞。45.根据权利要求44所述的方法，其特征在于，所述多聚化剂具有固定(结合)于其上的、刺激细胞表面辅助分子的第二试剂，其中，所述第二试剂包含结合配偶体C2，其中所述结合配偶体C2能够与多聚化剂的结合位点Z2结合，其中，所述第二试剂通过结合配偶体C2与结合位点Z2之间形成的键与多聚化剂相结合，其中，所述第二试剂与细胞表面辅助分子结合，由此刺激已激活的细胞。46.根据权利要求44或45所述的方法去，其特征在于，所述结合配偶体C1和结合位点Z1之间形成的键是不可逆的和/或所述结合配偶体C2和结合位点Z2之间形成的键是不可逆的。47.根据权利要求44或45所述的方法去，其特征在于，所述结合配偶体C1和结合位点Z1之间形成的键是可逆的和/或所述结合配偶体C2和结合位点Z21之间形成的键是可逆的。48.根据权利要求47所述的方法，其特征在于，所述结合位点Z1和所述结合配偶体C1间的可逆结合和/或所述结合位点Z2和所述结合配偶体C2间的可逆结合的解离常数(Kd)在10-2M至10-13M的范围内。49.根据权利要求44至48中任一项所述的方法去，其特征在于，所述细胞群是淋巴细胞群。50.根据权利要求49所述的方法，其特征在于，所述淋巴细胞群是B细胞群、T细胞群或天然杀伤细胞群。51.根据权利要求50所述的方法，其特征在于，所述T细胞群是抗原特异性T细胞群、辅助T细胞群、细胞毒性T细胞、记忆T细胞、调节性T细胞或天然杀伤T细胞。52.根据权利要求51所述的方法，其特征在于，所述第一试剂包括MHCI:肽复合物，或者，其特征在于，所述第一试剂刺激T细胞中的TCR/CD3复合物相关信号。53.根据权利要求52所述的方法，其特征在于，所述第一试剂是与CD3特异性结合的结合剂。54.根据权利要求52或53所述的方法，其特征在于，所述T细胞上的辅助分子是CD28。55.根据权利要求54所述的方法，其特征在于，所述与辅助分子结合的第二试剂是与CD28特异性结合的结合剂。56.根据权利要求53至55中任一项所述的方法，其特征在于，所述与CD3特异性结合的第一结合剂选自抗CD3抗体、抗CD3抗体的二价抗体片段、抗CD3抗体的单价抗体片段和具有抗体样结合特性的蛋白质CD3结合分子，和/或，其特征在于，所述与CD28特异性结合的第二试剂选自抗CD28抗体、抗CD28抗体的二价抗体片段、抗CD28抗体的单价抗体片段和具有抗体样结合特性的蛋白质CD28结合分子。57.根据权利要求56所述的方法，其特征在于，所述二价抗体片段是(Fab)2’片段或二价单链Fv片段。58.根据权利要求56所述的方法，其特征在于，所述单价抗体片段选自Fab片段、Fv片段和单链Fv片段(scFv)。59.根据权利要求58所述的方法，其特征在于，所述具有抗体样结合特性的蛋白质CD3或CD28结合分子选自适体、基于脂质运载蛋白家族多肽的突变蛋白、glubody、基于锚蛋白支架的蛋白质、基于晶体支架的蛋白质、adnectin和亲和多聚体。60.根据权利要求50所述的方法，其特征在于，所述第一试剂是与CD40或CD137特异性结合的结合剂。61.根据权利要求60所述的方法，其特征在于，所述与CD40或CD137特异性结合的第一结合剂选自抗CD40抗体、抗CD40抗体的二价抗体片段、抗CD40抗体的单价抗体片段和具有抗体样结合特性的蛋白质CD40结合分子，或者抗CD137抗体、抗CD137抗体的二价抗体片段、抗CD137抗体的单价抗体片段、具有抗体样结合特性的蛋白质CD137结合分子。62.根据权利要求61所述的方法，其特征在于，所述二价抗体片段是(Fab)2’片段或二价单链Fv片段。63.根据权利要求61所述的方法，其特征在于，所述单价抗体片段选自Fab片段、Fv片段和单链Fv片段(scFv)。64.根据权利要求61所述的方法，其特征在于，所述具有抗体样结合特性的蛋白质CD40结合分子或蛋白质CD137结合分子选自适体、基于脂质运载蛋白家族多肽的突变蛋白、glubody、基于锚蛋白支架的蛋白质、基于晶体支架的蛋白质、adnectin、和亲和多聚体。65.根据权利要求50以及60至64中任一项所述的方法去，其特征在于，所述B细胞上的辅助分子是CD40。66.根据权利要求65所述的方法去，其特征在于，所述第二试剂是CD40配体(CD154)或CD137。67.一种用于扩增细胞群的试剂盒，所述试剂盒包括(i)多聚化剂，其中，所述多聚化剂包含至少一个结合位点Z用于第一试剂的可逆结合，(ii)第一试剂，所述第一试剂与细胞表面受体分子结合，由此向细胞提供初级激活信号从而激活细胞，其中，所述第一试剂包含至少一个结合配偶体C1，其中所述结合配偶体C1能够与多聚化剂的结合位点Z1可逆结合，其中所述第一试剂通过结合配偶体C1和结合位点Z1之间形成的可逆键与多聚化剂相结合，以及(iii)第二试剂，所述第二试剂刺激细胞表面辅助分子，其中，所述第二试剂包含结合配偶体C2，其中所述结合配偶体C2能够与多聚化剂的结合位点Z2可逆结合，其中所述第二试剂通过结合配偶体C2和结合位点Z2之间形成的键与多聚化剂相结合，其中，所述第二试剂与细胞表面辅助分子结合，从而刺激已激活的细胞。68.一种用于扩增细胞群的试剂盒，所述试剂盒包括(i)多聚化剂，其中，所述多聚化剂是可溶形式的，并且包含至少一个结合位点Z用于第一试剂的可逆结合，(ii)第一试剂，所述第一试剂与细胞表面受体分子结合，由此向细胞提供初级激活信号从而激活细胞，其中，所述第一试剂包含至少一个结合配偶体C1，其中所述结合配偶体C1能够与多聚化剂的结合位点Z1结合，其中所述第一试剂通过结合配偶体C1和结合位点Z1之间形成的可逆键与多聚化剂相结合。69.根据权利要求68所述的试剂盒，其进一步包括(iii)第二试剂，所述第二试剂刺激细胞表面辅助分子，其中，所述第二试剂包含结合配偶体C2，其中所述结合配偶体C2能够与多聚化剂的结合位点Z2结合，其中所述第二试剂通过结合配偶体C2和结合位点Z2之间形成的键与多聚化剂相结合。70.根据权利要求67至69中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞群是淋巴细胞群。71.根据权利要求70所述的试剂盒，其特征在于，所述淋巴细胞群是B细胞群、T细胞群或天然杀伤细胞群。72.根据权利要求71所述的试剂盒，其特征在于，所述T细胞群是抗原特异性T细胞群、辅助T细胞群、细胞毒性T细胞，记忆T细胞、调节性T细胞或天然杀伤T细胞。73.根据权利要求67至72所述的试剂盒，其特征在于，所述第一试剂包括MHCI:肽复合物，或者，其特征在于，所述第一试剂刺激T细胞中的TCR/CD3复合物相关信号。74.根据权利要求73所述的试剂盒，其特征在于，所述第一试剂是与CD3特异性结合的结合剂。75.根据权利要求72至74中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述T细胞上的辅助分子是CD28。76.根据权利要求75所述的试剂盒，其特征在于，所述结合辅助分子的第二试剂是与CD28特异性结合的结合剂。77.根据权利要求74至76中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述与CD3特异性结合的第一结合剂选自抗CD3抗体、抗CD3抗体的二价抗体片段、抗CD3抗体的单价抗体片段和具有抗体样结合特性的蛋白质CD3结合分子，和/或，其特征在于，所述与CD28特异性结合的第二试剂选自抗CD28抗体、抗CD28抗体的二价抗体片段、抗CD28抗体的单价抗体片段和具有抗体样结合特性的蛋白质CD28结合分子。78.根据权利要求67所述的试剂盒，其特征在于，所述多聚化剂被固定在固体表面上。79.根据权利要求78所述的试剂盒，其特征在于，所述固体表面...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·杰梅罗特，C·施滕贝尔，
申请(专利权)人：朱诺治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE