具有内切葡聚糖酶活性的多肽制造技术

本发明专利技术涉及具有黄原胶降解活性的内切葡聚糖酶和编码该内切葡聚糖酶的多核苷酸。本发明专利技术还涉及包括该多核苷酸的核酸构建体、载体、和宿主细胞，连同生产和使用这些内切葡聚糖酶的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对序列表的引用本申请包括计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。专利技术背景专利
本专利技术涉及具有内切葡聚糖酶活性的多肽，特别涉及具有内切葡聚糖酶活性并对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性的多肽，和编码这些多肽的多核苷酸。本专利技术还涉及包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体、和宿主细胞连同产生和使用这些多肽的方法。本专利技术进一步涉及包括用于洗涤剂和用于钻井和石油工业的多肽和任选的黄原胶裂解酶的组合物。相关技术说明黄原胶是一种来源于野油菜黄单胞菌的细菌包被的多糖。黄原胶通过由野油菜黄单胞菌细菌发酵葡萄糖、蔗糖或乳糖而产生。在发酵周期后，用异丙醇将该多糖从生长培养基中沉淀，干燥，并磨成细粉。稍后，将该粉末添加至液体介质中，以形成胶质。黄原胶由五糖亚基组成，形成纤维素主链，其三糖侧链由通过α1,3键附接到主链中的交替葡萄糖残基的甘露糖(β1,4)葡萄糖醛酸(β1,2)甘露糖组成。该生物聚合物由于其优异的假塑性，触变性和粘度而具有巨大的商业意义。目前，其广泛用作食品和非食品工业中的增稠剂或增粘剂，并且用作多种多样的悬浮液，乳液和泡沫的稳定剂。近年来，黄原胶已经被用作许多消费品中的成分，包括食品(例如在沙拉酱(salatdressing)和乳制品中作为增稠剂)和化妆品(例如在牙膏和化妆品中作为稳定剂和增稠剂，以阻止成分分离)和化妆品(例如防晒霜)。另外的黄原胶已经在石油工业中发现用途，其中黄原胶被大量使用以增稠钻井泥浆。这些流体用于将由钻头切割的固体携带回表面。当循环停止时，固体仍保持悬浮在钻井流体中。水平钻井的广泛使用和对钻井固体的良好控制的需求已经导致其扩大使用。它还被添加到自固化混凝土中，包括倒在水下的混凝土，以增加其粘度。黄原胶的广泛使用已导致希望降解和/或改性黄原胶的溶液或凝胶。黄原胶的完全酶降解需要若干酶活性，包括黄原胶裂解酶活性和内切-β-1,4-葡聚糖酶活性。黄原胶裂解酶是切割黄原胶的β-D-甘露糖基-β-D-1,4-葡萄糖醛酸基键,由此去除末端丙酮酸甘露糖的酶。两种分离自溶藻弧菌类芽孢杆菌XL-1的黄原胶裂解酶(例如，Ruijssenaars(鲁基森纳斯)等人.(1999)‘Apyruvatedmannose-specificxanthanlyaseinvolvedinxanthandegradationbyPaenibacillusalginolyticusXL-1(在由溶藻弧菌类芽孢杆菌XL-1降解黄原胶中涉及的一种丙酮酸甘露糖特异性黄原胶裂解酶)’，Appl.Environ.Microbiol.(应用与环境微生物)65(6):2446-2452，和Ruijssenaars(鲁基森纳斯)等人.(2000)，‘AnovelgeneencodingxanthanlyaseofPaenibacillusalginolyticusstrainXL-1(一种编码溶藻弧菌类芽孢杆菌菌株XL-1的黄原胶降解酶的新颖基因)’，Appl.Environ.Microbiol.(应用与环境微生物)66(9):3945-3950)。具有内切-β-1,4-葡聚糖酶活性的酶在去除末端丙酮酸甘露糖后必须能够切割黄原胶的高度取代的主链。已知这类酶来自糖基水解酶家族GH9(WO2013/167581)。专利技术概述诸位专利技术人已经惊奇地发现了一个新组的酶，该新组的酶具有内切-β-1,4-葡聚糖酶活性并且能够切割黄原胶的高度取代的骨架–并且其不属于已知包括这种酶活性的糖基水解酶家族。这些酶与具有黄原酸降解活性的任何已知的酶没有显着的序列相似性，并且不能分配至已知的糖基水解酶家族。新组的内切葡聚糖酶通过与专利申请号EP14170186.2的SEQIDNO2中披露的和本文SEQIDNO42中显示的多肽的氨基酸序列比对来鉴定。本专利技术提供了用于降解黄原胶的新的且改进的酶以及此类酶用于清洁目的(例如去除黄原胶污物)以及在钻探和石油工业中的用途。由于酶对纤维素也具有显着的活性，所以酶也可以用于降解纤维素材料的过程中，例如，在纤维素生物质的降解中用于生产，例如，可发酵糖。因此，本专利技术涉及具有内切葡聚糖酶活性和/或对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性的多肽，这些多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)与SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36、SEQIDNO:38、和SEQIDNO:40中任一项的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多肽；(b)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中严格条件下与(i)SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31、SEQIDNO:33、SEQIDNO:35、SEQIDNO:37、和SEQIDNO:39中任一项的成熟多肽编码序列，(ii)(i)的全长补体杂交；(c)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31、SEQIDNO:33、SEQIDNO:35、SEQIDNO:37、和SEQIDNO:39中任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性；(d)SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，该组合物包括具有内切葡聚糖酶活性和/或对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性的多肽，该多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38、和SEQ ID NO:40中任一项的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多肽；(b)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中严格条件下与(i)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37、和SEQ ID NO:39中任一项的成熟多肽编码序列，(ii)(i)的全长补体杂交；(c)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性；(d)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38、和SEQ ID NO:40中任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置包括取代、缺失、和/或插入；和(e)(a)、(b)、(c)、或(d)的多肽的片段，该片段具有内切葡聚糖酶活性并且对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.28 EP 14170309.0;2014.05.28 EP 14170186.2;1.一种组合物，该组合物包括具有内切葡聚糖酶活性和/或对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性的多肽，该多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)与SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36、SEQIDNO:38、和SEQIDNO:40中任一项的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多肽；(b)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中严格条件下与(i)SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31、SEQIDNO:33、SEQIDNO:35、SEQIDNO:37、和SEQIDNO:39中任一项的成熟多肽编码序列，(ii)(i)的全长补体杂交；(c)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQIDNO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性；(d)SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36、SEQIDNO:38、和SEQIDNO:40中任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置包括取代、缺失、和/或插入；和(e)(a)、(b)、(c)、或(d)的多肽的片段，该片段具有内切葡聚糖酶活性并且对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性。2.如权利要求1所述的组合物，其中该多肽是SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员：K詹森，KM施诺，J萨洛蒙，B亨里萨特，L莫非，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK