一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基及诱导方法技术

本发明专利技术提供一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基及其诱导方法，属于植物组织培养技术领域，该培养基以MS培养基为基础培养基，并添加了PAA（苯乙酸）、6-BA（6-苄基腺嘌呤）、香蕉泥、蔗糖和琼脂粉，该方法在外植体消毒时使用PAA（苯乙酸）作为消毒剂，本发明专利技术提供的培养基和诱导方法具有外植体成活率高、诱导率的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养
，特别涉及一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，还涉及一种提高藏红花愈伤组织诱导率的诱导方法。
技术介绍
藏红花是一种名贵的中草药，由于其只是柱头入药，产量极低，同时又因为其资源极其有限，但用途广泛，致使其价格昂贵，一直被誉为“植物黄金”，所以对藏红花的快速繁殖研究极其重要。目前的藏红花快速繁殖方法多数采用组织培养，但是目前的组织培养第一个环节外植体诱导中藏红花的诱导率很低，造成大量的外植体浪费，也严重影响藏红花的组培快繁效率。
技术实现思路
基于现有技术存在上述问题，本专利技术提供一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基及其诱导方法，该培养基以MS培养基为基础培养基，并添加了PAA（苯乙酸）、6-BA（6-苄基腺嘌呤）、香蕉泥、蔗糖和琼脂粉，该方法在外植体消毒时使用PAA（苯乙酸）作为消毒剂，本专利技术提供的培养基和诱导方法具有外植体成活率高、诱导率的优点。一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，其以MS培养基为基础培养基，并添加了PAA（苯乙酸）、6-BA（6-苄基腺嘌呤）、香蕉泥、蔗糖和琼脂粉。PAA（苯乙酸）的浓度为1-4mg/L、6-BA（6-苄基腺嘌呤）的浓度为2-6mg/L、香蕉泥的浓度为100-400mg/L、蔗糖的浓度为30-90g/L和琼脂粉的浓度为5-8g/L。PAA（苯乙酸）的浓度为2-3mg/L、6-BA（6-苄基腺嘌呤）的浓度为3-5mg/L、香蕉泥r>150-250mg/L、蔗糖的浓度为40-70g/L和琼脂粉的浓度为6-7g/L。提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基的pH值是5.5-6.5。一种使用上述提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基的诱导方法，其包括以下步骤：步骤S10：取当年生的新鲜藏红花小球茎为外植体，置于-4℃冰箱中低温春化48小时，取出小球茎用水冲洗干净，用滤纸吸干表面水分，备用；步骤S20：将步骤S10所得的小球茎用浓度为75%酒精摇动浸泡30秒，取出小球茎，用蒸馏水冲洗3次，再使用1%的HgCl2浸泡4分钟，取出小球茎，用蒸馏水冲洗3次，再使用10mg/LPAA（苯乙酸）溶液浸泡5分钟，将小球茎取出，备用；步骤S30：将步骤S20所得的小球茎用无菌手术刀切成0.5-1厘米的小块，并接种于上述的提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基中，并放于人工气候箱中进行常规诱导培养。步骤S10还包括步骤S11，用自来水冲洗干净表面泥土、表皮膜和病斑；步骤S12再用蒸馏水浸泡冲洗1分钟。本专利技术的有益效果是：PAA（苯乙酸）是一种植物生长调节剂，同时具有一定的灭菌作用，在外植体消毒先使用PAA（苯乙酸）浸泡，既可以更彻底地清理外植体表面的细菌，也可以先一步调节藏红花球茎的生理状态，以方便后续诱导培养；另外在培养基刚添加了PAA（苯乙酸）和香蕉泥，PAA（苯乙酸）替代了常用的2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸），更好地促进外植体脱分化，香蕉泥中具有多种维生素和天然植物激素，可以进一步促进诱导藏红花愈伤组织。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的描述。实施例一：配制提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基。根据表1所示的MS培养基成分和用量以及表2所示的提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基成分和用量，配制本专利技术所述的提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基。用天平称取MS培养基中的各成分以及PAA（苯乙酸）、6-BA（6-苄基腺嘌呤）、香蕉泥、蔗糖和琼脂粉，置于三角瓶中，加入适量蒸馏水，搅拌溶解，并用HCL和KOH调节pH值至6.0，定容至1000mL。将三角瓶封口，置于高压灭菌锅中，于121℃灭菌20min，然后置于超净工作台中自然冷却，备用。将冷却到50-60℃时将培养基分装至组织培养瓶中，晾凉，待其凝固后将组织培养瓶封口，备用。表1MS培养基的成分和用量。表2提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基成分及用量。实施例二：藏红花球茎诱导培养。按实施例一所述的方法配制提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，备用。取当年生的新鲜、健康的藏红花小球茎为外植体，置于-4℃的冰箱中低温春化48小时，然后取出小球茎用水冲洗干净，用滤纸吸干表面水分，备用。将上述所得的小球茎用浓度为75%酒精摇动浸泡30秒，取出小球茎，用蒸馏水冲洗3次，再使用1%的HgCl2浸泡4分钟，再取出小球茎，用蒸馏水冲洗3次，再使用10mg/LPAA（苯乙酸）溶液浸泡5分钟，将小球茎取出，备用。将上述所得的小球茎用无菌手术刀切成0.5-1厘米的小块，并接种于配制好的提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基中，每块外植体间隔1-1.5厘米，并放于人工气候箱中进行常规诱导培养，培养环境条件是，光照/黑暗时间：14/10小时，培养温度是23℃。培养到30天的时候将外植体取出更换新培养基，直至70日统计愈伤组织诱导率，到第45日开始有外植体成功诱导出愈伤组织，到70日时愈伤组织诱导率达到98%，比对照组的诱导时间提早了10日，且诱导率提高了10%以上。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，其特征在于，其以MS培养基为基础培养基，并添加了PAA（苯乙酸）、6‑BA（6‑苄基腺嘌呤）、香蕉泥、蔗糖和琼脂粉。

【技术特征摘要】
1.一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，其特征在于，其以MS培养基为基础培养
基，并添加了PAA（苯乙酸）、6-BA（6-苄基腺嘌呤）、香蕉泥、蔗糖和琼脂粉。
2.根据权利要求1所述的一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，其特征在于，PAA
（苯乙酸）的浓度为1-4mg/L、6-BA（6-苄基腺嘌呤）的浓度为2-6mg/L、香蕉泥的浓度为100-
400mg/L、蔗糖的浓度为30-90g/L和琼脂粉的浓度为5-8g/L。
3.根据权利要求2所述的一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，其特征在于，PAA
（苯乙酸）的浓度为2-3mg/L、6-BA（6-苄基腺嘌呤）的浓度为3-5mg/L、香蕉泥的浓度为150-
250mg/L、蔗糖的浓度为40-70g/L和琼脂粉的浓度为6-7g/L。
4.根据权利要求1至3其中之一所述的一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，其特
征在于，提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基的pH值是5.5-6.5。...

【专利技术属性】
技术研发人员：何志铿，
申请(专利权)人：佛山市金蓝领教育科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44