一种副猪嗜血杆菌菌株制造技术

本发明专利技术提供一种副猪嗜血杆菌菌株，所述菌株为副猪嗜血杆菌菌株LY02(Haemophilus parasuis)，于2015年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.11145。菌株LY02能够用于参与制备防治多种血清型的副猪嗜血杆菌引起的疾病的疫苗，最终所制得的疫苗安全性及防治能力均良好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌菌株。
技术介绍
副猪嗜血杆菌病曾一度被认为是由应激引起的仔猪条件性、散发性疾病，随着养猪工业化、集约化程度的提高，如今其已成为危害仔猪和生长猪最严重的细菌性疾病。副猪嗜血杆菌主要危害2～28周龄的仔猪和生长猪，以5-8周龄断奶保育仔猪危害最为严重，引起多发性浆膜炎、关节炎等症状，发病率高达15％～90％，死亡率有时可高达90％。起初副猪嗜血杆菌被称为猪嗜血杆菌或猪流感嗜血杆菌，后来证实其生长不需要X因子(血红素和其他卟啉类的物质)，因而改名为副猪嗜血杆菌。副猪嗜血杆菌具有多形态性，生长时严格需要NAD或V因子，血清型复杂多样，根据同型细菌外膜蛋白抗原的不同，至少可分为15种血清型，另有20％以上的分离株不能分型；而且不同国家或地区的流行血清型不同，据蔡旭旺等报道，认为我国当前流行的血清型主要有4，5，12，13型，但不同地方的优势血清型有所不同，所以对病的防控增加难度。根据我国血清流行病学调查和分离菌株的鉴定，以4、5型最为流行，其次是12型、13型。近年来，各副猪嗜血杆菌血清群之间交互免疫力不强，接种的疫苗菌株血清群与当时当地流行的副猪嗜血杆菌病的病原血清群不相符，给副猪嗜血杆菌的预防和治疗带来了一定的难度。目前国内用于副猪嗜血杆菌病免疫预防的疫苗有勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司生产的副猪嗜血杆菌病灭活疫苗(Z-1517株)，西班牙海博莱生物大药厂生产的猪副猪嗜血杆菌病1型和6型灭活疫苗，华中农业大学、武汉科前动物生物制品有限责任公司、中牧实业股份有限公司生产的副猪嗜血杆菌病4型和5型灭活疫苗；这些疫苗的应用起到了一定的预防作用，而该病的病原流行株和多种血清型感染已经使现有疫苗很难达到预期的免疫效果，因此，用于参与制备防治多种血清型副猪嗜血杆菌病原引起的副猪嗜血杆菌病疫苗的合适毒株是从业人员所迫切需要解决的问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种副猪嗜血杆菌菌株LY02(Haemophilusparasuis)，于2015年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.11145。本专利技术是通过以下技术方案解决上述技术问题的：2012年，申请人在无菌条件下采集福建省龙岩市永定某猪场中疑似Hps发病仔猪的肺脏、关节积液、气管，并分别划线接种于TSA培养基，置于37℃恒温培养箱中，烛缸厌氧培养24-48h，将培养获得的菌株进行理化特性与分子学鉴定，最终确定其为副猪嗜血杆菌菌属的一个菌株。本专利技术的有益效果在于：提供一种副猪嗜血杆菌菌株LY02(Haemophilusparasuis)，该菌株能够用于参与制备防治多种血清型的副猪嗜血杆菌引起的疾病的疫苗，最终所制得的疫苗安全性及防治能力均良好。【附图说明】下面参照附图结合实施例对本专利技术作进一步的描述。图1是本专利技术实施例1-5中PCR产物的1.0％琼脂糖凝胶电泳图。【具体实施方式】本专利技术中副猪嗜血杆菌菌株LY02(Haemophilusparasuis)是2012年时将采集自福建省龙岩市永定某猪场中疑似Hps发病仔猪的肺脏、关节积液进行培养得到的菌株。且需要说明的是，本专利技术中还涉及了其它几个菌株，分别为副猪嗜血杆菌菌株LYD1、副猪嗜血杆菌菌株LYH5、副猪嗜血杆菌菌株LYW1及副猪嗜血杆菌菌株LYC2。副猪嗜血杆菌菌株LYD1(Haemophilusparasuis)于2015年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.11143；副猪嗜血杆菌菌株LYH5(Haemophilusparasuis)于2015年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.11144；副猪嗜血杆菌菌株LYW1(Haemophilusparasuis)于2015年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.11146；副猪嗜血杆菌菌株LYC2(Haemophilusparasuis)于2015年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.11147。为了对本专利技术进行详细阐述说明，申请人给出了如下具体实施例为了对本专利技术进行详细阐述说明，申请人给出了如下具体实施例。实施例1菌株LY02的分离与鉴定1、菌株LY02的分离：2012年，申请人在无菌条件下采集福建省龙岩市永定某猪场中疑似Hps发病仔猪的肺脏、关节积液、气管，并分别划线接种于TSA培养基，置于37℃恒温培养箱中，烛缸厌氧培养24-48h，将培养获得的菌株命名为菌株LY02。2、菌株LY02的鉴定：初步鉴定：将所获得的菌株LY02进行形态学与生化特性的测定，结果如下：呈革兰氏阴性，细小杆菌，具有多种不同的形态，从单个的球杆菌到长的、细长的、以致丝状的菌体；无溶血现象、分离株不产生吲哚，能发酵葡萄糖、果糖、蔗糖，不发酵木糖、L-阿拉伯糖、乳糖、棉子糖，接触酶、尿素酶试验阴性，对甘露糖生化反应不稳定，生长均需要V因子而不需要X因子；因此，可初步认定菌株LY02属于副猪嗜血杆菌菌属。进一步鉴定：提取模板：挑取菌株LY02的单菌落进行亚克隆培养，用灭菌的双蒸水小心刮洗菌苔并置于1.5mL离心管中，之后于12000rpm下离心30s，弃上清，保留细胞沉淀；接着加入567μLTE悬浮沉淀，用等体积第一抽提液(体积比为25∶24∶1的酚∶氯仿∶异戊醇)抽提，使两相完全混合，冰浴10分钟；然后12000rpm离心10分钟，吸取上清液，等体积第二抽提液(体积比为24∶1的氯仿∶异戊醇)再抽提1次，至溶液中有絮状的DNA沉淀出现；将DNA沉淀转移到1mL70％乙醇中洗涤，再于65℃干燥箱中干燥2分钟；最后用50-100μLTE缓冲液(含20μg/mLRNase)溶解DNA沉淀，即为所需的模板，4℃保存备用。PCR鉴定：委托上海生工生物工程有限公司合成上游引物P1(如SEQIDNO：1所示)：5'-GTGATGAGGAAGGGTGGTGT-3'；下游引物P2(如SEQIDNO：2所示)：5'-GGCTTCGTCACCCTCTGT-3'。以本实施例提取所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种副猪嗜血杆菌菌株，其特征在于：所述菌株为副猪嗜血杆菌菌株LY02(Haemophilus parasuis)，于2015年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.11145。

【技术特征摘要】
2015.09.17 CN 20151059189021.一种副猪嗜血杆菌菌株，其特征在于：所述菌株为副猪嗜血杆菌菌株LY02
(Haem...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨小燕，李晓华，刘建奎，尹会方，
申请(专利权)人：龙岩学院，
类型：发明
国别省市：福建;35