分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法技术

本发明专利技术提供了一种分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法，采用辛烷基键合硅胶为固定相，以流动相A-缓冲液、流动相B-有机溶剂的混合溶剂作为流动相，进行梯度洗脱。采用该方法可以将苯甲酸阿格列汀与有关物质在同一色谱条件下进行快速高效的分离，该检测方法专属性强、精密度高、准确性强、操作方便，可有效控制药品质量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化学分析领域，具体而言，本专利技术涉及分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法。
技术介绍
苯甲酸阿格列汀(Alogliptinbenzoate，结构如式1所示)是由日本武田(Takeda)公司原研的DPP-IV抑制剂，能高度选择性地显著抑制DPP-IV，维持体内GLP-1和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)的水平，促进胰岛素的分泌，从而发挥降糖疗效。2010年4月苯甲酸阿格列汀获得日本厚生劳动省的上市批准，原研厂家的苯甲酸阿格列汀(NESINA)为薄膜包衣片剂，有3种制剂规格，规格不同颜色不同(25mg黄色；12.5mg微黄色；6.25mg淡赤色)。3种规格制剂片芯颜色为白色。式1现有技术中专利CN103156819A提出参照苯甲酸阿格列汀原料的检测方法进行有关物质测定，然而，本课题组成员在成品的质量检测中发现，阿格列汀主峰后经常出现一未知杂质，此未知杂质在原料检测及方法学验证中并未发现，而在制剂有关物质方法学研究精密度试验中，采用原料的有关物质分析方法检测发现此杂质因为离阿格列汀主峰太近，在精密度实验中同一批次的6份样品中该杂质重现性较差，并出现被不准确积分现象。在后续的制剂稳定性研究中发现，如果延续使用苯甲酸阿格列汀原料的有关物质方法，将会影响制剂中有关物质的正确评估。因此，为了准确的控制苯甲酸阿格列汀制剂的质量，有必要寻找一种简单、快速、准确在分离检测出苯甲酸阿格列汀及其有关物质的方法。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法，从而实现对苯甲酸阿格列汀制剂质量的有效控制。苯甲酸阿格列汀制剂中的有关物质包括：另发现阿格列汀主峰后常跟随有一未知杂质A。在氧化降解后的样品中更易出现。本专利技术提供了一种分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括：(1)色谱条件：采用辛烷基键合硅胶为固定相，流动相A为缓冲液、流动相B为有机溶剂，以A、B的混合溶剂作为流动相，进行梯度洗脱；(2)样品溶液的配制：采用流动相A将待测样品配制成样品溶液；(3)分离分析：将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质检测。其中，梯度洗脱见下表：时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)085153851520-2580－4020－60268515308515专利技术人调整流动相比例，并经过实施例中的强制降解试验对方法进行研究。重点选用氧化降解样品(因为氧化条件降解杂质数最多)，在方法摸索中我们惊奇的发现调整流动相比例能使有关物质检测中该未知杂质A与阿格列汀的分离度大于1.5，高效分离且不影响其它3个杂质(ALO-IMP-01、ALO-IMP-02、ALO-IMP-03)出峰。采用该方法可以将苯甲酸阿格列汀与有关物质在同一色谱条件下进行快速高效的分离，该检测方法专属性强、精密度高、准确性强、操作方便，可有效控制药品质量。根据本专利技术实施例的分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法，还可以具有以下附加技术特征：根据本专利技术的实施例，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液，优选为磷酸二氢钠缓冲液、磷酸二氢钾缓冲液中的至少一种，最优选为磷酸二氢钾缓冲液。根据本专利技术的具体实施例，所述缓冲液浓度优选为0.02mol/L－0.05mol/L，最优选为0.04mol/L。根据本专利技术的具体实施例，所述缓冲液含0.3体积比％的三乙胺。三乙胺可以改善峰形。根据本专利技术的具体实施例，所述缓冲液的pH值为2－4，优选为2.5－3.5，最优选为3.0。根据本专利技术的实施例，所述有机溶剂选自甲醇、乙腈中的至少一种，优选为乙腈。根据本专利技术的具体实施例，所述流动相为有机相与磷酸盐缓冲液的混合溶剂梯度洗脱，梯度洗脱到20－25min时，调节缓冲液所占体积比在40－80％这一范围值内，对应调节有机溶剂体积比为20－60％。根据本专利技术的具体实施例，梯度洗脱到20-25min时，优选将缓冲液所占体积比调节在60－80％这一范围值内，对应调节有机溶剂体积比为20－40％。根据本专利技术的具体实施例，梯度洗脱到20-25min时，最优选方案为调节缓冲液所占体积比为80％，有机溶剂所占体积比为20％。由此得到的分离效果最佳。根据本专利技术的实施例，检测条件为：流动相流速0.8mL/min－1.2mL/min，优选为1.0mL/min。检测波长为250－280nm，优选为278nm。柱温为25℃－35℃，优选为30℃。本专利技术所述的分析分离方法，可以依照以下方法实现：1)取待测样品磨碎，称取适量，用缓冲液溶解，配成每1mL含300μg的样品溶液。2)流动相流速为0.8mL/min-1.2mL/min，优选为1.0mL/min。检测波长为250-280nm，优选为278nm。柱温为25℃-35℃，优选为30℃。3)取1)的样品溶液进样量为2～20μL，优选为10μL注入液相色谱仪，完成苯甲酸阿格列汀制剂的有关物质测定。与现有技术相比，本专利技术方法的洗脱分离效果更好，能使样品中各色谱峰有效分离。专利CN103156819A中检测时间为40min，本申请仅需30min，较现有技术的时间更短，更有效率。可以准确、可靠的分离苯甲酸阿格列汀及相邻的降解杂质。附图说明图1显示了根据本专利技术的实施例1，所得氧化降解样品的高效液相色谱图；图2显示了根据本专利技术的实施例1，所得有关物质定位的高效液相色谱图；以及图3显示了根据本专利技术的实施例2，所得氧化降解样品的高效液相色谱图；图4显示了根据本专利技术的实施例3，所得氧化降解样品的高效液相色谱图；图5显示了根据本专利技术的实施例4，所得氧化降解样品的高效液相色谱图。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。本专利技术实施例中所用的苯甲酸阿格列汀片均为申请人自制，由苯甲酸阿格列汀原料、甘露醇、微晶纤维素、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁组成。实施例1仪器：Agile本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法，其特征在于，包括：(1)色谱条件：采用辛烷基键合硅胶为固定相，流动相A为缓冲液、流动相B为有机溶剂，以A、B的混合溶剂作为流动相，进行梯度洗脱，梯度洗脱见下表；(2)样品溶液的配制：采用流动相A将待测样品配制成样品溶液；(3)分离分析：将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质检测时间/min流动相A/％流动相B/％085153851520－2580－4020－60268515308515。

【技术特征摘要】
1.一种分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法，其特征在于，包括：
(1)色谱条件：采用辛烷基键合硅胶为固定相，流动相A为缓冲液、流动相B为有机溶
剂，以A、B的混合溶剂作为流动相，进行梯度洗脱，梯度洗脱见下表；
(2)样品溶液的配制：采用流动相A将待测样品配制成样品溶液；
(3)分离分析：将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质
检测
时间/min
流动相A/％
流动相B/％
0
85
15
3
85
15
20－25
80－40
20－60
26
85
15
30
85
15
。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液，优选为
磷酸二氢钠缓冲液、磷酸二氢钾缓冲液中的至少一种，最优选为磷酸二氢钾缓冲液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，缓冲液...

【专利技术属性】
技术研发人员：祝小芬，钱丽娜，王珍，刘大鹏，崔健，
申请(专利权)人：中美华世通生物医药科技武汉有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42